多部分萤光素酶制造技术

本文提供了用于组装三部分或多部分生物发光复合物的组合物和方法。特别地，生物发光复合物在两个或更多个肽标签(例如，单独地或以二肽或三肽形式融合的)和多肽组分相互作用时形成。时形成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多部分萤光素酶
专利

[0001]本文提供了用于组装三部分或多部分生物发光复合物的组合物和方法。特别地，生物发光复合物在两个或更多个肽标签(例如，单独地或以二肽或三肽形式融合的)和多肽组分的相互作用时形成。
[0002]专利技术背景
[0003]生物过程和分析物检测依赖于分子、大分子和分子复合物之间的共定位和相互作用。为了理解此类过程以及开发技术和化合物来操纵它们用于研究、临床和其它实际应用，有可用的工具来检测和监测这些共定位/相互作用是必要的。对这些相互作用(特别是在生理条件下(例如，在用于监测蛋白质相互作用的正常表达水平下)或在复杂的样品基质(例如，血液样品、环境样品)中)的研究，需要高灵敏度。

技术实现思路

[0004]本文提供了用于组装三部分或多部分生物发光复合物的组合物和方法。特别地，生物发光复合物在两个或更多个肽标签(例如，单独地或以二肽或三肽形式融合的)和多肽组分的相互作用时形成。
[0005]在本文的实施方案开发过程中进行的实验显示了由一种或多种互补多肽和一种或多种互补肽进行的生物发光复合物的组装，所述生物发光复合物能够在合适的底物(例如，腔肠素或腔肠素类似物底物)存在的情况下产生发光，所述互补多肽和互补肽共同跨越萤光素酶基本序列的长度(或>长度的75％、>长度的80％、>长度的85％、>长度的90％、>长度的95％或更长)(或共同包含至少40％的与萤光素酶基本序列的序列同一性(例如，>40％、>45％、>50％、>55％、>60％、>65％、>70％、>75％>80％、>85％、>90％、>95％或更高))。在一些实施方案中，一种或多种“互补”多肽和一种或多种互补肽是单独的分子，所述分子各自对应于萤光素酶基本序列的一部分。通过结构互补性，它们组装形成生物发光复合物。
[0006]在一些实施方案中，一种或多种互补多肽和一种或多种肽是萤光素酶基本序列的片段，所述片段组装形成生物发光复合物。在一些实施方案中，片段共同包含萤光素酶基本序列的全长。在一些实施方案中，片段共同包含萤光素酶基本序列全长的至少75％(例如，>长度的75％、>长度的80％、>长度的85％、>长度的90％、>长度的95％或更长)。
[0007]在一些实施方案中，一种或多种互补多肽和一种或多种互补肽是萤光素酶基本序列的部分的变体，其各自包含至少40％的与萤光素酶基本序列的相应部分的序列同一性(例如，>40％、>45％、>50％、>55％、>60％、>65％、>70％、>75％>80％、>85％、>90％、>95％或更高)，所述变体组装形成生物发光复合物。在一些实施方案中，一种或多种互补多肽和一种或多种互补肽是萤光素酶基本序列的部分的变体，其共同包含至少40％的与整个萤光素酶基本序列的序列同一性(例如，>40％、>45％、>50％、>55％、>60％、>65％、>70％、>75％>80％、>85％、>90％、>95％或更高)，所述变体组装形成生物发光复合物。在一些实施方案中，片段共同包含萤光素酶基本序列的全长。在一些实施方案中，一种或多种互补多肽和一
种或多种肽共同包含萤光素酶基本序列全长的至少75％(例如，>长度的75％、>长度的80％、>长度的85％、>长度的90％、>长度的95％或更长)。
[0008]萤光素酶基本序列的实例包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:788和SEQ ID NO:789。本文的一些实施方案提供了为萤光素酶基本序列(例如，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:788和SEQ ID NO:789)的片段或其变体(例如，>40％、>45％、>50％、>55％、>60％、>65％、>70％、>75％>80％、>85％、>90％、>95％的序列同一性)的多肽组分，和共同跨越萤光素酶基本序列的其余部分的一种或多种互补肽和/或一种或多种互补多肽。例如，如果萤光素酶基本序列的长度为170个氨基酸残基，则示例性多肽组分的长度可以是例如102个、124个、133个或148个氨基酸，互补的1个、2个、3个、4个、5个或更多个互补肽对应于剩余的68个、46个、37个或22个氨基酸。在一些实施方案中，每个多肽组分各自包含至少40％(例如，>40％、>45％、>50％、>55％、>60％、>65％、>70％、>75％、>80％、>85％、>90％、>95％或更高)的与萤光素酶基本序列的相应部分的序列同一性。
[0009]在一些实施方案中，本文提供了系统或试剂盒，其包含：(a)多肽组分，其包含40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的与SEQ ID NO:788或SEQ ID NO:789的多肽片段的序列同一性；和(b)一种或多种互补肽、互补二肽、互补三肽和/或互补多肽，其共同包含40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的与SEQ ID NO:788或SEQ ID NO:789的互补部分的序列同一性；其中当与单独由多肽组分或一种或多种互补肽、互补二肽、互补三肽和/或互补多肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下，由多肽组分和一种或多种互补肽、互补二肽、互补三肽和/或互补多肽组装的生物发光复合物产生的生物发光信号得以显著增强。在一些实施方案中，多肽组分包含40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的与SEQ ID NO:790的序列同一性，并且一种或多种互补肽、互补二肽、互补三肽和/或互补多肽共同包含40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种肽，其包含与SEQ ID NO:23具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:29具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中当所述肽接触由SEQ ID NO:25组成的第二肽和由SEQ ID NO:17组成的多肽互补物时，当与单独由所述肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。2.如权利要求1所述的肽，其中当所述肽与所述第二肽和所述多肽互补物缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。3.如权利要求1所述的肽，其中所述肽与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9的肽相比，表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述第二肽和所述多肽互补物组合时，对所述第二肽和所述多肽互补物的亲和力、表达、溶解度、稳定性和生物发光活性。4.如权利要求1所述的肽，其中所述氨基酸序列不是天然存在的蛋白质或其片段。5.如权利要求4所述的肽，其中所述氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。6.一种核酸，其包含编码权利要求1所述的肽的序列。7.一种融合多肽，其包含权利要求1所述的肽和附加氨基酸序列。8.如权利要求7所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。9.如权利要求8所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。10.如权利要求8所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽与第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。11.如权利要求8所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。12.如权利要求8所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。13.一种核酸，其包含编码权利要求7所述的融合多肽的序列。14.一种肽，其包含与SEQ ID NO:25具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中当所述肽接触由SEQ ID NO:23组成的第二肽和由SEQ ID NO:17组成的多肽互补物时，当与单独由所述肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。15.如权利要求14所述的肽，其中当所述肽与所述第二肽和所述多肽互补物缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。16.如权利要求14所述的肽，其中所述肽与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10的肽相比，
表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述第二肽和所述多肽互补物组合时，对所述第二肽和所述多肽互补物的亲和力、表达、溶解性、稳定性和生物发光活性。17.如权利要求14所述的肽，其中所述氨基酸序列不是天然存在的蛋白质或其片段。18.如权利要求17所述的肽，其中所述氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。19.一种核酸，其包含编码权利要求14所述的肽的序列。20.一种融合多肽，其包含权利要求14所述的肽和附加氨基酸序列。21.如权利要求20所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。22.如权利要求21所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。23.如权利要求21所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽与第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。24.如权利要求21所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。25.如权利要求21所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。26.一种核酸，其包含编码权利要求20所述的融合多肽的序列。27.一种组合物，其包含：(a)第一肽，其包含与SEQ ID NO:25具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；和(b)第二肽，其包含与SEQ ID NO:23具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:29具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；其中当所述第一肽接触所述第二肽和由SEQ ID NO:17组成的多肽互补物时，当与单独由所述第一肽和/或所述第二肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。28.如权利要求27所述的组合物，其中当所述第一肽与所述第二肽和所述多肽互补物缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。29.如权利要求27所述的组合物，其中与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10的肽相比，所述第一肽表现出一种或多种特性的增强，并且与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:29的肽相比，所述第二肽表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述第二肽和所述多肽互补物组合时，对所述第二肽和所述多肽互补物的亲和力、表达、溶解度、稳定性和生物发光活性。30.如权利要求27所述的组合物，其中所述第一肽和/或第二肽的氨基酸序列不是天然
存在的蛋白质或其片段。31.如权利要求30所述的组合物，其中所述第一肽和/或第二肽的氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。32.一种包含核酸的组合物，所述核酸包含编码权利要求27所述的第一肽和第二肽的序列。33.一种包含融合多肽的组合物，所述融合多肽包含权利要求27所述的第一肽和第二肽以及附加氨基酸序列。34.如权利要求33所述的组合物，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。35.如权利要求34所述的组合物，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。36.如权利要求34所述的组合物，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽和第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。37.如权利要求34所述的组合物，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。38.如权利要求34所述的组合物，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。39.一种包含核酸的组合物，所述核酸包含编码权利要求33所述的组合物的序列。40.一种多肽，其包含与SEQ ID NO:17具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8和/或SEQ ID NO:27具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中当所述多肽接触由SEQ ID NO:23组成的第一肽和由SEQ ID NO:25组成的第二肽时，当与单独由所述肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。41.如权利要求40所述的多肽，其中当所述多肽与所述第一肽和所述第二肽缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。42.如权利要求40所述的多肽，其中与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8的多肽相比，所述多肽表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述第一肽和第二肽组合时，对所述第一肽和/或第二肽的亲和力、表达、溶解度、稳定性和生物发光活性。43.如权利要求40所述的多肽，其中所述氨基酸序列不是天然存在的蛋白质或其片段。44.如权利要求43所述的多肽，其中所述氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。45.一种核酸，其包含编码权利要求40所述的多肽的序列。46.一种融合多肽，其包含权利要求40所述的多肽和附加氨基酸序列。47.如权利要求46所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目
标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。48.如权利要求47所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin，适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。49.如权利要求47所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽与第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。50.如权利要求47所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。51.如权利要求47所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。52.一种核酸，其包含编码权利要求46所述的融合多肽的序列。53.一种多肽，其包含与SEQ ID NO:51和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性并且与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:27具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中当所述多肽接触由SEQ ID NO:23组成的第一肽和由SEQ ID NO:25组成的第二肽时，当与单独由所述肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。54.如权利要求53所述的多肽，其中当所述多肽与所述第一肽和所述第二肽缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。55.如权利要求53所述的多肽，其中与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8的多肽相比，所述多肽表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述第一肽和第二肽组合时，对所述第一肽和/或第二肽的亲和力、表达、溶解度、稳定性和生物发光活性。56.如权利要求53所述的多肽，其中所述氨基酸序列不是天然存在的蛋白质或其片段。57.如权利要求56所述的多肽，其中所述氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。58.一种核酸，其包含编码权利要求53所述的多肽的序列。59.一种融合多肽，其包含权利要求53所述的多肽和附加氨基酸序列。60.如权利要求59所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。61.如权利要求60所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。
62.如权利要求60所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽与第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。63.如权利要求60所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。64.如权利要求60所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。65.一种核酸，其包含编码权利要求59所述的融合多肽的序列。66.一种生物发光复合物，其包含：(a)多肽，其包含与SEQ ID NO:17、21或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有小于100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)第一肽，其包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；和(c)第二肽，其包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；其中当在单独的所述多肽、单独的所述第一肽、单独的所述第二肽以及所述多肽、所述第一肽和所述第二肽中的任意两种存在的情况下与腔肠素或腔肠素类似物底物相比时，所述生物发光复合物在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生显著增强的生物发光。67.如权利要求66所述的生物发光复合物，其中所述第一肽是第一肽标签，其中所述第二肽是第二肽标签，并且其中所述第一肽标签和所述第二肽标签各自连接至独立地选自由以下组成的组的部分：目标分子、目标肽、目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件或结合部分。68.如权利要求67所述的生物发光复合物，其中所述第一肽标签或所述第二肽标签连接至药物或药物候选物，并且另一肽标签连接至药物靶标或候选药物靶标，并且其中来自所述生物发光复合物的生物发光的强度与所述药物或药物候选物对所述药物靶标或候选药物靶标的亲和力相关。69.如权利要求67所述的生物发光复合物，其中所述第一肽标签连接至第一相互作用元件，并且所述第二肽标签连接至第二相互作用元件，并且其中在所测定的条件下，来自所述生物发光复合物的生物发光的强度与所述第一相互作用元件对所述第二相互作用元件的亲和力相关。70.如权利要求67所述的生物发光复合物，其中所述第一肽标签连接至第一共定位元件，并且所述第二肽标签连接至第二共定位元件，并且其中在所测定的条件下，显著增强的生物发光指示所述第一共定位元件和所述第二共定位元件的共定位，但不一定是相互作用。71.一种方法，其包括：
(a)组合：(i)第一肽，其包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，(ii)第二肽，其包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，(iii)多肽组分，其包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在第一分子实体与第二分子实体相互作用时产生生物发光复合物，和(iv)腔肠素或腔肠素类似物底物；以及(b)检测发光，其中与单独由所述多肽组分和腔肠素或腔肠素类似物产生的发光水平相比，更高的发光水平指示所述多肽组分和所述第一肽及第二肽的生物发光复合物的形成。72.如权利要求71所述的方法，其中使所述多肽组分以及所述第一肽和第二肽中的一种或多种在细胞中表达，外源性添加到细胞中，并且/或者添加到样品中。73.一种检测第一分子实体与第二分子实体之间相互作用的方法，所述方法包括：(a)用第一肽标签给所述第一分子实体加标签，所述第一肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)用第二肽标签给所述第二分子实体加标签，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(c)组合所述加标签的第一分子实体和所述加标签的第二分子实体；(d)添加多肽组分，所述多肽组分包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在所述第一分子实体与所述第二分子实体相互作用时产生生物发光复合物；(e)添加腔肠素或腔肠素类似物底物；以及(f)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中所述发光信号的量值与所述第一分子实体和所述第二分子实体之间的相互作用的强度相关。74.如权利要求73所述的方法，其中所述第一分子实体和/或所述第二分子实体是目标蛋白质或目标肽，并且加标签包括产生所述第一分子实体和/或所述第二分子实体与所述第一肽标签和/或第二肽标签的融合物。
75.如权利要求73所述的方法，其中所述第一分子实体和/或所述第二分子实体是小分子，并且加标签包括将所述第一分子实体和/或所述第二分子实体与所述第一肽标签和/或第二肽标签直接或间接连接。76.如权利要求73所述的方法，其中所述第一分子实体和所述第二分子实体之一是药物或药物候选物，而另一者是药物靶标或候选药物靶标，并且所述生物发光信号指示所述药物或药物候选物与作为药物靶标或候选药物靶标的另一者的结合。77.如权利要求73所述的方法，其中组合所述加标签的第一分子实体和所述加标签的第二分子实体包括在细胞内表达一者或两者并且/或者将一者或两者添加到细胞中。78.一种用细胞检测第一蛋白质或肽实体与第二蛋白质或肽实体之间的相互作用的方法，所述方法包括：(a)在所述细胞内表达包含所述第一蛋白质或肽实体和第一肽标签的融合物，所述第一肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)在细胞内表达包含第二蛋白质或肽实体和第二肽标签的融合物，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(c)用所述细胞表达多肽组分，所述多肽组分包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在所述第一蛋白质或肽实体与所述第二蛋白质或肽实体相互作用时产生生物发光复合物；(d)向所述细胞中添加腔肠素或腔肠素类似物底物；以及(e)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中所述发光信号的量值与所述第一蛋白质或肽实体和所述第二蛋白质或肽实体之间的相互作用的强度相关。79.一种检测第一分子实体和第二分子实体的共定位的方法，所述方法包括：(a)用第一肽标签给所述第一分子实体加标签，所述第一肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)用第二肽标签给所述第二分子实体加标签，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(c)在同一系统中组合所述加标签的第一分子实体和所述加标签的第二分子实体；(d)向所述系统中添加多肽组分，所述多肽组分包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨
基酸序列，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在所述第一分子实体和所述第二分子实体共定位时产生生物发光复合物；(e)向所述系统中添加腔肠素或腔肠素类似物底物；以及(f)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中高于背景的发光信号的存在指示所述第一分子实体和所述第二分子实体在所述系统内的共定位，并且/或者其中所述发光信号的量值与所述第一分子实体和所述第二分子实体在所述系统内的共定位的量相关。80.如权利要求79所述的方法，其中所述系统包括细胞样品、组织样品、器官样品、整个生物体样品、生化样品、非细胞样品。81.如权利要求79所述的方法，其中所述第一分子实体和/或所述第二分子实体是目标蛋白质或目标肽，并且加标签包括产生所述第一分子实体和/或所述第二分子实体与所述第一肽标签和/或第二肽标签的融合物。82.如权利要求79所述的方法，其中所述第一分子实体和/或所述第二分子实体是小分子，并且加标签包括将所述第一分子实体和/或所述第二分子实体与所述第一肽标签和/或第二肽标签直接或间接连接。83.如权利要求79所述的方法，其中组合所述加标签的第一分子实体和所述加标签的第二分子实体包括在所述系统中表达一者或两者并且/或者向所述系统中添加一者或两者。84.一种用细胞检测第一蛋白质或肽实体和第二蛋白质或肽实体的共定位的方法，所述方法包括：(a)在所述细胞内表达包含所述第一蛋白质或肽实体和第一肽标签的融合物，所述第一肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(b)在所述细胞内表达包含所述第二蛋白质或肽实体和第二肽标签的融合物，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；(c)用所述细胞表达多肽组分，所述多肽组分包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在所述第一蛋白质或肽实体和所述第二蛋白质或肽实体共定位时产生生物发光复合物；(d)向所述细胞中添加腔肠素或腔肠素类似物底物；以及(e)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中高于背景的发光信号的存在指示所述第一蛋白质或肽实体和所述第二蛋白质或肽实体在所述细胞内的共定位，并且/或者其中所述发光信号的量值与所述第一蛋白质或肽实体和所述第二蛋白质或肽实体在所述系统内的共定位的量相关。85.一种试剂盒，其包含：(a)与第一肽标签缀合的第一结合部分，所述第一肽标签包含与SEQ ID NO:23具有
40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列；和(b)与第二肽标签缀合的第二结合部分，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列。78.如权利要求77所述的试剂盒，其中所述第一结合部分独立地选自由以下组成的组：抗体(例如，多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。79.如权利要求78所述的试剂盒，其中所述第一结合部分和第二结合部分是初级结合部分，其被配置成结合相同靶实体上的抗原、表位或序列。80.如权利要求78所述的试剂盒，其中所述第一结合部分和第二结合部分是次级结合部分，其被配置成结合初级结合部分上的抗原、表位或序列。81.如权利要求78所述的试剂盒，所述试剂盒还包含多肽试剂，所述多肽试剂包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列。82.如权利要求81所述的试剂盒，所述试剂盒还包含腔肠素或腔肠素类似物。83.一种检测靶分子的方法，其中所述靶分子展示第一抗原、第一表位或第一序列以及不同的第二抗原、第二表位或第二序列，所述方法包括：(a)使含有所述靶分子的样品与(i)识别第一抗原、第一表位或第一序列的第一初级结合部分和(ii)识别所述第二抗原、第二表位或第二序列的第二初级结合部分接触，并使所述第一初级结合部分和第二初级结合部分与所述第一抗原、第一表位或第一序列和第二抗原、第二表位或第二序列结合；(b)使所述样品与(i)与第一肽标签缀合的第一次级结合部分和(ii)与第二肽标签缀合的第二次级结合部分接触，其中所述第一次级结合部分识别所述第一初级结合部分，并且所述第二次级结合部分识别所述第二初级结合部分，其中所述第一肽标签或第二肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述第一肽标签或第二肽标签中的另一者包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，并且使所述第一次级结合部分和第二次级结合部分与所述第一初级结合部分和第二初级结合部分结合；(c)使所述样品与多肽组分接触，所述多肽组分与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％
或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在相互作用时产生生物发光复合物；(d)使所述样品与腔肠素或腔肠素类似物底物接触；以及(e)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中高于背景的发光信号的存在指示所述靶分子的存在，并且/或者其中所述发光信号的量值与所述样品中靶分子的量相关。84.如权利要求83所述的方法，其中所述结合部分独立地选自由以下组成的组：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。85.如权利要求83所述的方法，其中所述靶分子是蛋白质、核酸或小分子。86.如权利要求83所述的方法，其中所述样品是体外的或体内的。87.一种检测靶分子的方法，其中所述靶分子展示第一抗原、第一表位或第一序列以及不同的第二抗原、第二表位或第二序列，所述方法包括：(a)使所述样品与(i)与第一肽标签缀合的第一结合部分和(ii)与第二肽标签缀合的第二结合部分接触，其中所述第一次级结合部分识别所述第一抗原、第一表位或第一序列，并且所述第二结合部分识别所述第二抗原、第二表位或第二序列，其中所述第一肽标签或第二肽标签包含与SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和/或SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述第一肽标签或第二肽标签中的另一者包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，并且使所述第一结合部分和第二结合部分与所述第一抗原、第一表位或第一序列和第二抗原、第二表位或第二序列结合；(c)使所述样品与多肽组分接触，所述多肽组分与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性，其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在相互作用时产生生物发光复合物；(d)使所述样品与腔肠素或腔肠素类似物底物接触；以及(e)检测由所述生物发光复合物产生的发光信号，其中高于背景的发光信号的存在指示所述靶分子的存在，并且/或者其中所述发光信号的量值与所述样品中靶分子的量相关。88.如权利要求87所述的方法，其中所述结合部分独立地选自由以下组成的组：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述
分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。89.如权利要求87所述的方法，其中所述靶分子是蛋白质、核酸或小分子。90.如权利要求87所述的方法，其中所述样品是体外样品、体内样品或生化样品。91.一种β9/β10样二肽，其包含与SEQ ID NO:35具有高于40％但低于100％的序列同一性并且与SEQ ID NO:205和SEQ ID NO:206具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，其中当所述肽接触由SEQ ID NO:17、21和/或302组成的多肽互补物时，当与单独由所述肽和腔肠素底物产生的生物发光信号相比时，在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生的生物发光信号得以显著增强。92.如权利要求91所述的β9/β10样二肽，其中当所述肽与所述多肽互补物缔合时，所述生物发光信号得以显著增强。93.如权利要求91所述的β9/β10样二肽，其中所述肽与SEQ ID NO:205和/或SEQ ID NO:206的肽相比，表现出一种或多种特性的增强，其中所述特性选自：当与所述多肽互补物组合时，对所述多肽互补物的亲和力、表达、溶解度、稳定性和生物发光活性。94.如权利要求91所述的β9/β10样二肽，其中所述氨基酸序列不是天然存在的蛋白质或其片段。95.如权利要求94所述的β9/β10样二肽，其中所述氨基酸序列包含非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或类肽氨基酸。96.一种核酸，其包含编码权利要求91所述的β9/β10样二肽的序列。97.一种融合多肽，其包含权利要求91所述的β9/β10样二肽和附加氨基酸序列。98.如权利要求97所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列选自由以下组成的组：目标蛋白质、相互作用元件、共定位元件和结合部分。99.如权利要求98所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是选自由以下组成的组的结合部分：抗体(多克隆的、单克隆的和/或重组的)、抗体片段、蛋白A、蛋白A的Ig结合结构域、蛋白G、蛋白G的Ig结合结构域、蛋白A/G、蛋白A/G的Ig结合结构域、蛋白L、蛋白L的Ig结合结构域、蛋白M、蛋白M的Ig结合结构域、寡核苷酸探针、肽核酸、DARPin、适体、affimer、纯化的蛋白质(所述分析物本身或与所述分析物结合的蛋白质)和蛋白质的一个或多个分析物结合结构域。100.如权利要求98所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一相互作用多肽，其被配置成在所述第一相互作用多肽与第二相互作用多肽接触时与所述第二相互作用多肽形成复合物。101.如权利要求98所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是第一共定位多肽，其被配置成与第二共定位多肽在细胞区室、细胞、组织或生物体内共定位。102.如权利要求98所述的融合多肽，其中所述附加氨基酸序列是目标蛋白质，并且是候选药物靶标。103.一种核酸，其包含编码权利要求97所述的融合多肽的序列。104.一种进行竞争性测定以检测第一分子实体与第二分子实体之间的相互作用的方法，所述方法包括：(a)组合：(i)包含用第一肽标签加标签的所述第一分子实体的示踪剂，所述第一肽标签包含与
SEQ ID NO:23具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，(ii)用第二肽标签加标签的所述第二分子实体，所述第二肽标签包含与SEQ ID NO:25具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:10具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，(iii)腔肠素或腔肠素类似物底物，(iv)多肽组分，其包含与SEQ ID NO:17、21和/或302具有40％或更高(例如，40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高)的序列同一性，并且与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:8具有低于100％的序列同一性的氨基酸序列，和(v)怀疑含有未加标签的第一分子实体的样品；其中所述第一肽标签、所述第二肽标签和所述多肽组分被配置成在所述腔肠素或腔肠素类似物底物存在的情况下产生生...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：普洛麦格公司，
类型：发明
国别省市：