免去层析的抗体纯化方法技术

本发明专利技术涉及用于纯化抗体的方法，所述方法包括有限数量的步骤，同时仍允许以适当的纯度水平获得高产率的经纯化抗体。简而言之，此方法仅包括过滤和沉淀步骤，而省略了对层析步骤的需要。的需要。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免去层析的抗体纯化方法
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[0001]本专利技术涉及用于纯化抗体的方法，所述方法包括有限数量的步骤，同时仍允许以优异的纯度水平获得高产率的经纯化抗体。简而言之，此方法仅包括过滤和沉淀步骤，而省略了对层析步骤的需要。
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技术介绍

[0002]抗体纯化可能是生物生产中最昂贵的方面之一。抗体(Ab)及其片段通常使用多步骤层析方法来纯化，在每个层析步骤中使用特定的树脂和缓冲液系统。此常规纯化方法包括捕获步骤，随后是离子交换步骤，并且以UF/DF步骤结束。随着细胞培养滴度的增加和将用于生产的细胞培养体积的增加，下游加工被视为工业的瓶颈。这与单克隆抗体(mAb)生产特别相关，在单克隆抗体生产中，重点已从批量容量转移到下游加工能力。此外，早期的临床前和临床阶段研究需要更大量的可以更快地生产的抗体。另外，层析步骤是决定商品成本(CoG)的最重要因素之一。
[0003]本行业探索了减少用于抗体纯化的步骤数量。
[0004]WO 2011/090719公开了用于纯化抗体的方法，所述方法包括2个或3个层析步骤，第一层析步骤涉及使用蛋白A柱，第二层析步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于从溶液中纯化蛋白质的方法，所述方法包括：(a)第一过滤步骤，其包括：(i)使所述溶液通过第一膜，从而产生第一渗透物，其中所述第一膜具有在40kDa与100kDa之间、优选在40kDa与80kDa之间、甚至更优选50kDa标称截留分子量(NMWCO)的孔径；(b)第二过滤步骤，其包括：(i)使用第二膜浓缩在步骤(a)结束时获得的第一渗透物，从而产生包含所述蛋白质的第一渗余物，其中所述第二膜具有在2kDa与50kDa之间、如在4kDa与40kDa之间、在6kDa与30kDa之间、在8kDa与20kDa之间、更优选10kDa或15kDa NMWCO的孔径；(c)沉淀、洗涤和重悬浮步骤，其包括：(i)沉淀在步骤(b)结束时获得的包含所述蛋白质的所述第一渗余物，直到形成包含所述蛋白质的沉淀物；(ii)使用第三膜洗涤包含所述蛋白质的所述沉淀物；(iii)重悬浮在步骤(c)(ii)结束时获得的经洗涤的沉淀物，从而产生包含所述蛋白质的第二渗余物；(iv)使在步骤(c)(iii)结束时获得的包含所述蛋白质的第二渗余物通过所述第三膜而过滤，从而产生包含所述蛋白质的第二渗透物，其中所述第三膜具有在0.05
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0.35μm之间、如0.1
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0.3μm或者在0.15
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0.25μm之间、如0.2μm的孔径；(d)超滤/渗滤(UF/DF)步骤，其包括：(i)使用第四膜渗滤在步骤(c)结束时获得的包含所述蛋白质的第二渗透物，从而产生包含所述蛋白质的第一渗滤物，其中所述第四膜具有在2kDa与50kDa之间、如在4kDa与40kDa之间、在6kDa与30kDa之间、在8kDa与20kDa之间、更优选10kDa或15kDa NMWCO的孔径；(ii)使用所述第四膜浓缩在步骤(d)(i)结束时获得的包含所述蛋白质的第一渗滤物，从而产生包含所述蛋白质的第三渗余物；(iii)使用所述第四膜渗滤步骤(d)(ii)的包含所述蛋白质的第三渗余物，从而产生包含所述蛋白质的第二渗滤物；(e)任选的配制和最终过滤步骤，其包括：(i)在配制缓冲液中配制在步骤(d)结束时获得的包含所述蛋白质的所述第二渗滤物，从而产生包含所述蛋白质的经配制的产物；和(ii)任选地过滤所述经配制的产物；其中所述蛋白质具有在5kDa
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200kDa之间的分子量(MW)，优选地所述蛋白质具有在10kDa与150kDa之间、优选在15kDa与100kDa之间、甚至更优选在15kDa与50kDa之间、如在15kDa
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30kDa之间、如约20kDa的MW。2.根据权利要求1所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中所述第一过滤步骤(a)、和/或所述第二过滤步骤(b)、和/或所述沉淀步骤(c)(i)、和/或所述洗涤步骤(c)(ii)、和/或所述重悬浮步骤(c)(iii)、和/或所述过滤步骤(c)(iv)、和/或所述渗滤步骤(d)(i)、和/或所述浓缩步骤(d)(ii)和/或所述渗滤步骤(d)(iii)以切向流过滤(TFF)或通过正向流过滤(NFF)实施，优选地所有步骤(a)、(b)、(c)(i)、(c)(ii)、(c)(iii)、(c)(iv)、
(d)(i)、(d)(ii)和(d)(iii)在同一个装置中实施，优选以TFF实施。3.根据权利要求1或2所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中所述第一膜、和/或所述第二膜、和/或所述第三膜、和/或所述第四膜包含改性聚醚
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砜(mPES)、再生纤维素、聚丙烯、醋酸纤维素、聚乳酸、陶瓷聚醚
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砜、聚芳砜、聚砜、聚酰亚胺、聚酰胺、聚偏二氟乙烯(PVDF)。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中所述第一过滤步骤(a)包括用2
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4个渗滤体积(DV)、如3个DV的纯化水过滤。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中在所述第一渗透物中有在50％
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100％之间、如在60％
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100％之间、或甚至在80％
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100％之间的所述蛋白质被回收。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中包含所述蛋白质的所述第一渗透物包含比所述溶液少10％
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100％的杂质，如比所述溶液少20％
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100％、30％
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100％、40％
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100％、50％
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100％、60％
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100％、70％
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100％、或甚至80％
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100％的杂质。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的用于从溶液中纯化蛋白质的方法，其中所述第二过滤步骤(b)包括使...

【专利技术属性】
技术研发人员：彼得，
申请(专利权)人：埃博灵克斯股份有限公司，
类型：发明
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