一种卤化酶重组表达载体制备方法及其应用技术

本发明专利技术以链霉菌

【技术实现步骤摘要】
一种卤化酶重组表达载体制备方法及其应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体为一种卤化酶重组表达载体制备方法及其应用。
技术介绍
卤化物是含有卤素原子氟、氯、溴或碘的一类有机化合物。大多数卤化物具有重要的生物活性，许多临床上使用的抗生素和抗肿瘤药物都是微生物来源的卤化物，如具有抗菌活性的氯霉素、万古霉素，具有抗肿瘤活性的蝴蝶霉素、C-1027等。2014年批准上市的4个新型抗生素中3个为卤化物，分别为Dalvance、Oritavanci、Sivextro.卤化物中的卤素原子对卤化物的生理活性有重要的影响，不但可以有效提高化合物的相关活性，并可延长半衰期，增加生物利用度。传统的卤化物挖掘主要依靠纯培养的方法，此方法的发现重复率高且不具有定向性。利用微生物也是卤化物发现的重要来源。
技术实现思路
本专利技术的目的在于上述
技术介绍
基础上，利用微生物技术，提供一种卤化酶异源表达载体及其构建。为达到上述目的，采用的技术方案为：所述卤化酶序列如SEQIDNO.1所示；1).根据链霉菌Streptom本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卤化酶重组表达载体制备方法，其特征是：所述卤化酶序列如SEQ ID NO.1所示，包含以下步骤：/n1）.根据链霉菌

【技术特征摘要】
1.一种卤化酶重组表达载体制备方法，其特征是：所述卤化酶序列如SEQIDNO.1所示，包含以下步骤：
1）.根据链霉菌Streptomyces31-2基因组测序结果设计编码基因的完全编码区扩增引物，Halo编码基因上下游引物分别加入了限制性内切酶BglⅡ和HindIII识别位点，引物HaloER的序列为：5'-CCCAAGCTTCGGCATGGCGGTCTTCATGT-3'，引物HaloEF的序列为：5'-GGAAGATCTATGGACACGACAGACACAGGCG-3'；
2）.HaloEF/ER卤化酶特异引物以Streptomycessp.FJS31-2基因组DNA为模板扩增，PCR产物纯化，TA克隆，通用引物M13F/M13R进行PCR验证，测序验证阳性克隆，菌株Halo-T用限制性酶BglⅡ和HindⅢ双酶切，双酶切片段连接相应酶切并去磷酸化处理的表达载体pET-32a，室温反应6h，转化JM109感受态细胞，特异引物菌液PCR鉴定及质粒酶切鉴定，测序鉴定，得到原核表达质粒载体pET-halo；最后得到阳性克隆菌质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞，特异引物菌液PCR鉴定...

【专利技术属性】
技术研发人员：王苗，李昱良，刘建国，王倩，任群利，胡欢，李小兰，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52