一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法技术

本发明专利技术提供一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。本发明专利技术将待测样品进行前处理后进行HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法


[0001]本专利技术属于检测分析
，具体涉及一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。

技术介绍

[0002]己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)是一种人工合成的雌酚类激素，能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用。在养殖产业中，己烯雌酚曾一度作为促生长剂加入饲料中，刺激奶牛正常的生成代谢，增加奶牛体内氯停留，提高奶牛体内氨基酸合成蛋白质的速度，最终达到提高牛奶产率的目的。研究表明，残留于动物源性食品中的己烯雌酚通过食物链进入人体后，属于环境内分泌干扰物,它对垂体促性腺激素的分泌有抑制作用，破坏人体内正常激素平衡。其副作用可以破坏集体遗传物质，导致基因突变，引发机体肿瘤，且在体内滞留时间长、稳定性强、难降解。欧盟已禁止使用，美国和加拿大则限量使用。中华人民共和国农业农村部公告第250号也将其列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》。
[0003]现有的牛奶和奶粉中己烯雌酚的仪器分析检测方法有液相色谱法和液相色谱串联质谱法，液相色谱法无法准确定性，检测灵敏度低，而液相色谱串联质谱法通常前处理过程相对繁琐，耗时较长以GB/T 22992
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2008《牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定液相色谱
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串联质谱法》为例，前处理过程需氢氧化钠调节pH后，经阴离子固相萃取柱净化，耗时较长，耗材成本较高。因此，开发一个快速高效的检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法对于保障人民的食品安全有十分重要的意义。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中缺陷，本专利技术提供一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。该方法灵敏度高，稳定性高，操作简单，效率高，并且检出限更低。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法，所述方法包括如下步骤：
[0007](1)配制标准品溶液：首先制备标准储备液，称取适量的己烯雌酚标准品，用甲醇配制成浓度为10μg/L的标准储备液，于
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18℃冰箱中保存；然后将标准储备液用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存，再将标准中间液用甲醇配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存；
[0008]制作标准曲线时将标准工作液用空白基质溶液配制成浓度分别为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL的工作曲线，现用现配。
[0009](2)醋酸乙腈溶液：吸取10ml的醋酸用乙腈定容到1000ml的容量瓶中配制成浓度为1％的醋酸乙腈溶液。
[0010](3)10％甲醇水(含0.1％的甲酸)溶液：10ml甲醇加水定容到100ml，加入100μl甲酸，配制成10％甲醇水含0.1％的甲酸溶液。
[0011](4)待测样品前处理：
[0012]A.提取：称取牛奶或奶粉2g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，回收中另加入100ng/mL己烯雌酚标准溶液10μL，1％醋酸乙腈溶液15mL(含油脂较多的样品加10mL正己烷)。涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min，在转速为4000r/min的离心机中离心5min；
[0013]B.净化：将上清液(加正己烷的样品需将正己烷除去)全部转移到准备好的净化管(10g马弗炉烘过的无水硫酸钠、0.5gC
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、0.2g PSA)中，涡旋混匀5min，转速为4000r/min离心机中离心5min。吸取7.5mL上清液于10mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干。
[0014]C.复溶：向吹干的离心管中加入0.5mL定溶液(10％甲醇水含0.1％的甲酸)，超声30S，涡旋混匀5min，过0.22um滤膜，待上机测试。
[0015]空白基质溶液除不加标准溶液，其余操作按照A.B.C进行。
[0016](5)将前处理好的样液用液相色谱
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串联质谱仪定量分析，对待测样品进行定性和定量检测，得到牛奶和奶粉中己烯雌酚残留的含量，具体如下：
[0017]A、将步骤(1)配制的不同浓度的己烯雌酚标准工作曲线，用液相色谱
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串联质谱仪分析检测，进样体积为5.0μL，获得标准品溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；
[0018]B、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱
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串联质谱仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流图、定量离子对色谱图和定性离子对色谱图；
[0019]C、以己烯雌酚的定量离子峰面积和浓度分别为横纵坐标，得到己烯雌酚标准工作曲线；
[0020]D、根据待测样品溶液中己烯雌酚残留的定量离子峰面积，结合标准曲线，计算得到待测样液中己烯雌酚的浓度C，并按以下公式计算得到牛奶和奶粉中己烯雌酚的含量X，含量计算公式为：
[0021]X＝C*V*1000*f/(m*1000)
[0022]其中X是待测样品中奶粉和牛奶己烯雌酚的含量，单位为μg/kg；C是待测样品中己烯雌酚残留的浓度，单位为ng/mL；V是待测样品最终定容体积，单位为mL；m是待测样品质量，单位为g；f是稀释倍数。
[0023]其中液相色谱
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串联质谱仪的色谱条件为：
[0024]液相色谱条件
[0025]a)色谱柱:Rapid ResolutionHD 3.0X100mm 1.8
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Micron
[0026]b)流动相及梯度：乙腈+0.1％甲酸5mM乙酸铵水溶液
[0027]c)结束时间：5min
[0028]d)流速：0.4mL/min
[0029]e)柱温：30℃
[0030]f)进样量：5μL
[0031]质谱条件见表2，表3
[0032]表2安捷伦6460QQQ
[0033][0034]表3监测离子对及其相应的碰撞能量
[0035][0036]本专利技术的有益效果为：
[0037](1)整个检测样品前处理过程简单、快速，同现有方法相比，大大提高了检测效率。
[0038](2)提取环节选择酸化乙腈，有效提高被提取物己烯雌酚的提取效率，提高了方法回收率。
[0039](3)净化过程更加简便，用QuECHERS技术取代现有的固相萃取柱净化过程，既节省了操作时间，同时也节约了试验成本。
[0040](4)适用于复杂基质样本牛奶和奶粉的检测，目前QuECHERS技术多用于蔬菜、水果、土壤等成分较简单的基质，对于奶粉等高蛋白等成分复杂的样品应用较少，本专利技术通过优化选择无水硫酸钠、C
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、PSA三种物质作为净化填料，并对净化填料比例进行优化(无水硫酸钠：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)配制标准品溶液：首先制备标准储备液，称取适量的己烯雌酚标准品，用甲醇配制成浓度为10μg/L的标准储备液，于
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18℃冰箱中保存；然后将标准储备液用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存，再将标准中间液用甲醇配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存；制作标准曲线时将标准工作液用空白基质溶液配制成浓度分别为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL的标准品溶液备用；(2)待测样品前处理：A.提取：称取牛奶或奶粉2.00g试样于50mL离心管中，回收中另加入100ng/mL己烯雌酚标准溶液10μL，1％醋酸乙腈溶液15mL；涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min，在转速为4000r/min的离心机中离心5min；B.净化：将上清液全部转移到准备好的净化管中，所述净化管中包括10g马弗炉烘过的无水硫酸钠、0.5g C
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、0.2g PSA，涡旋混匀5min，转速为4000r/min离心机中离心5min，吸取7.5mL上清液于10mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干；C.复溶：向吹干的离心管中加入0.5mL含0.1％甲酸的10％甲醇水，超声30S，涡旋混匀5min，过0.22um有机相滤膜，待上机测试。(3)将前处理好的样液用液相色谱
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串联质谱仪定量分析，对待测样品进行定性和定量检测，得到牛奶和奶粉中己烯雌酚残留的含量。2.根据权利要求1所述的检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法，其特征在于，步骤(3)具体如下：A、将步骤(1)配制的不同浓度的己烯雌酚标准工作曲线，用液相色谱
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串联质谱仪分析检测，进样体积为5.0μL，获得标准品溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；B、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱
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串...

【专利技术属性】
技术研发人员：高素兰，
申请(专利权)人：山东欧陆检测有限公司，
类型：发明
国别省市：