一种基于液滴PCR快速检测单细胞的方法技术

一种基于液滴PCR快速检测单细胞的方法。该方法包括如下步骤：对经培养、富集的细胞进行固定后，加水重悬得到细胞悬液；将所述细胞悬液与含细胞裂解剂的PCR反应试剂直接混合作为分散相，将油相作为连续相，分别注入微流控芯片生成含单细胞的液滴；对得到的液滴进行PCR反应；对PCR反应后的液滴进行荧光信号检测及分析。本发明专利技术极大地简化了液滴制备和操作过程，降低了液滴生成芯片和试剂成本，提高了液滴PCR检测单细胞的速度、通量、灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种基于液滴PCR快速检测单细胞的方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种基于液滴PCR(PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反应)快速检测单细胞的方法。
技术介绍
细胞作为生命活动的基本单元，与生命活动息息相关，细胞异质性往往包含着与疾病早期诊断、治疗等相关的重要信息，因此单细胞分析具有重要意义。PCR以其高灵敏度、高特异性的特点，广泛应用于检测单细胞，然而传统的获取单细胞的方法通常需要对细胞进行大量稀释或者采用显微操作技术来进行，步骤复杂繁琐，效率低，试剂消耗大。微流控技术通过将单细胞包裹在液滴中，使每一个液滴都成为一个密封的反应体系，提供了一种高通量、快速检测单细胞的途径。然而，在皮升液滴中，裂解试剂及细胞的裂解物对PCR反应具有极大的抑制作用。现存的方法需要先将细胞和裂解试剂包裹在液滴中，再与包裹反应试剂的液滴融合，这需要复杂的芯片设计和外部控制，对操作者的要求高，无法在多数实验室完成。操作液滴进行融合、分裂、再注入等都容易引起液滴融合，在延长检测时间的同时，也大大降低了检测的可靠性。专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于液滴PCR检测单细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤(1)对经培养、富集的细胞进行固定后，加水重悬得到细胞悬液；/n步骤(2)将所述细胞悬液与含细胞裂解剂的PCR反应试剂直接混合作为分散相，将油相作为连续相，分别注入微流控芯片生成含单细胞的液滴；/n步骤(3)对得到的液滴进行PCR反应；/n步骤(4)对PCR反应后的液滴进行荧光信号检测及分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于液滴PCR检测单细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤(1)对经培养、富集的细胞进行固定后，加水重悬得到细胞悬液；
步骤(2)将所述细胞悬液与含细胞裂解剂的PCR反应试剂直接混合作为分散相，将油相作为连续相，分别注入微流控芯片生成含单细胞的液滴；
步骤(3)对得到的液滴进行PCR反应；
步骤(4)对PCR反应后的液滴进行荧光信号检测及分析。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中固定细胞的试剂为4％多聚甲醛溶液。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR反应试剂还包括含Mg2+、dNTPs、Tris-HCl、DNA聚合酶的预混液，特异性引物，探针。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的细胞裂解剂为1-5mg/ml牛胎血清蛋白和5％-20％v/vNP40细胞裂解剂。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄义征，刘文文，胡诗铭，魏清泉，俞育德，
申请(专利权)人：中国科学院半导体研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11