抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物制药领域，涉及一种抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体为利用灭活蜂房哈夫尼菌为抗原免疫产蛋鸡，收集所述免疫蛋鸡的鸡蛋，并从免疫鸡蛋卵黄中分离和纯化得到。本发明专利技术的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体对感染蜂房哈夫尼菌的中蜂具有显著的预防效果和治疗效果；抗体纯化后可制成药品，用于治疗蜜蜂因感染蜂房哈夫尼菌引起的相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体及其制备方法和应用
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)是一种革兰氏阴性杆状病原菌，与食物腐败关系密切，为冷藏肉制品、乳制品和水产品等食品腐败变质中的优势腐败菌株。蜂房哈夫尼菌病是严重威胁蜜蜂种群的传染性疾病，且已被证明可致蜜蜂败血症，在蜜蜂群中经常被发现，具有传播速度快、危害程度严重、病程持续时间长、污染蜂产品等特点。现有技术从蜜蜂的消化道和组织分离出蜂房哈夫尼菌，并通过实验将蜂房哈夫尼菌接种到蜜蜂的胸部，对蜜蜂进行感染，发现此菌造成了蜜蜂的败血症，且死亡率超过90％。蜂房哈夫尼病菌常见于蜜蜂春繁季节，该季节湿度较大、温差变化较大，蜜蜂采食了含该菌的污水或花粉感染，患病的成蜂污染巢脾，进而造成蜜蜂大量死亡。受感染蜜蜂的主要症状表现为蜂腹部膨大、行动迟缓、飞行无力、下痢等。目前，蜂农通常通过中药水煎液进行预防和治疗蜂房哈夫尼菌病，采用的中药包括五倍子、黄连、黄芩、山楂、艾叶和连翘等；还有采用中西医结合的方法，使用头孢类、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体为利用灭活蜂房哈夫尼菌为抗原免疫产蛋鸡，收集所述产蛋鸡的鸡蛋，并从免疫鸡蛋卵黄中分离和纯化得到。/n

【技术特征摘要】
1.抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体为利用灭活蜂房哈夫尼菌为抗原免疫产蛋鸡，收集所述产蛋鸡的鸡蛋，并从免疫鸡蛋卵黄中分离和纯化得到。


2.根据权利要求1所述的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体由包括以下步骤的方法制备得到：
(1)制备抗原：将蜂房哈夫尼菌灭活，作为抗原；
(2)免疫蛋鸡：将灭活的蜂房哈夫尼菌与棒状纳米氢氧化铝按照质量比为1：0.5～1.5混合乳化后，首次免疫产蛋鸡，再进行第二次、第三次加强免疫，收集鸡蛋；其中，棒状纳米氢氧化铝为长径800～1000纳米、短径200～300纳米的棒状氢氧化铝；
(3)分离纯化卵黄，得到卵黄抗体。


3.根据权利要求2所述的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，步骤(1)中，将蜂房哈夫尼菌在营养肉汤中扩增培养至菌液浓度1～6×1010CFU/mL，热灭活后用生理盐水稀释至1～6×108CFU/mL，得到灭活蜂房哈夫尼菌抗原。


4.根据权利要求2所述的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，步骤(3)中，在收集鸡蛋的卵黄液中加入9～10倍体积去离子水稀释，调节pH至5.0，于-20℃冰箱中冷冻过夜；解冻后离心收集上清，过滤，收集滤液，得到卵黄抗体粗提物；对卵黄抗体粗提物进一步纯化，得到抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体。


5.根据权利要求4所述的抗蜂房哈夫尼菌卵黄抗体，其特征在于，向卵黄抗体粗提物中加入饱和硫酸铵溶液至终浓度的45～75％，搅拌均匀后，4℃过夜，4℃条件下离心，加入PBS溶液重悬，再次加入饱和硫酸铵溶液至终浓度的45-75％，搅拌均匀后，室温过夜，在室温下离心，用去离子水稀释沉淀至原体积，得到卵黄抗体提取液，将得到的卵黄抗体提取液用透析袋充分透析，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕凤林，潘玉竹，曹政，杨军，陈彩宇，
申请(专利权)人：重庆君同生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50