【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备负载mRNA的脂质纳米颗粒的改进方法相关申请的交叉引用本申请要求于2018年8月29日提交的美国临时申请序列号62/724,582以及于2018年8月31日提交的美国临时申请序列号62/725,765的优先权，将这些美国临时申请中每一个的内容并入本文。以引用方式并入序列表于2019年8月16日创建并且大小为17KB的命名为“MRT_2030WO_Seq_Listing_ST25.txt”的文本文件的内容据此整体以引用方式并入。
技术介绍
信使RNA疗法(MRT)正在成为治疗多种疾病的越来越重要的方法。MRT涉及向需要所述疗法的患者施用信使RNA(mRNA)，以在患者体内产生由所述mRNA编码的蛋白质。通常将脂质纳米颗粒用于封装mRNA以实现mRNA的有效体内递送。为了改善脂质纳米颗粒的递送，许多努力集中在鉴定可以影响例如在各种类型的哺乳动物组织、器官和/或细胞(例如，哺乳动物肝细胞)中的细胞内递送和/或mRNA表达的新型脂质或特定脂质组合物上。但是，这些现有方法昂贵、费时且不可预测。专利...
【技术保护点】
1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括：/n混合包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液，使得形成包封mRNA的脂质纳米颗粒，/n其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和/或所述mRNA以不大于0.5mg/ml的浓度存在于所述溶液中。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180829 US 62/724,582;20180831 US 62/725,7651.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒中的方法，所述方法包括：
混合包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液，使得形成包封mRNA的脂质纳米颗粒，
其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和/或所述mRNA以不大于0.5mg/ml的浓度存在于所述溶液中。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml或0.01mg/ml的浓度存在。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述mRNA以不大于0.4mg/ml、0.3mg/ml、0.25mg/ml、0.2mg/ml、0.15mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml、或0.01mg/ml的浓度存在于所述溶液中。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.1mg/ml的浓度存在于所述溶液中。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒和所述mRNA中的每一者以不大于0.05mg/ml的浓度存在于所述溶液中。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括稀释所述溶液以达到不大于0.5mg/ml的浓度的步骤。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒包含PEG修饰的脂质。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的小于3％、小于2.5％、小于2％、小于1.5％或小于1％。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的0.1％至3％、或0.75％至2.5％、或0.5％至2％。
10.如权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述PEG修饰的脂质占所述脂质纳米颗粒中的总脂质的约1％。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于10mM的柠檬酸盐。
12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述包含预先形成的脂质纳米颗粒和mRNA的溶液包含小于25％的非水性溶剂。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述混合之后将所述脂质纳米颗粒和所述mRNA加热至高于环境温度的温度。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述混合之前将所述mRNA和/或所述预先形成的脂质纳米颗粒加热至高于环境温度的温度。
15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述温度为或大于约30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃或70℃。
16.如权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述温度在约25-70℃、约30-70℃、约35-70℃、约40-70℃、约45-70℃、约50-70℃或约60-70℃的范围内。
17.如权利要求13-16中任一项所述的方法，其中所述温度为约65℃。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述预先形成的脂质纳米颗粒通过将溶解在乙醇中的脂质与水性溶液混合而形成。
19.如权利要求18所述的方法，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·卡夫，Z·帕特尔，Y·张，A·萨罗德，R·L·鲍尔，F·德罗莎，M·哈特莱因，
申请(专利权)人：川斯勒佰尔公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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