快速鉴定及定量粟酒裂殖酵母的引物和方法技术

本发明专利技术公开了快速鉴定及定量粟酒裂殖酵母的引物和方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术针对粟酒裂殖酵母乙醇脱氢酶设计了特异性引物对R1A1F/R1A1R，序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示，可以通过PCR技术实现对大曲、酒醅等样本中粟酒裂殖酵母的快速定性、定量检测；准确性高、有效性好、灵敏性高。本发明专利技术技术方案适用发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程的样品。

【技术实现步骤摘要】
快速鉴定及定量粟酒裂殖酵母的引物和方法
本专利技术涉及快速鉴定及定量粟酒裂殖酵母的引物和方法，属于生物工程

技术介绍
目前，中国大部分名优白酒都使用传统的大曲法酿造。大曲是以大麦、小麦、豌豆等为原料，经过破碎、加水拌料、压成砖块状的曲醅后，在人工控制的温度、湿度下培养而成的。大曲中含有丰富的霉菌、酵母、细菌等微生物及它们产生的各种酶，是一种多菌种的混合粗酶制剂，其中，真菌的作用不容忽视。由于大曲中栖息着丰富的微生物，加曲不但使大量有益的酿酒微生物菌种直接转移到发酵酒醅，而且还给酒醅提供了以淀粉酶、蛋白酶为主的各种酶类，同时，大曲还给酒醅带来了数量可观的、多种多样的代谢产物，在赋予大曲酒更好的口味和香气方面起着重要作用。粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)是裂殖属的杆状酵母，被广泛应用于白酒酿造，是白酒酿造体系中的核心酵母，有较高的乙醇发酵能力，能够降低影响产品质量安全的氨基甲酸乙酯的浓度，是极具酿酒潜力的非酿酒酵母。筛选、鉴定和分析粟酒裂殖酵母，对改善白酒品质具有重要意义。现有的鉴定粟酒裂殖酵母的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的引物，其特征在于，其序列如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示。/n

【技术特征摘要】
1.鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)的引物，其特征在于，其序列如SEQIDNO：2、SEQIDNO：3所示。


2.应用权利要求1所述引物鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)的方法，其特征在于，包括步骤：将待测样品制成菌悬液，将菌悬液稀释涂布获得单菌落，以SEQIDNO：2、SEQIDNO：3所示序列为引物进行菌落PCR，通过凝胶电泳观察PCR产物，如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带，则说明样品中含有粟酒裂殖酵母，如果PCR产物不在100～250bp之间或者没有条带时，说明样品中没有粟酒裂殖酵母。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述样品为发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程中的样品，包括大曲或酒醅。


4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述样品中含有库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、拜尔结合酵母(Zygosaccharomycesbailii)、白色假丝酵母(Candidahumilis)和巴氏哈萨克斯坦酵母(Kazachstaniabarnettii)。


5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，还对100-250bp之间的PCR产物进行测序，并将测序结果与粟酒裂殖酵母的乙醇脱氢酶编码基因序列进行比对。


6.应用权利要求1所述引物定量检测粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)的方法，其特征在于，包括步骤：
(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液，分别提取菌悬液中的基因组；
(2)利用SEQIDNO：2、SEQIDNO：3所示引物对基因组分别进行荧光定量PCR，以CT值为横坐标，以细胞数量或细胞数量的Lg值为纵坐标，绘制标准曲线；
(3)提取待测样品中的基因组，利用SEQIDNO：2、SEQIDNO：3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量PCR，将荧光定...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜海，徐岩，周天慈，孙佳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32