一种达托霉素有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种达托霉素有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对达托霉素有关物质进行定性检测，其高效液相色谱条件包括：以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱；采用体积比为62～68:38～32的流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱；所述流动相A为体积比为72～76:28～24的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液；所述流动相B为体积比为48～52:52～48的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液。本发明专利技术的检测方法能够在制备达托霉素或达托霉素制剂的过程中，对产生的杂质进行检测，专属性强，重现性好，结果准确可靠，从而对达托霉素或达托霉素制剂产品的质量进行准确的评价。达托霉素制剂产品的质量进行准确的评价。达托霉素制剂产品的质量进行准确的评价。

【技术实现步骤摘要】
一种达托霉素有关物质的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种达托霉素有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]达托霉素是一种由玫瑰孢链霉菌发酵产生的酸性酯肽类抗生素，分子式：C
72
H
101
N
17
O
26
，分子量：1620.68，其结构式为：
[0003][0004]达托霉素是继万古霉素之后上市的新一代环脂肽类抗生素，用于治疗革兰阳性菌引起的复杂皮肤感染、结构性皮肤感染、心脏感染和菌血症等。它主要通过抑制细菌细胞壁的主要成分—肽聚酶的生物合成过程来改变细菌细胞膜的性质，以破坏后者的结构，使细菌细胞膜变得极其脆弱，而细胞膜内的胞浆等重要物质溶液泄露出来，从而达到杀菌目的。2003年在美国批准上市，现如今销量稳定在八亿美元。目前，国内有一家进口和三家本土企业也已上市。
[0005]达托霉素为发酵半合成类新型抗生素，其化学结构复杂，并在发酵、纯化、生产和贮藏过程均会产生杂质，为了保证药物的安全性，对杂质必须能够有效分离并进行严格控制尤为重要。目前，现有文献中的有关物质方法不能有效分离内酯水解物、脱水达托霉素、β
‑
异构体、杂质3(RRT0.95)、杂质4(RRT0.90)、杂质5(RRT1.07)和未知杂质RRT0.82等杂质，且使用的色谱柱phenomenex IB
‑
SIL C8(250mm
×
4.6mm
×
5μm)对于分离主峰与主峰相邻峰的重现性效果不佳，因此急需开发出一种能够有效分离各杂质的检测方法，以对达托霉素产品质量进行准确的评价，以确保该产品的质量可靠及用药的安全性。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种达托霉素有关物质的检测方法。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种达托霉素有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱对达托霉素有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，其中流动相A和流动相B的体积比为62～68:38～32；对于本专利技术而言，流动相A为无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，在流动
相A中无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为72～76:28～24；流动相B也为无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，在流动相B中无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为48～52:52～48；流动相A和流动相B中采用的无水硫酸钠溶液的浓度为0.02～0.03mol/L，以磷酸调节pH至3.2～3.6。
[0009]本专利技术的检测方法，可用于检测达托霉素原料药、达托霉素片剂、达托霉素粉针剂或达托霉素注射液中的达托霉素及有关物质。
[0010]在等度洗脱的过程中，供试品溶液的洗脱时间可以一般为120分钟，但是为了节约时间，对照品溶液的洗脱时间可以缩短至75分钟。
[0011]本专利技术以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱，在一种优选方案中，色谱柱为Waters XBridge Shield RP 18，进一步优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。即，Waters XBridge Shield RP 18(4.6
×
250mm，3.5μm)。
[0012]采用本专利技术的检测方法，在等度洗脱时，需严格控制流动相A和流动相B的体积比为62～68:38～32，在一种优选方案中，流动相A和流动相B的体积比为64～66:36～34。例如，流动相A和流动相B的体积比为64:36或66:34。
[0013]采用本专利技术的检测方法，在等度洗脱时，对流动相A和流动相B中无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比也需要严格控制。在流动相A中，无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为72～76:28～24，无水硫酸钠溶液的浓度为0.02～0.03mol/L，以磷酸调节pH至3.2～3.6。在一种优选方案中，流动相A为体积比为74:26的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，无水硫酸钠溶液的浓度为0.024mol/L，以磷酸调节pH至3.5。
[0014]在流动相B中，无水硫酸钠溶液和乙腈的体积比为48～52:52～48，无水硫酸钠溶液的浓度为0.02～0.03mol/L，以磷酸调节pH至3.2～3.6。在一种优选方案中，流动相B为体积比为50:50的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，无水硫酸钠溶液的浓度为0.024mol/L，以磷酸调节pH至3.5。
[0015]采用本专利技术的检测方法，其高效液相色谱条件还包括：
[0016]检测波长为220～226nm，优选为223～226nm。
[0017]柱温为28～32℃，优选为30～32℃。
[0018]流速为0.4～0.6mL/min；优选为0.4～0.5mL/min。
[0019]进样量为8～12μL；优选为10μL。
[0020]采用本专利技术的检测方法检测达托霉素及其有关物质，还包括配制如下溶液：
[0021]供试品溶液按照如下方法配制：称取达托霉素，以乙腈水溶液溶解并稀释至每毫升溶液中含达托霉素0.8～1.2mg，作为供试品溶液。
[0022]对照品溶液按照如下方法配制：称取达托霉素对照品，以乙腈水溶液溶解并稀释至每毫升溶液中含达托霉素0.008～0.012mg，作为对照品溶液。
[0023]在一种优选方案中，配制供试品溶液或者对照品溶液时溶解样品并进一步稀释的乙腈水溶液的体积浓度为10％。
[0024]在一种优选方案中，供试品溶液按照如下方法配制：称取达托霉素，以10％乙腈水溶液溶解并稀释至每毫升溶液中含达托霉素1.0mg，作为供试品溶液。
[0025]在一种优选方案中，对照品溶液按照如下方法配制：称取达托霉素对照品，以10％乙腈水溶液溶解并稀释至每毫升溶液中含达托霉素0.01mg，作为对照品溶液。
[0026]采用本专利技术的技术方案，优势如下:
[0027]采用本专利技术的检测方法能够有效分离达托霉素及其相关杂质，解决了现有文献中不能将内酯水解物、脱水达托霉素、β
‑
异构体、杂质3(RRT0.95)、杂质4(RRT0.90)、杂质5(RRT1.07)和未知杂质RRT0.82等杂质进行分离的问题，以及采用色谱柱phenomenex IB
‑
SIL C8(250mm
×
4.6mm
×
5μm)进行色谱分析时，主峰与主峰相邻峰的重现性效果不佳问题。本专利技术的检测方法能够在制备达托霉素或达托霉素制剂的过程中，对产生的杂质进行检测，专属性强，重现性好，结果准确可靠，从而对达托霉素或达托霉素制剂产品的质量进行准确的评价，保证达托霉素或达托霉素制剂产品的质量。
附图说明
[0028]图1实施例1中达托霉素有关物质检测的空白溶液图谱；
[0029]图2实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种达托霉素有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱对达托霉素有关物质进行定量检测，其高效液相色谱条件包括：以镶嵌极性基团C18硅胶键合相为色谱柱；采用体积比为62～68:38～32的流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱；所述流动相A为体积比为72～76:28～24的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液；所述流动相B为体积比为48～52:52～48的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液；所述无水硫酸钠溶液的浓度为0.02～0.03mol/L，以磷酸调节pH至3.2～3.6。2.根据权利要求1所述的达托霉素有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为Waters XBridge Shield RP 18；优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。3.根据权利要求2所述的达托霉素有关物质的检测方法，其特征在于，在等度洗脱时，流动相A和流动相B的体积比为64～66:36～34；优选地，流动相A和流动相B的体积比为64:36或66:34。4.根据权利要求3所述的达托霉素有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A为体积比为74:26的无水硫酸钠溶液和乙腈的混合溶液，所述无水硫酸钠溶液的浓度为0.024mol/L，以磷酸调节pH至3.5。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐咏群，黄锡伟，董海霞，胡铮，田欣欣，
申请(专利权)人：南京健友生化制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：