黄曲霉菌的RPA引物、试剂盒、及黄曲霉菌的检测方法与装置制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种黄曲霉菌的RPA引物、试剂盒、及黄曲霉菌的检测方法与装置，所述RPA引物和试剂盒特异性强，灵敏度高，检测结果准确。本发明专利技术还提供了一种能够现场化快速检测食品中黄曲霉菌的方法和装置，黄曲霉菌的检测方法包括以下步骤：现场快速提取样品的DNA，以所述DNA为模板，利用RPA引物进行RPA快速扩增，获得DNA扩增产物，根据所述DNA扩增产物的荧光现象判断样品中是否存在黄曲霉菌污染。所述黄曲霉菌的检测装置，包括自制便携式抽滤器和简易研钵。本发明专利技术所述DNA提取方法快速高效，结合体温下就能进行的RPA快速扩增，实现了37℃等温条件下，30min准确、快速、高效地检测到黄曲霉菌，同时对实验场所要求简单，不需要复杂仪器，十分适合基层样品抽检。

【技术实现步骤摘要】
黄曲霉菌的RPA引物、试剂盒、及黄曲霉菌的检测方法与装置
本专利技术涉及食品安全检测
更具体地说，本专利技术涉及一种黄曲霉菌的RPA引物、试剂盒、及黄曲霉菌的检测方法与装置。
技术介绍
黄曲霉菌(Aspergillusflavus)是真菌的一种，以寄生或腐生方式生存。其特点是菌丝体较为发达，无较大的子实体。黄曲霉菌可产生孢子进行繁殖和传播，其在温暖潮湿的环境下繁殖迅速。黄曲霉菌可在作物的种植、收获、储藏、运输和加工等各个环节进行侵染，使食品发生霉变失去食用价值，造成了巨大的浪费和经济损失。同时在其生长过程中可产生有毒的次级代谢产物——黄曲霉毒素。黄曲霉菌和其产生的黄曲霉毒素对食品安全和人类健康带来了巨大威胁，也越来越引起人们的关注和重视。因此建立快速检测方法，掌握食品中黄曲霉菌的污染情况以便及时采取控制措施，对控制黄曲霉菌污染的扩散具有积极意义。目前，针对食品中黄曲霉菌的快速检测技术较少。传统的检测方法主要依赖于形态学特征观察和鉴别培养基的鉴定，按照真菌的形态、生理特点、培养条件、产生毒素的种类等特征加以区分对比，但这种方法操作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黄曲霉菌的RPA引物，其特征在于，包括：/n正向引物，所述正向引物具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列：/n5’-GCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATC-3’；/n反向引物，所述反向引物具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列：/n5’-CCTACAGAGCGGGTGACAAAGCCCCATACG-3’。/n

【技术特征摘要】
1.黄曲霉菌的RPA引物，其特征在于，包括：
正向引物，所述正向引物具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列：
5’-GCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATC-3’；
反向引物，所述反向引物具有SEQIDNO.2所示的核苷酸序列：
5’-CCTACAGAGCGGGTGACAAAGCCCCATACG-3’。


2.试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的黄曲霉菌的RPA引物。


3.黄曲霉菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：现场提取样品的DNA，以所述DNA为模板，利用权利要求1中所述的RPA引物进行RPA快速扩增，获得DNA扩增产物，根据所述DNA扩增产物的荧光现象判断样品中是否存在黄曲霉菌污染。


4.如权利要求3所述的黄曲霉菌的检测方法，其特征在于，所述DNA的提取方法为：
步骤a、洗下样品中污染的黄曲霉菌孢子和菌丝；
步骤b、合并所述步骤a中所得的洗涤液，抽滤，得到滤饼；
步骤c、用NaOH溶液重溶所述步骤b中获得的滤饼，将重溶液研磨，取研磨后的溶液稀释于TE缓冲液中，完成DNA的提取。


5.如权利要求4所述的黄曲霉菌的检测方法，其特征在于，所述步骤a中洗下样品中污染的黄曲霉菌孢子和菌丝的方法为：无菌称取颗粒状的样品置于一次性注射器内，吸取无菌水后，剧烈震荡，将水排出，再次吸取干净的无菌水，震荡，将水排出，重复2-3次。


6.如权利要求3所述的黄曲霉菌的检测方法，其特征在于，所述RPA快速扩增的方法为：
取2μLDNA模板、0.3μM正向引物、0.3μM反向引物、29.5μL反应缓冲液、1μLCelfinderTM荧光染料和超纯水加入如权利要求2所述的试剂盒提供的RPA酶冻干粉反应管中，取2.5μL醋酸镁加入到反应管的盖子内表面，旋紧盖子混匀后，将反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢福国，刘启君，靳婧，李旭，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11