一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber‑2蛋白的方法。分别以PET‑21a‑GX‑1‑fiber2质粒和PXMJ19‑C1786T‑hexon(T7)质粒为模板，通过设计的引物进行扩增，得到Fiber‑2目的片段和PXMJ19‑C1786T‑T7载体片段；然后进行同源重组，得到重组质粒PXMJ19‑T7‑his‑fiber2；最后转化至Shuffle T7‑B感受态细胞进行Fiber‑2蛋白的表达。本发明专利技术采用能提高外源基因拷贝数的质粒作为载体，构建PXMJ19‑T7‑his‑fiber2重组质粒，来增强Fiber‑2蛋白的可溶性表达。

【技术实现步骤摘要】
一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法
本专利技术涉及生物工程
，具体为一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法。
技术介绍
禽腺病毒属于腺病毒科，禽腺病毒属，存在于家禽中，鸡、鸭、鹅等都是其易感宿主。禽腺病毒传染性较强且传播稳定，一般在宿主体内并不致病，是一种机会性的病原体。近年来，中国的主要流行株是血清4型和8b型禽腺病毒，其中血清4型病毒株占据主导地位。FADV4首次报道于1987年8月，发现地区在巴基斯坦安加拉。2015年爆发的血清4型流行株HN株致病性强，致死率高，与经典毒株存在较大差异，为养禽业带来了巨大的损失，因此对该流行株的研究十分迫切且必要。禽腺病毒的纤突蛋白包括Fiber-1和Fiber-2，Fiber-1蛋白较长，而Fiber-2蛋白较短，均与病毒的感染性及致病性密切相关。纤突蛋白不仅含有禽腺病毒的主要种特异性抗原决定族和次要亚属特异性抗原决定族，还能决定病毒对宿主细胞的嗜好，启动病毒的感染。Fiber-1一旦缺失会导致宿主体内的病毒数量下降，而Fiber-2缺失会造成病毒粒子无法形成。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)以PET-21a-GX-1-fiber2质粒为模板，Fiber-2-F，Fiber-2-R为引物进行扩增，得到Fiber-2目的片段；/n(2)以PXMJ19-C1786T-hexon(T7)质粒为模板，PXMJ19-T7-his-F，PXMJ19-T7-his-R为引物进行扩增，得到PXMJ19-C1786T-T7载体片段；/n(3)将Fiber-2目的片段和PXMJ19-C1786T-T7载体片段进行同源重组，得到重组质粒PXMJ19-T7-his-fiber2；/n(4)将重组质粒PXMJ19-...

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)以PET-21a-GX-1-fiber2质粒为模板，Fiber-2-F，Fiber-2-R为引物进行扩增，得到Fiber-2目的片段；
(2)以PXMJ19-C1786T-hexon(T7)质粒为模板，PXMJ19-T7-his-F，PXMJ19-T7-his-R为引物进行扩增，得到PXMJ19-C1786T-T7载体片段；
(3)将Fiber-2目的片段和PXMJ19-C1786T-T7载体片段进行同源重组，得到重组质粒PXMJ19-T7-his-fiber2；
(4)将重组质粒PXMJ19-T7-his-fiber2转化至ShuffleT7-B感受态细胞进行Fiber-2蛋白的表达；
所述引物序列分别如下：
Fiber-2-F：AAGAAGGAGATATAATGCTGCGTGCGC；
Fiber-2-R：AGCCGGATCTCATCAGTGGTGGTGG；
PXMJ19-T7-his-F：CCACCACCACTGATGAGATCCGGCT；
PXMJ19-T7-his-R：CACGCAGCATTATATCTCCTTCTTA；
所述PET-21a-GX-1-fiber2质粒的核苷酸序列为SEQIDNO:6；
所述PXMJ19-C1786T-hexon(T7)质粒的核苷酸序列为SEQIDNO:7。


2.根据权利要求1所述的一种大肠杆菌中高效表达禽腺病毒Fiber-2蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)所得Fiber-2目的片段的核苷酸序列为SEQIDNO:8。


3...

【专利技术属性】
技术研发人员：方倪冉，郑航辉，叶俊贤，董楠，杨小云，
申请(专利权)人：华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44