一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法及装置和应用制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法及装置和应用，该方法主要包括：先利用高孔隙率精准微孔滤膜对样本中的背景细胞和稀有目标细胞分别实现初次高效率去除与回收；再利用与背景细胞特异结合的免疫磁珠对背景细胞进行再次去除；最后，再次利用微孔滤膜对稀有目标细胞进行回收和富集。本发明专利技术提供的“先滤膜过滤，再磁珠负选”的方法，在实现背景细胞最大限度去除，保证稀有目标细胞高细胞活性、高体积通量、高灵敏度、高纯度分离与富集的同时，降低了免疫磁珠用量及经济成本。因此，本发明专利技术提供的方法，不仅操作流程简单、集成度高，避免了离心、液体转移等造成的细胞活性降低；而且经济成本低、装置便携，应用范围广、潜能大。

【技术实现步骤摘要】
一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法及装置和应用
本专利技术涉及生物医学基础研究及临床医学领域，特别是涉及一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法及装置和应用。
技术介绍
恶性肿瘤是危害人类健康的重大医学问题，2015年中国恶性肿瘤流行情况分析指出，我国平均每分钟有7人被诊断为肿瘤，4人死于肿瘤。近年来，液体活检已发展成为癌症精准医疗的关键技术之一。从液体中分离富集稀有细胞的液体活检技术在癌症早期检测和动态预后监测中具有巨大的应用前景。液体活检方法主要可分为基于物理性质分离和基于生物亲和性分离两类。基于物理性质的稀有目标细胞分离方法可以保留稀有目标细胞的异质性，并且能够实现全部稀有目标细胞的富集。其中，基于尺寸分离的微孔过滤法已被公认为有望实现高通量分离，满足处理实际临床样品需求。然而，由于稀有目标细胞与其他血细胞在尺寸上有一定重叠，使得通过微孔过滤法富集液体中稀有目标细胞纯度较低。目前，逐渐有研究者将基于生物亲和性分离和尺寸分离相结合，通过复合方式扬长避短，提高稀有目标细胞的分离富集效果。如在专利CN104178454A分离富循环肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法，其特征在于，所述方法包括：/n步骤1，通过表面功能化修饰的微孔滤膜，对复杂液体样品进行分离，使得稀有目标细胞被俘获于微孔滤膜；所述复杂液体样品包括稀有目标细胞和背景细胞；/n步骤2，激活俘获有稀有目标细胞的微孔滤膜的表面功能化修饰层，使得所述微孔滤膜上的稀有目标细胞被释放/回收到预处理后的低吸附样品管中，得到初级稀有目标细胞悬液；/n步骤3，基于生物亲和性原理负选去除所述初级稀有目标细胞悬液中混有的背景细胞，得到次级稀有目标细胞悬液；/n步骤4，通过所述表面功能化修饰的微孔滤膜，对所述次级稀有目标细胞悬液中的稀有目标细胞进行回收、富集与释放，得到稀有...

【技术特征摘要】
1.一种高细胞活性稀有细胞分离与富集的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1，通过表面功能化修饰的微孔滤膜，对复杂液体样品进行分离，使得稀有目标细胞被俘获于微孔滤膜；所述复杂液体样品包括稀有目标细胞和背景细胞；
步骤2，激活俘获有稀有目标细胞的微孔滤膜的表面功能化修饰层，使得所述微孔滤膜上的稀有目标细胞被释放/回收到预处理后的低吸附样品管中，得到初级稀有目标细胞悬液；
步骤3，基于生物亲和性原理负选去除所述初级稀有目标细胞悬液中混有的背景细胞，得到次级稀有目标细胞悬液；
步骤4，通过所述表面功能化修饰的微孔滤膜，对所述次级稀有目标细胞悬液中的稀有目标细胞进行回收、富集与释放，得到稀有目标细胞悬液。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面功能化修饰的微孔滤膜包括微孔滤膜基体和表面功能修饰剂；
所述表面功能修饰剂附着在所述微孔滤膜基体的表面。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，制备所述微孔滤膜基体的材料包括聚对二甲苯、硅、氮化硅、钯、SU8和聚二甲基硅氧烷中的任意一种；
所述表面功能修饰剂为具有生物兼容性好、易于可控切换的材料，包括聚乙烯醇、海藻酸凝胶、明胶、胶原中的任意一种；其中，所述可控切换是指结构或性能可切换，包括聚合大分子溶解成小分子、固态相变为液态、亲水性切换成疏水性中的任意一种或多种。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表面功能化修饰的微孔滤膜的膜孔的形状包括：正六边形、圆形、正四边形、正三边形中的任意一种；
所述表面功能化修饰的微孔滤膜的膜孔的直径，根据所述稀有目标细胞的直径确定；相邻膜孔间的连接部分的最大距离小于所述背景细胞直径的一半。


5.根据权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于，所述表面功能化修饰的微孔滤膜，是按照以下步骤获得的：
步骤S11，通过表面功能修饰剂溶液润湿载破片，并将微孔滤膜基体放置于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，刘姚萍，许清梅，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11