一种蜂毒多肽提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种蜂毒多肽提取物的制备方法和应用。本发明专利技术的蜂毒多肽提取物的所述制备方法包括以下步骤：1)收集蜜蜂毒液，加纯水混合均匀，减压抽滤除去蜜蜂螫针；2)将步骤1)减压抽滤后的滤液冷冻干燥，得到蜂毒多肽粗提物；3)将步骤2)得到的蜂毒多肽粗提物用甲酸

【技术实现步骤摘要】
一种蜂毒多肽提取物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及蜂毒提取
，涉及一种蜂毒提取物及其制备方法和应用，具体涉及一种蜂毒多肽提取物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]蜂毒是工蜂毒腺分泌的一种具有芳香气味的透明液体，主要由多肽类、活性酶类、非肽类物质组成，蛋白质多肽类物质是蜂毒中的主要成分，约占蜂毒的70％-80％。蜂毒肽是由26个氨基酸残基组成的多肽，分子量为2840Da，约占蜂毒干重的50％。蜂毒肽具有抗炎、抑菌、抗癌、抗辐射、抑制血小板凝集等作用，可有效地治疗肩周炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎等多种疾病，在医药领域具有一定的应用。
[0003]蜂毒肽是从蜂毒中分离纯化得来的，具有生物活性高、不污染环境等特点，可以研制开发出机体免疫调节剂等产品，具有很大的市场开发前景，因而引起了学术界广泛的关注。
[0004]用溶媒萃取、三柱层析、溶媒萃取与三柱层析相结合等方法制备蜂毒肽，其产品制备过程繁琐，生产周期较长，有机溶剂使用量大。
[0005]刘岭等(刘岭，李昌全，黄雪强.蜂毒素的纯化方法及体外抗肿瘤作用研究[J].中国生化药物杂质.2003，24(4)：16-17)和杨文超等(杨文超，蜂毒肽的分离纯化及其抗辐射作用机理研究[D]，福建农林大学，2007.)报道了三柱层析法制备蜂毒肽，蜂毒肽得率约为48.67％(质量分数)，纯度为97.32％(质量分数)，纯度较高，解决了有机溶剂用量大的问题，但是提取过程复杂，提取时间较长。
[0006]CN107056913A公开了一种蜂毒肽的分离纯化方法，属于生物
所述蜂毒肽为从蜂毒中提取得来的多肽，采用葡聚糖凝胶色谱、冷冻干燥，结合离心、乙醇沉淀的分离方法，获得蜂毒肽。该专利技术的蜂毒肽，得率较高，生产用时短，工艺简单，纯度为电泳纯。但是，该专利技术的制备方法制得的蜂毒肽的抗氧化性和抗炎活性有待进一步提高。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种蜂毒多肽提取物及其制备方法和应用，本专利技术的制备方法工艺简单，蜂毒多肽提取物的得率高，纯度大，制得的蜂毒多肽提取物具有良好的抗氧化性和抗炎活性。
[0008]本专利技术的目的之一在于提供一种蜂毒多肽提取物，为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]本专利技术的一种蜂毒多肽提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0010]1)收集蜜蜂毒液，加纯水混合均匀，减压抽滤除去蜜蜂螫针；
[0011]2)将步骤1)减压抽滤后的滤液冷冻干燥，得到蜂毒多肽粗提物；
[0012]3)将步骤2)得到的蜂毒多肽粗提物用甲酸-甲酸铵缓冲液溶解后，过色谱凝胶柱进行纯化除杂，得到蜂毒多肽提取物。
[0013]本专利技术的制备方法，采用减压抽滤、冷冻干燥得到蜂毒多肽粗提物，再利用色谱凝胶柱进行低温纯化除杂制备蜂毒多肽提取物，制得的蜂毒多肽提取物具有良好的抗氧化性和抗炎活性，工艺简单、耗时短、成本低、易于工厂化大规模生产。
[0014]步骤1)中，所述蜜蜂毒液的质量与所述纯水的体积比为(1-25)g:100mL，例如所述蜜蜂毒液的质量与所述纯水的体积比为1g:100mL、2g:100mL、3g:100mL、4g:100mL、5g:100mL、6g:100mL、7g:100mL、8g:100mL、9g:100mL、10g:100mL、11g:100mL、12g:100mL、13g:100mL、14g:100mL、15g:100mL、16g:100mL、17g:100mL、18g:100mL、19g:100mL或20g:100mL等。
[0015]优选地，所述纯水的温度为0-15℃，例如纯水的温度为0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃或15℃等。若纯水的温度太高会影响多肽活性，若纯水的温度低会结冰，影响操作。
[0016]步骤1)中，所述减压抽滤的滤纸的孔径为10-25μm，例如减压抽滤的滤纸的孔径为10μm、11μm、12μm、13μm、14μm、15μm、16μm、17μm、18μm、19μm、20μm、21μm、22μm、23μm、24μm或25μm等。
[0017]步骤2)中，所述冷冻干燥的温度为-85～-95℃，例如冷冻干燥的温度为-85℃、-86℃、-87℃、-88℃、-89℃、-90℃、-91℃、-92℃、-93℃、-94℃或-95℃等。
[0018]步骤3)中，所述蜂毒多肽粗提物的质量与所述甲酸-甲酸铵缓冲液的体积比为(1-25)g:100mL，例如所述蜜蜂毒液的质量与所述甲酸-甲酸铵缓冲液的体积比为1g:100mL、2g:100mL、3g:100mL、4g:100mL、5g:100mL、6g:100mL、7g:100mL、8g:100mL、9g:100mL、10g:100mL、11g:100mL、12g:100mL、13g:100mL、14g:100mL、15g:100mL、16g:100mL、17g:100mL、18g:100mL、19g:100mL或20g:100mL等。
[0019]优选地，所述甲酸-甲酸铵缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，即甲酸-甲酸铵缓冲液中甲酸-甲酸铵两者之和的浓度为0.01-0.05mol/L，例如甲酸-甲酸铵缓冲液的浓度为0.01mol/L、0.02mol/L、0.03mol/L、0.04mol/L或0.05mol/L等；pH为5-8，例如pH为5、6、7或8等。
[0020]步骤3)中，所述色谱凝胶柱的型号为G-20～75，例如可以为G-20、G-50、G-75等，选择此类型的色谱凝胶柱使多肽的回收率高，多肽不易失活。
[0021]优选地，所述纯化的温度为0-15℃，例如纯化的温度为0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃或15℃等。
[0022]所述步骤3)之后还包括精提的步骤4)，具体过程为：
[0023]4)将步骤3)得到的蜂毒多肽提取物用超滤浓缩系统进行脱盐、浓缩和冷冻干燥，得到蜂毒多肽精提物。
[0024]步骤4)中，所述超滤浓缩系统采用超滤膜超滤浓缩，所述超滤膜的分子量为1-30KD，例如超滤浓缩系统的超滤膜的分子量为1KD、2KD、3KD、4KD、5KD、6KD、7KD、8KD、9KD、10KD、11KD、12KD、13KD、14KD、15KD、16KD、17KD、18KD、19KD、20KD、21KD、22KD、23KD、24KD、25KD、26KD、27KD、28KD、29KD或30KD等。
[0025]优选地，所述超滤浓缩过程控制超滤蠕动泵的流速为100-250mL/min，例如超滤蠕动泵的流速为100mL/min、110mL/min、120mL/min、130mL/min、140mL/min、150mL/min、160mL/min、170mL/min、180mL/min、19本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂毒多肽提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1)收集蜜蜂毒液，加纯水混合均匀，减压抽滤除去蜜蜂螫针；2)将步骤1)减压抽滤后的滤液冷冻干燥，得到蜂毒多肽粗提物；3)将步骤2)得到的蜂毒多肽粗提物用甲酸-甲酸铵缓冲液溶解后，过色谱凝胶柱进行纯化除杂，得到蜂毒多肽提取物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述蜜蜂毒液的质量与所述纯水的体积比为(1-25)g:100mL；优选地，所述纯水的温度为0-15℃。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述减压抽滤的滤纸的孔径为10-25μm。4.根据权利要求1-3之一所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述冷冻干燥的温度为-85～-95℃。5.根据权利要求1-4之一所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述蜂毒多肽粗提物的质量与所述甲酸-甲酸铵缓冲液的体积比为(1-25)g:100mL；优选地，所述甲酸-甲酸铵缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/L，pH为5-8；优选地，步骤3)中，所述色谱凝胶柱的型号为G-20～75；优选地，所述纯化的温度为0-15℃。6.根据权利要求1-5之一所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)之后还包括精提的步骤4)，具体过程为：4)将步骤3)得到的蜂毒多肽提取物用超滤浓缩系统进行脱盐、浓缩和冷冻干燥，得到蜂毒多肽精提物。7.根据权利要求1-6之一所述的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙怀庆，孙云起，张伟强，聂艳峰，郭朝万，胡露，
申请(专利权)人：广东丸美生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：