一种单面针高效液相色谱鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种单面针高效液相色谱鉴别方法。该方法以木兰花碱为对照品，明确了单面针高效液相色谱的特征峰，可用于鉴别单面针、区分单面针与两面针。该方法重复性好、稳定性好、准确度高，且简单可行、快速、成本低，适合用于区分单面针与两面针，以及单面针药材的质量控制和真伪鉴别。而且该方法安全性好、经济环保，安全，效率高，应用前景好。

【技术实现步骤摘要】
一种单面针高效液相色谱鉴别方法
本专利技术属于医药
更具体地，涉及一种单面针高效液相色谱鉴别方法。
技术介绍
单面针为芸香科(Rutaceae)花椒属(Zanthoxylun)蚬壳花椒(ZanthoxylumdissitumHemsley)和刺壳花椒(Z.echinocarpumHemsley)常绿木质藤本，主要以蚬壳花椒为名始载于《全国中草药汇编》，收载于《中国植物志》、《湖南省中药材标准》、《广西特色中草药资源选编》等中药专著中。民间常用于治疗腰痛、牙痛、跌打损伤、疝气痛、治妇女月经过多等。根、茎、叶均可入药，药用价值高，主治牙痛、腰痛、妇女月经过多，产后月经不调等症。单面针以蚬壳花椒为主作为妇科千金胶囊、妇科千金片等中成药的主要原料药，用途广泛。而两面针做为我国历史悠久的传统中药，也已经被《中国药典》所收录。两面针具有活血化瘀、行气止痛、祛风通络、解毒消肿的功效，主要用于跌扑损伤，胃痛，牙痛，风湿痹痛，毒蛇咬伤；外治烧烫伤等。单面针与两面针的外形极为相似，难以区分，两者的化学成分也较为相似。因单面针缺乏完善的质量控制标准，造成单面针与两面针混淆使用严重的现象。因此，单面针与两面针的比较研究亦越来越受到学者的重视。如本申请人的专利200710064499.2等，为了更好地控制单面针饮片的质量，完善了单面针饮片标准，申请人团队不断对单面针标准进行研究，提升单面针饮片的控制指标，有效保证单面针饮片的质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可用于鉴别单面针与两面针的高效液相色谱检测方法，为区分单面针与两面针，以及单面针药材的质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。本专利技术经过大量实验探索得到一种可用于鉴别单面针与双面针、控制单面针质量和真伪的液相色谱特征峰，构建了鉴别单面针与两面针的高效液相色谱检测方法，重复性好、准确度高，且简单可行、快速、成本低，适合用于区分单面针与两面针，以及单面针药材的质量控制和真伪鉴别。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种单面针高效液相色谱鉴别方法，方法如下：(1)制备供试品溶液：提取溶剂为甲醇，提取方式为超声处理；(2)制备木兰花碱对照品溶液；(3)进行高效液相色谱测定，色谱条件如下：色谱柱为WatersSunFireC18(柱长25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以甲醇为流动相B，以水(0.1％甲酸)为流动相C；流速为0.8-1ml/min；柱温为30℃；检测波长为268nm；梯度洗脱程序为：(4)结果分析色谱图中，在tR＝7.0min±5％处出现1号特征峰的供试品为单面针，两面针无此1号峰。为了更好的控制检测结果的准确性，优选地，步骤(1)中提取溶剂为70％甲醇。优选地，步骤(1)中超声处理的时间45-60min。优选地，步骤(1)中超声处理的条件为100-300W、频率30-50kHz。更优选地，步骤(1)中超声处理是功率200W、频率40kHz条件下超声处理45min。优选地，供试品溶液浓度为0.1-0.16g/ml，木兰花碱对照品溶液浓度为60-100μg/ml。更优选地，供试品溶液浓度为0.1g/ml，木兰花碱对照品溶液浓度为60μg/ml。优选地，步骤(3)中上样量5-10μl(最优5μl)。优选地，步骤(3)中流速为1ml/min。优选地，梯度洗脱程序为：另外，作为一种最优选的方案，所述单面针高效液相色谱检测方法包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备取供试品药材样品，粉碎，过3号筛，精密称取粉末1g，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)45min，放冷，称定重量，以70％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm或0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的木兰花碱对照品适量，置于10ml容量瓶中，加70％甲醇充分溶解，定容，制得浓度为1mg/ml的木兰花碱对照品储备溶液，摇匀，再将其加70％甲醇稀释制成60μg/ml混合溶液，过0.45μm微孔滤膜，即得对照品溶液；(3)高效液相色谱测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定；色谱条件如上文所示；(4)结果分析色谱图中，在tR＝7.0min±5％处，有单面针区分于两面针独有的特征峰，记为1号峰。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种可用于鉴别单面针与两面针的高效液相色谱检测方法，明确了单面针高效液相色谱的特征峰(即色谱图中tR＝7.0min±5％处的1号峰)，可用于鉴别单面针、区分单面针与两面针。该方法重复性好、稳定性好、准确度高，且简单可行、快速、成本低，适合用于区分单面针与两面针，以及单面针药材的质量控制和真伪鉴别，应用前景好。附图说明图1为实施例1中30批单面针HPLC叠加图谱及单个样品色谱图。图2为实施例1中15批两面针HPLC叠加图谱及单个样品的色谱图。图3为单面针及两面针HPLC叠加图及木兰花碱对照品色谱图(268nm)。图4为实施例2的检测波长优化实验中单面针3D图谱。图5为实施例2的检测波长优化实验中木兰花碱的光谱图。图6为实施例2中单面针不同提取溶剂色谱图。图7为实施例2中单面针不同提取方法色谱比较图。图8为实施例2中单面针不同超声时间色谱比较图。图9为实施例3中木兰花碱标准曲线图。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本专利技术所用试剂和材料均为市购。以下实施例所用仪器与材料如下：1、仪器Waterse2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器(Waters公司)。AB204-S型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，KQ-5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DFY-300超高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司)等。2、试剂对照品木兰花碱(成都瑞芬思生物科技有限公司，批号，M-026-170612，纯度≥98％)。甲醇(德国Merck公司，色谱纯)，甲酸(天津市化学试剂研究所，分析纯)，水为超纯水。3、药材单面针饮片由株洲千金药业股份有限公司提供。两面针饮片购于全国各大连锁药店、医药公司及药材市场，经湖南中医药大学药学院药用植物教研室刘塔斯教授与中药鉴定教研室龚力民副教授共同鉴定为芸香科花椒属植物蚬壳花椒ZanthoxylumdissitumHemsley的茎及两面针Zanthoxylumniti本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单面针高效液相色谱鉴别方法，其特征在于，方法如下：/n(1)制备供试品溶液：提取溶剂为甲醇，提取方式为超声处理；/n(2)制备木兰花碱对照品溶液；/n(3)进行高效液相色谱测定，色谱条件如下：/n色谱柱为Waters SunFire C18(柱长25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；/n以甲醇为流动相B，以水(0.1％甲酸)为流动相C；/n流速为0.8-1ml/min；柱温为30℃；检测波长为268nm；/n梯度洗脱程序为：/n

【技术特征摘要】
1.一种单面针高效液相色谱鉴别方法，其特征在于，方法如下：
(1)制备供试品溶液：提取溶剂为甲醇，提取方式为超声处理；
(2)制备木兰花碱对照品溶液；
(3)进行高效液相色谱测定，色谱条件如下：
色谱柱为WatersSunFireC18(柱长25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；
以甲醇为流动相B，以水(0.1％甲酸)为流动相C；
流速为0.8-1ml/min；柱温为30℃；检测波长为268nm；
梯度洗脱程序为：



(4)结果分析
色谱图中，在tR＝7.0min±5％处出现特征峰的供试品为单面针，两面针无此特征峰。


2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中提取溶剂为70％甲醇。


3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤(1)中超声处理的时间45min-60min。


4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(1)中超声处理的条件为功率100-300W、频率30-50kHz。


5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，供试品溶液浓度为0.1-0.16g/ml，木兰花碱对照品溶液浓度为60-100μg/ml。
<...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚云，凌勇根，赵威，伍实花，张英帅，
申请(专利权)人：株洲千金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43