一种第12907位点发生突变的MSH6基因及其应用制造技术

本发明专利技术揭示了发生g.[12907inCAGC]突变的MSH6突变基因为HR的新的致病基因，MSH6突变基因的突变片段序列如SEQ ID NO：4所示。拥有SEQ ID NO：4所示序列的MSH6突变基因二倍体纯合基因型会导致人类低血磷性佝偻病的发生，拥有SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：1

【技术实现步骤摘要】
一种第12907位点发生突变的MSH6基因及其应用


[0001]本专利技术涉及医学分子生物学领域，具体涉及一种新的低血磷性佝偻病致病基因及其检测试剂盒。

技术介绍

[0002]低血磷性佝偻病(Hypophosphatemic Rickets，HR)是抗维生素D性佝偻病的主要类型，由于HR患者肾小管对磷的回收能力减弱，将会出现低血磷及维生素D代谢障碍，轻则导致低磷酸盐血症，重则发展成佝偻病或骨软化病等，还会累及听力和牙齿等。儿童HR主要表现为生长发育迟缓、身材矮小、佝偻病、骨骼及牙齿畸形，骨质疏松，行走无力等；成人HR主要是造成软骨病和骨关节畸形。生化检查显示HR患者的血磷明显降低，碱性磷酸酶明显升高，X线检查下呈现佝偻病骨格。HR是一种单基因遗传病，之前发现的病例主要以X
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性连锁显性遗传为主，目前比较明确的致病基因是X染色体上的PHEX突变基因，然而其具体的致病机制尚未被揭示。因此除临床体征和生化检查外，HR的鉴别诊断还需要结合明确的家族史及遗传分析。HR致畸、致残率高，会严重影响患者的身体健康，并会给家庭和社会造成沉重的负担。目前HR治疗以补充维生素D类似物和磷剂为主，然而治疗效果有限，因此对于HR归根结底还是应该遵循遗传学疾病以预防为主的原则，加强致病基因携带者筛查、生育指导和产前诊断，杜绝HR患儿的出生。因而揭示HR的致病基因对于HR的筛查、诊断、生育咨询、治疗药物和方法的开发具有重要的意义。
[0003]专利技术人前期收集6例家族性HR病例，对家系中的HR成员和相关正常成员进行了目标基因区域捕获测序，通过关联分析首次揭示了部分HR患者中存在着MSH6基因的特定突变(包括g.[7785
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7788delGTGA]、g.[7957inAA]、g.[12759inTTAAG]和g.[12907inCAGC]共4种突变)；并通过突变片段扩增和Sanger测序以及家系遗传分析，在HR人群和非HR人群中证实了所发现的4种新的MSH6突变基因均为HR的致病基因，且均呈常染色体隐性遗传模式。MSH6基因编码蛋白属于错配修复蛋白，又称为G/T错配结合蛋白(G/T mismatch binding protein，GTBp)，具有参与DNA碱基错配修复的功能，能参与识别并结合到错配位点后启动修复，再在其它错配修复相关酶的作用下共同完成错配位点的修复过程，已有研究显示该基因可能在肿瘤的发生发展中发挥作用，然而尚无研究报道显示该基因与HR存在关联，也无该基因跟磷的体内吸收和代谢相关的研究报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了MSH6基因的4种致病突变基因形式，并在此基础上提供了MSH6突变基因的检测试剂盒。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术的目的(1)在于提供4种MSH6突变基因形式，这4种突变基因分别是由野生型MSH6基因发生g.[7785
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7788delGTGA]、g.[7957inAA]、g.[12759inTTAAG]和g.[12907inCAGC]突变而形成的，NCBI登录号NC_000002.12所示序列中的第47783145
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47806954范围内的序列即为MSH6野生型基因参考序列，则这4种MSH6突变基因的突变片段序列分别如SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：4所示，其余序列参见MSH6野生型基因参考序列。拥有SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：4所示序列中的任一MSH6突变基因的二倍体纯合基因型以及SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：4所示序列中的任两个MSH6突变基因组成的二倍体杂合基因型这两种类型中的任一种均会导致人类低血磷性佝偻病的发生，且所述的4种MSH6致病突变基因均呈常染色体隐性遗传。
[0007]本专利技术的目的(2)在于提供一种可以同时检测MSH6基因的g.[7785
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7788delGTGA]、g.[7957inAA]、g.[12759inTTAAG]和g.[12907inCAGC]突变的PCR捕获测序试剂盒，试剂盒包含如SEQ ID NO：5
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SEQ ID NO：32所示序列的PCR捕获引物组；采用二代DNA测序解析PCR捕获测序产物以获取突变信息。
[0008]本专利技术的目的(3)在于提供一种扩增检测MSH6基因的g.[7785
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7788delGTGA]、g.[7957inAA]、g.[12759inTTAAG]和g.[12907inCAGC]突变的PCR试剂盒，试剂盒包含如SEQ ID NO：33
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SEQ ID NO：36所示序列的PCR引物对；采用如SEQ ID NO：33
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SEQ ID NO：34所示序列引物对扩增MSH6基因的g.[7785
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7788delGTGA]和g.[7957inAA]突变片段；采用如SEQ ID NO：35
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SEQ ID NO：36所示序列引物对扩增MSH6基因的g.[12759inTTAAG]和g.[12907inCAGC]突变片段；PCR扩增产物可直接通过Sanger测序进行序列解析。
[0009]本专利技术揭示的MSH6基因的g.[7785
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7788delGTGA]突变、g.[7957inAA]突变、g.[12759inTTAAG]突变和g.[12907inCAGC]突变及其检测试剂盒将有助于HR的筛查、诊断和生育咨询，特别是有助于从源头上杜绝HR患儿的出生；此外，对于MSH6基因特定突变的揭示也有助于HR发病机制的探究以及治疗药物和方法的开发。
附图说明
[0010]图1是#1家系图谱，图中方框代表男性，圆圈代表女性，罗马字母和数字组合如I1代表家系成员，II1和II2之间的双横线代表近亲结婚，黑色填充表示HR患者，字母AA、Aa、aa表示基因型，其中A代表野生型MSH6基因，a代表发生g.[7785
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7788delGTGA]突变的MSH6突变基因，++代表MSH6突变基因二倍体，+代表杂合子，
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代表野生型MSH6基因纯合子，箭头指向成员为HR先证者。
[0011]图2是#2家系图谱，图中方框代表男性，圆圈代表女性，罗马字母和数字组合如I1代表家系成员，黑色填充表示HR患者，字母Ac、bb、bc、Ab表示基因型，其中A代表野生型MSH6基因，b代表发生g.[7957inAA]突变的MSH6突变基因，c代表发生g.[12759inTTAAG]突变的MSH6突变基因，++代表MSH6突变基因二倍体，+代表杂合子。
[0012]图3是#3家系图谱，图中方框代表男性，圆圈代表女性，罗马字母和数字组合如I1代表家系成员，I1和I2之间的双横线代表近亲结婚，黑色填充表示HR患者，字母bb表示基因型，b代表发生g.[7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MSH6突变基因，其特征在于所述MSH6突变基因为低血磷性佝偻病的致病基因，该MSH6突变基因的突变片段序列如SEQ ID NO：4所示，它是由野生型MSH6基因发生g.[12907inCAGC]突变而形成的；拥有SEQ ID NO：4所示序列的MSH6突变基因二倍体纯合基因型会导致人类低血磷性佝偻病的发生，拥有SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：3所示序列中的任一个MSH6突变基因组成的二倍体杂合基因型也会导致人类低血磷性佝偻病的发生，且均呈常染色体隐性遗传。2.如权利要求1中所述的低血磷性佝偻病致病基因的检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄志玲，
申请(专利权)人：黄志玲，
类型：发明
国别省市：