一种算盘子药材的HPLC指纹图谱测定方法技术

本发明专利技术公开了一种算盘子药材HPLC指纹图谱的测定方法，涉及中药材的指纹图谱技术领域，方法包括对照品溶液制备、供试品制备、高效液相色谱测定和指纹图谱的建立，经药材提取和高效液相色谱检测，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为0.3%甲酸水溶液

【技术实现步骤摘要】
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304）指纹图谱的建立 根据5批不同产地的药材样品的HPLC指纹图谱结果, 利用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”生成药材共有模式的对照HPLC指纹图谱, 得14个共有特征峰，依次标记，共有峰的保留时间为：12.746（峰1）、16.832（峰2S1）、19.634（峰3）、20.403（峰4）、25.212（峰5 S2）、29.031（峰6）、30.778（峰7）、43.567（峰8）、49.995（峰9）、50.524（峰10）、51.437（峰11）、52.803（峰12）、53.327（峰13）、55.487（峰14）。
[0008]本实验过程中测定条件的选择及优化包括：1）本实验过程中分别测定了在 254、270、320、340nm波长处的色谱图，结果在340nm处各色谱峰均有较好的紫外吸收，峰数较多，且基线较平。
[0009]2）本实验过程中分别考察了柱温为 25、30、35 ℃的色谱图，在柱温为 35℃时,各峰的分离度较好。本实验中分别考察了 0.8mL/min、1.0mL/min 、1. 2mL/min 不同流速下的色谱,结果表明以0.8 mL/min 为流速各色谱峰分离度较好,保留时间适中。 3）本实验过程中使用了多种流动相体系包括: 甲醇
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水、甲醇
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0. 5%甲酸 、乙腈
‑
水、乙腈
‑
0. 5%磷酸、0. 3 % 甲酸水溶液
‑
甲醇
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乙腈等流动相系统进行梯度洗脱，并对梯度洗脱程序优化，结果表明以0. 3 % 甲酸水溶液
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甲醇
‑
乙腈为系统及其梯度程序使各色谱峰达到基线分离，分离较好，基线较平稳，保留时间适中。
[0010]4）本实验过程中对不同提取溶剂( 甲醇、乙醇 ) 、不同的溶剂浓度（60%、70%、80%）、不同提取方法 ( 超声 、热回流 ) 以及提取时间进行了考察, 结果表明80%甲醇回流提取峰分离度较好，信号较好，效果最好。
[0011]本实验参照 《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》，研究并建立了算盘子药材指纹图谱的测定条件及方法, 采用国家药典委员会颁布的
ꢀ“
中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件计算指纹图谱的相似度，使用简单，可快速、准确的应用于算盘子药材指纹图谱的相似度分析研究中。本实验建立的算盘子药材纹图谱的特征共有色谱峰，能够为算盘子药材的鉴别和质量控制提供可靠的科学依据，对于加强药材的全面管理以及提高中药的质量控制具有重要的意义。
附图说明
[0012]图1为本专利技术测定的算盘子药材的HPLC指纹图谱。
具体实施方式
[0013]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0014]1.对照品溶液的制备 取没食子酸和牡荆素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每
l ml含50μg的溶液，即得。
[0015]2. 供试品溶液的制备 选择不同产地5个药材样品，分别取粉末约 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入80 % 甲 醇 100ml，加热回流2小时，放冷，摇匀，蒸干, 加水约30 mL，加乙酸乙酯萃取4次，每次约30 mL，合并乙酸乙酯层 ,蒸干，残渣加甲醇定容至10 mL ,采用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
[0016]3.仪器与材料Agilent 1200高效液相色谱仪，真空脱气机，柱温箱，自动进样器，二极管阵列检测器， Agilent Chemstation化学工作站，梅特勒－托利多电子天平、真空干燥箱；算盘子药材采自于安徽省5个不同地区，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯（色谱纯）；色谱柱：Agilent C18色谱柱。
[0017]4. 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为0. 3 % 甲酸水溶液（A）
‑
甲醇（B）
‑
乙腈（C），进行梯度洗脱；流速:0.8mL
·
min
‑
1 ; 柱温: 35 ℃; 进样量 : 10 μ L ；检测波长为340nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于4000。梯度洗脱程序为：时 间 min
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流动相 A
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流动相 B
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流动相C0
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305. 指纹图谱的测定与共有峰的确定5.1指纹图谱方法学考察精密度试验 精密吸取供试品溶液10μ L，按照色谱条件连续进样6次，经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”计算，色谱图与对照谱图相似度大于0.97，说明仪器良好，复核指纹图谱要求。
[0018]重复性试验 取同一批样品，平行制备6份供试品溶液，进样，经“中药色谱指纹图谱相似度评 价系统”计算，各色谱图与对照谱图相 似度均大于 0.97，说明该方法重复性良好。
[0019本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种算盘子药材的HPLC指纹图谱测定方法，其特征在于包括如下步骤：1）对照品溶液制备 取没食子酸和牡荆素对照品适量作为对照品1和对照品2，精密称定，加甲醇制成每lml含30
‑
50μg的溶液；2）供试品溶液制备 选择不同产地的5个药材样品，分别取粉末约 3
‑
10g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 加入80 % 甲 醇 100ml，加热回流2
‑
3小时，放冷，摇匀，滤液蒸干, 加水约 50 m L，加乙酸乙酯萃取3
‑
5次，每次约50 m L，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇定容至10 m L，采用0. 22μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液待测；3）测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5
‑
10μ1，注入液相色谱仪，测定，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为0.3% 甲酸水溶液（A）
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甲醇（B）
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乙腈（C），进行梯度洗脱；流速:0.8
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1 ; 柱温：35 ℃; 进样量：5
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15 μ L ；检测波长：340nm；理论板数按没食子酸峰计算应不低于4000；梯度洗脱程序为：时 间 min
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流动相 A
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流动相 B
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流动相C0
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【专利技术属性】
技术研发人员：丁配和，
申请(专利权)人：丁配和，
类型：发明
国别省市：