用于治疗Ⅰ型糖尿病的自体外周血干细胞的提取方法技术

本发明专利技术公开一种用于治疗Ⅰ型糖尿病的自体外周血干细胞的提取方法，包括如下步骤：步骤A1、收集外周静脉血，于超净工作台中与PBS平衡溶液混匀，得到血浆；步骤A2、离心后上清液分为3层，吸出中间白膜层，加至装有PBS平衡液的离心管中，加入PBMC培养基，混匀后加入到24孔板中，每个孔1mL；步骤A3、每天用counterstar细胞计数板为单个核细胞计数，用PBMC培养基重悬细胞，其中每孔0.5ml加入到24孔板中；步骤A4、重悬结束后，去除PBMC培养基，利用生理盐水连续漂洗3遍；诱导培养在37℃、5％CO2的培养箱中进行，时间为48

【技术实现步骤摘要】
用于治疗Ⅰ型糖尿病的自体外周血干细胞的提取方法


[0001]本专利技术属于干细胞的提取
，具体涉及用于治疗Ⅰ型糖尿病的自体外周血干细胞的提取方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病病人由于产生胰岛素障碍或胰岛素不能发挥生理作用引起糖代谢紊乱导致微血管病变，引起肢体坏死、失明和肾功能衰竭等一系列严重的并发症。目前尚无根治糖尿病的方法，但通过多种治疗手段可以控制好糖尿病，胰岛素治疗是其中一种有效的方法。虽然采用胰岛素治疗在一定程度上能够改善病人的糖代谢紊乱，然而长期的胰岛素注射不仅在治疗上给病人带来不便，并且这种方法并不能有效地防止或逆转糖尿病引起的微血管病变及其并发症。
[0003]Ⅰ型糖尿病一般是由自体免疫系统破坏产生胰岛素的β细胞导致的；实验表明干细胞注入体内后有明显的趋化性，能较集中地归巢至损伤的胰腺，能重建胰腺局部的免疫平衡，改善胰岛局部的微环境，促进β细胞存活和增殖，体内定向分化形成新的胰岛细胞，最大程度地挽救和恢复胰岛功能，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于治疗Ⅰ型糖尿病的自体外周血干细胞的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤A1、收集外周静脉血，于超净工作台中与PBS平衡溶液混匀，得到血浆，将人淋巴细胞分离液加入高压灭菌后的离心管中，将混匀的血浆缓缓加至分离液面上，在25℃、40
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50kHz条件下离心25
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30min；步骤A2、离心后上清液分为3层，吸出中间白膜层，加至装有PBS平衡液的离心管中，混匀后18℃、40
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50kHz条件下离心5min，弃上清，加入红细胞裂解液，混匀后静止3
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5min，在1000r/min的条件下离心4min，然后倒掉离心管中的红细胞裂解液，加入PBS平衡液混匀后18℃、40
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50kHz条件下离心5min，保留沉淀，加入PBMC培养基，混匀后加入到24孔板中，每个孔1mL；步骤A3、每天用counterstar细胞计数板为单个核细胞计数，半换液培养基，具体操作为每个孔吸出0.5mL培养基，加入离心管中，在1000r/min条件下，离心10min，倒掉上清液，用PBMC培养基重悬细胞，其中每孔0.5ml加入到24孔板中；步骤A4、重悬结束后，去除PBMC培养基，利用生理盐水连续漂洗3遍；诱导培养时，生理盐水用量为20
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30mL/T150瓶，同时加入维生素E，维生素E的用量为5
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10μL/L生理盐水，诱导培养在37℃、5％CO2的培养箱中进行，...

【专利技术属性】
技术研发人员：占震锋，李庆静，
申请(专利权)人：上海南滨江细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：