引起性传播疾病的细菌和免疫T细胞检测制造技术

提供了用于快速检测引起性传播疾病(衣原体、淋病或梅毒)的细菌样品的方法和装置。还提供了用于快速检测免疫细胞(CD3、CD4和CD8细胞)的方法和装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】引起性传播疾病的细菌和免疫T细胞检测交叉引用本申请要求于2017年10月26日提交的美国临时申请第62/577,440号的权益，其公开内容出于所有目的以其整体并入本文。
其中，本专利技术涉及进行生物和化学测定(如免疫测定)的装置和方法。
技术介绍
沙眼衣原体(引起衣原体)、淋病奈瑟氏球菌(引起淋病)或梅毒螺旋体(引起梅毒)的细菌感染是常见的性传播疾病(STD)，其可对人的健康造成严重、永久的损害。疾病控制和预防中心(CDC)估计每年有超过2.5百万美国人感染衣原体。STD在15-24岁的性活跃人群中尤其普遍。许多STD患者没有症状，因此CDC和其他卫生组织建议定期筛查风险较高的人群。然而，对这些细菌中的许多细菌例如衣原体的传统测试(例如，细胞培养)是耗时的(5-7天)并且难以实施。免疫T细胞在细胞介导的免疫中起关键作用。几个T细胞亚群各自具有不同的功能。CD4(分化簇4)是在免疫细胞如T辅助细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞表面发现的糖蛋白。CD4+细胞分泌称为细胞因子的小蛋白，其调节或帮助主动免疫应答。已经广泛接受CD4表达细胞的数量作为HIV(人免疫缺陷病毒)感染和AIDS(获得性免疫缺陷综合征)的指示。CD8+T细胞在其表面表达CD8糖蛋白，其识别与MHCI类分子相关的抗原。CD8细胞破坏病毒感染的细胞和肿瘤细胞，并且还涉及移植排斥。一直需要更快速和更简单的衣原体测试，以及快速和可靠的CD3+、CD8+和CD4+细胞测试。本专利技术提供执行测定的装置和方法，所述测定可用于以高速和高效检测样品中的STD和/或量化T细胞(例如CD4表达细胞)的细菌。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了一种方法，包含以下步骤：提供包含第一板和第二板的装置，所述第一板和/或所述第二板在其内表面上包含被配置为接触样品的样品接触区域，其中所述样品含有或疑似含有引起性传播疾病(STD)的细菌；将所述样品沉积到所述样品接触区域上；向所述沉积的样品中加入染色介质以形成混合物，其中所述染色介质包含对所述细菌具有特异性的抗体；用所述第二板压缩所述第一板，使得至少一部分所述混合物形成薄层；孵育混合物，使得抗体与引起STD的细菌结合并产生信号；以及检测所述信号，其中所检测的信号指示所述样品中细菌的存在。本公开的任何实施例的方法，其中引起STD的细菌选自由以下各项组成的组：沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌和梅毒螺旋体。本公开的任何实施例的方法，其中所述孵育步骤执行约60秒或更短时间。本公开的任何实施例的方法，其中所述孵育步骤执行约30秒或更短时间。本公开的任何实施例的方法，其中所述孵育步骤进行约15秒或更短时间。本公开的任何实施例的方法，其中所述抗体是荧光标记的。本公开的任何实施例的方法，其中所述薄层具有小于100μm的均匀厚度。本公开的任何实施例的方法，其中所述薄层具有小于50μm的均匀厚度。本公开的任何实施例的方法，其中所述薄层具有约30μm或以下的均匀厚度。本公开的任何实施例的方法，其中所述信号是通过对所述孵育的样品进行成像步骤(f)来检测的。在一个方面，本专利技术提供了一种方法，包含以下步骤：提供包含第一板和第二板的装置，所述板中的一个或两个在其内表面上包含具有结合位点的样品接触区域，其中所述样品接触区域被配置为接触样品，其中所述样品含有或疑似包含引起性传播疾病(STD)的细菌，并且其中所述结合位点包含与所述样品中的所述细菌结合的固定化捕获抗体；提供所述板中的一个或两个，所述板在其内表面上包含具有储存位点的样品接触区域，其中所述储存位点包含检测抗体，所述检测抗体在接触所述样品时能够在所述样品中扩散，并且其中所述捕获抗体和所述检测抗体结合至所述细菌上的不同位点以形成捕获抗体-细菌-检测抗体夹心；将所述样品沉积到所述板的所述样品接触区域中的一个或两个上；使这两个板处于闭合构造，其中，在该闭合构造中，(c)中至少一部分沉积的样品被限定在两个板的样品接触区域之间，并且该第一板和该第二板具有在0.01μm至200μm范围内的平均厚度；以及检测信号，其中所述信号在所述捕获抗体-细菌-检测抗体形成后产生，并且所检测的信号指示所述样品中存在引起性传播疾病(STD)的细菌。本公开的任何实施例的方法，其中所述样品来自人。本公开的任何实施例的方法，其中所述细菌选自由以下各项组成的组：沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌和梅毒螺旋体。本公开的任何实施例的方法，其中所述捕获抗体具有包含蛋白质稳定剂的捕获位点。本公开的任何实施例的方法，其中所述储存位点还包含蛋白质稳定剂。本公开的任何实施例的方法，其中所述检测抗体包含荧光标签。本公开的任何实施例的方法，其中所述两个板之间的所述样品具有在0.5μm至50μm的范围内的均匀厚度。本公开的任何实施例的方法，其中所述两个板之间的所述样品具有在1μm至35μm的范围内的均匀厚度。本公开的任何实施例的方法，进一步包含步骤(g)：确定是否存在引起STD的细菌。本公开的任何实施例的方法，其中所述步骤(a)-(e)是在小于10分钟内执行的。本公开的任何实施例的方法，其中所述步骤(e)-(e)是在小于3分钟内执行的。本公开的任何实施例的方法，其中所述步骤(a)-(e)是在小于2分钟内执行的。本公开的任何实施例的方法，其中样品接触区域中的一个或两个包含多个间隔件，其中当板处于闭合构造中时，多个间隔件调节板的样品接触区域之间的间距。本公开的任何实施例的方法，其中所述第一板包含多个结合位点并且所述第二板包含多个对应的储存位点，其中当板处于闭合构造中时，每个结合位点都面向一个对应的储存位点。本公开的任何实施例的方法和装置，其中所述检测抗体在所述储存位点上干燥。本公开的任何实施例的方法，其中所述结合位点处的所述捕获抗体位于扩增所述捕获的检测抗体的光信号的扩增表面上。本公开的任何实施例的方法，其中所述结合位点处的所述捕获抗体位于扩增所述捕获的检测抗体的光信号的扩增表面上，其中所述扩增是邻近依赖性的，因为所述扩增随着所述捕获抗体与所述检测抗体之间的距离增加而显著减少。本公开的任何实施例的方法，其中所述信号是通过电子方式、光学方式，或两者来检测的。本公开的任何实施例的方法，其中所述信号是通过荧光或SPR检测的。在一个方面，本专利技术提供一种方法，包含以下步骤：提供包含第一板和第二板的装置，所述板中的一个或两个在其内表面上包含具有结合位点的样品接触区域，其中所述样品接触区域被配置为接触液体样品，其中所述液体样品含有或疑似含有表达生物标记物的细胞，提供了板中的一个或两个，所述板在其内表面上包含具有储存位点的样品接触区域，其中所述储存位点包含位于其中的检测剂，其中所述检测剂被配置为结合所述生物标记物，将所述样品沉积到所述板的所述样品接触区域中的一个或两个上；其中所述沉积的液体样品与所述检测剂接触；使这两个板处于闭合构造，其中，在该闭合构造中，(c)中至少本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种方法，包含以下步骤：/n(a)提供包含第一板和第二板的装置，所述第一板和/或所述第二板在其内表面上包含配置为接触样品的样品接触区域，其中所述样品含有或疑似含有引起性传播疾病(STD)的细菌；/n(b)将所述样品沉积到所述样品接触区域上，/n(c)向所述沉积的样品中加入染色介质以形成混合物，其中所述染色介质包含对所述细菌具有特异性的抗体；/n(d)用所述第二板压缩所述第一板，使得至少一部分所述混合物形成薄层；/n(e)孵育所述混合物，使得抗体与引起STD的细菌结合并产生信号；以及/n(f)检测所述信号，其中所检测的信号指示所述样品中细菌的存在。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171026 US 62/577,4401.一种方法，包含以下步骤：
(a)提供包含第一板和第二板的装置，所述第一板和/或所述第二板在其内表面上包含配置为接触样品的样品接触区域，其中所述样品含有或疑似含有引起性传播疾病(STD)的细菌；
(b)将所述样品沉积到所述样品接触区域上，
(c)向所述沉积的样品中加入染色介质以形成混合物，其中所述染色介质包含对所述细菌具有特异性的抗体；
(d)用所述第二板压缩所述第一板，使得至少一部分所述混合物形成薄层；
(e)孵育所述混合物，使得抗体与引起STD的细菌结合并产生信号；以及
(f)检测所述信号，其中所检测的信号指示所述样品中细菌的存在。


2.如任一前述权利要求所述的方法，其中引起STD的细菌选自由以下各项组成的组：沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌和梅毒螺旋体。


3.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述孵育步骤执行约60秒或更短时间。


4.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述孵育步骤执行约30秒或更短时间。


5.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述孵育步骤进行约15秒或更短时间。


6.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述抗体是荧光标记的。


7.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述薄层具有小于100μm的均匀厚度。


8.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述薄层具有小于50μm的均匀厚度。


9.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述薄层具有约30μm或以下的均匀厚度。


10.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述信号是通过对所述孵育的样品进行成像步骤(f)来检测的。


11.一种方法，包含以下步骤：
(a)提供包含第一板和第二板的装置，所述板中的一个或两个在其内表面上包含具有结合位点的样品接触区域，
其中所述样品接触区域被配置为接触样品，
其中所述样品含有或疑似包含引起性传播疾病(STD)的细菌，以及
其中所述结合位点包含与所述样品中的细菌结合的固定化捕获抗体；
(b)提供所述板中的一个或两个，其在其内表面上包含具有储存位点的样品接触区域，
其中所述储存位点包含检测抗体，所述检测抗体在接触所述样品时能够在所述样品中扩散，并且
其中捕获抗体和检测抗体结合于细菌上的不同位点以形成捕获抗体-细菌-检测抗体夹心；
(c)将所述样品沉积到所述板的所述样品接触区域中的一个或两个上；
(d)使两个板处于闭合构造，其中所述闭合构造中，(c)中至少一部分沉积的样品被限定在两个板的样品接触区域之间，并且第一板和第二板具有在0.01μm至200μm范围内的平均厚度；以及
(e)检测信号，其中所述信号在所述捕获抗体-细菌-检测抗体形成后产生，并且所检测的信号指示所述样品中存在引起性传播疾病(STD)的细菌。


12.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述样品来自人。


13.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述细菌选自由以下各项组成的组：沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌和梅毒螺旋体。


14.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述捕获抗体具有包含蛋白质稳定剂的捕获位点。


15.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述储存位点还包含蛋白质稳定剂。


16.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述检测抗体包含荧光标签。


17.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述两个板之间的所述样品具有在0.5μm至50μm的范围内的均匀厚度。


18.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述两个板之间的所述样品具有在1μm至35μm的范围内的均匀厚度。


19.如任一前述权利要求所述的方法，进一步包含步骤(g)：确定是否存在引起STD的细菌。


20.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述步骤(a)-(e)是在小于10分钟内执行的。


21.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述步骤(e)-(e)是在小于3分钟内执行的。


22.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述步骤(a)-(e)是在小于2分钟内执行的。


23.如任一前述权利要求所述的方法，其中样品接触区域中的一个或两个包含多个间隔件，其中当板处于闭合构造中时，多个间隔件调节板的样品接触区域之间的间距。


24.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一板包含多个结合位点并且所述第二板包含多个对应的储存位点，其中当板处于闭合构造中时，每个结合位点都面向一个对应的储存位点。


25.如任一前述实施例所述的方法和装置，其中所述检测抗体在所述储存位点上干燥。


26.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述结合位点处的所述捕获抗体位于扩增所述捕获的检测抗体的光信号的扩增表面上。


27.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述结合位点处的所述捕获抗体位于扩增所述捕获的检测抗体的光信号的扩增表面上，其中所述扩增是邻近依赖性的，因为所述扩增随着所述捕获抗体与所述检测抗体之间的距离增加而显著减少。


28.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述信号是通过电子方式、光学方式，或两者来检测的。


29.如任一前述权利要求所...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·Y·周，丁惟，李骥，蔡声建，
申请(专利权)人：ESSENLIX公司，
类型：发明
国别省市：美国;US