一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法技术

一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法，属于随机突变技术领域。为了筛选出与流感病毒相关的宿主基因，本发明专利技术提供了一种筛选方法：1)用CAG-tTA质粒转染人肺癌细胞株，获得稳定表达且受四环素调控的转录激活因子的Tet-off细胞株；将基因搜寻载体和有效表达转座酶的质粒共转染所述Tet-off细胞株，获得全基因组肺上皮细胞基因突变文库；2)利用H1N1-WSN流感病毒感染步骤1)获得的突变文库；3)提取步骤2)中获得的抗H1N1-WSN流感病毒的细胞株基因组DNA，经Splinkette PCR，测序获得流感病毒相关宿主基因突变体。本发明专利技术可用于流感病毒相关宿主基因突变体的筛选。毒相关宿主基因突变体的筛选。毒相关宿主基因突变体的筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法


[0001]本专利技术涉及一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法，属于随机突变


技术介绍

[0002]季节性流感是一种急性呼吸道传染性疾病，是全人类严重的公共卫生问题；其特点包括易暴发、易播散、易演变、易感人群广、易季节流行以及发病率高。由于流感病毒突变性高以及病毒之间发生重组，现有的抗流感病毒药物和疫苗很难有效应对多变的流感病毒。同病毒蛋白相比，参与病毒感染和扩展的宿主因子不易发生变异，是干预病毒复制和抑制宿主反应的重要靶标。因此，筛选和鉴定抗流感病毒关键宿主因子可能是有效防控和治疗流感病毒的突破口。
[0003]近年来，很多方法都被用来筛选抗流感病毒相关宿主基因，包括基因芯片、microRNA芯片、高通量测序、小分子RNA干扰、CRISPR/Cas9筛选、化学诱变DNA和插入突变等技术。RNA干扰、cDNA文库、CRISPR/Cas9突变和芯片技术等需要提前获知靶基因的序列，这样会缩小基因筛选的范围，常会漏掉一些未知基因和非编码区；高通量测序和芯片技术所得到的基因与流感病毒感染间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种流感病毒相关宿主基因突变体的筛选方法，其特征在于，步骤如下：1)建立随机基因突变文库：用CAG-tTA质粒转染人肺癌细胞株，获得稳定表达且受四环素调控的转录激活因子的Tet-off细胞株；将基因搜寻载体和有效表达转座酶的质粒，共转染所述Tet-off细胞株，获得全基因组肺上皮细胞基因突变文库；所述基因搜寻载体包含四环素反应元件、piggyBac转座子、新霉素抗性基因和质粒复制起点，所述四环素反应元件通过两段四环素反应元件拼接得到；所述有效表达转座酶的质粒为MPB；2)筛选抗甲型流感病毒H1N1-WSN毒株的突变肺上皮细胞株：利用H1N1-WSN流感病毒感染步骤1)获得的全基因组肺上皮细胞基因突变文库，按照MOI＝5加入H1N1-WSN流感病毒，培养2周后挑取单个克隆，经筛选后得到抗H1N1-WSN流感病毒的细胞株；3)流感病毒感染相关宿主基因的克隆：提取步骤2)中获得的抗H1N1-WSN...

【专利技术属性】
技术研发人员：常德，D，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第三医学中心，
类型：发明
国别省市：