重组人脂联素表达载体、载体构建方法及表达方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及重组人脂联素表达载体、载体构建方法及表达方法。本发明专利技术的重组人脂联素表达载体，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和Fc-GS质粒。所述重组人脂联素表达载体的构建方法，包括：根据人脂联素的氨基酸序列，经密码子优化，得到人脂联素的cDNA序列；所述人脂联素的cDNA序列如SEQ ID No.1所示；设计引物，对所述cDNA序列进行扩增，经鉴定后回收目的片段；将所述目的片段连接至Fc-GS质粒中，得到重组人脂联素表达载体。将所述重组人脂联素表达载体转染至仓鼠卵巢细胞中，可稳定表达重组人脂联素-Fc融合蛋白，而且方法简便高效。而且方法简便高效。

【技术实现步骤摘要】
重组人脂联素表达载体、载体构建方法及表达方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及重组人脂联素表达载体、载体构建方法及表达方法。

技术介绍

[0002]脂联素(ADIP)是一种脂肪细胞特异性表达分泌进入血浆的脂肪细胞因子，其单体分子量大约为30kD左右，命名为Acrp30。在正常情况下，机体脂联素表达水平稳定，浓度大约为3-30μg/mL，占血浆总蛋白含量的0.01％。
[0003]脂联素信使RNA在脂肪细胞分化过程中高于其他组织100倍组织特异性表达。人源脂联素基因定位于染色体3q27上，全长16Kbp，由三个外显子和两个内含子组成，包含244个氨基酸，按功能划分，从氨基末端到羧基末端分别为：信号肽结构域(1-18AA)、脂联素特异结构域(19-41AA)、胶原重复结构域(42-107AA)及球形结构域序列(108-244AA)。信号肽自身在分泌过程中被切除，脂联素特异结构域序列与大多数蛋白序列无显著的同源性，而脂联素球形结构域序列与多种蛋白具有显著的同源性。在胶原重复结构域起始部位，具有7个完整的”Gly-X-Pro”重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人脂联素表达载体，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和Fc-GS质粒。2.一种重组人脂联素表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：根据人脂联素的氨基酸序列，经密码子优化，得到人脂联素的cDNA序列；所述人脂联素的cDNA序列如SEQ ID No.1所示；步骤2：设计引物，对所述cDNA序列进行扩增，经鉴定后回收目的片段；步骤3：将所述目的片段连接至Fc-GS质粒中，得到重组人脂联素表达载体。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3具体为：利用第一限制性内切酶消化Fc-GS质粒，然后用热敏磷酸酶处理20～40分钟，灭活热敏磷酸酶；利用第二限制性内切酶消化所述目的片段；所述第一限制性内切酶和第二限制性内切酶相同或者为同尾酶；将限制性内切酶消化后的Fc-GS质粒以及目的片段连接过夜，得到重组人脂联素表达载体。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述第一限制性内切酶为Bgl II，所述第二限制性内切酶为BamHI。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3后，还包括：用Hind III和Xho I限制性内切酶消化所述重组人脂联素表达载体，然后进行琼脂糖凝胶电泳，鉴...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚燕平，李春霖，刘敏燕，卢艳慧，闫双通，孙般若，李婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：