检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器及其制备方法和检测恩诺沙星的方法技术

本发明专利技术公开了本发明专利技术提供一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用，首先利用湿化学法制备碳化钛‑溴化银纳米复合材料，再将其修饰在玻碳电极表面，再负载含有3’‑CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA‑5’COOH碱基序列的适配体，构建电化学发光适配体传感器，并基于该电化学发光适配体传感器检测检测恩诺沙星，具有操作简单、选择性好、检测成本低、灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】
检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器及其制备方法和检测恩诺沙星的方法
本专利技术属于电化学发光检测领域，涉及一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器及其制备方法和检测恩诺沙星的方法。
技术介绍
恩诺沙星(Enrofloxacin，简称ENR)，又称乙基环丙沙星、恩氟沙星，属于氟喹诺酮类化学合成抑菌剂。恩诺沙星被国家指定为动物专用药，它因具有抗菌性强、作用迅速、体内分布广及与其他抗生素间无交叉耐药性等特点而在动物和水产养殖业中被广泛应用。目前恩诺沙星己经列为兽药残留监控的重点，2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100μg/kg，在所有食品动物的肝、肾中最高残留限量为200μg/kg，欧盟也规定了动物源性食品中ENR的最大残留检测限为0.3μg/g。由于过量使用这种药物，使得其在动物体内大量的积累、残留，使得动物体的排泄物中也存在该物质，并且对周围的环境也产生了影响。其中水资源就遭受了严重的污染。然而，一旦水资源受到污染，那么人类的健康、公共安全和野外环境的安全都将受到威胁，因此需要一种高效准确地方法来监测水源的安全。目前，已经被报道的测定恩诺沙星的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)，毛细血管电泳法(CEP)，荧光光度法(FL)，化学发光免疫分析法(CLIA)，酶联免疫法(ELISA)等。但这些分析方法存在很多局限性，比如，高效液相色谱法与毛细血管电泳法具有较高的准确度，但仪器昂贵，分析灵敏度低；荧光光度法与化学发光法虽然具有较高的灵敏度，但是其需要特殊试剂且方法的选择性较差；而酶联免疫法，制备的抗体与多种残留药物进行反应，不宜作为单一检测方法，仅适用于对大量样品的快速筛选与检测；而免疫分析方法均是基于抗原-抗体特异性识别反应建立起来的，其原料抗体生产成本高、免疫活性易受离子强度、pH等环境因素影响。核酸适配体(Aptamer)，又称为模拟抗体，合成简单快速、成本低、选择性好、性质稳定且易于修饰标记，是一种新型的优良抗体替代识别元件。因此，开发一种简单快速、选择性好的检测恩诺沙星的方法是必要且极其重要的。电化学发光(ECL)也称为电致化学发光，是一种将电能转化为光能的分析技术，无需引入外部光源，在光电倍增管等光学仪器的辅助下采集发光强度图谱，并建立其与待测物关系从而实现微量分析的一种方法。它是化学发光和电化学方法的结合，具有操作简便、灵敏度高、背景低和检测时间短等优点。将电化学发光法与生物识别分子结合起来，可显著提高分析检测灵敏度和选择性，特别适用于被测物浓度低，组分复杂，干扰物多的环境样品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对恩诺沙星检测现有技术的不足，提供一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器及其制备方法和检测恩诺沙星的方法。本专利技术采用湿化学法制备碳化钛-溴化银纳米复合材料(Ti3C2-AgBr纳米复合材料)，并将其修饰到玻碳电极表面，使得电化学发光的灵敏度和稳定性显著提高，再通过静电吸附作用负载适配体进而获得电化学发光适配体传感器(简称Aptamer/Ti3C2-AgBr/GCE传感器)，可特异性识别目标分子恩诺沙星，提高了对恩诺沙星的选择性。为了实现本专利技术目的，所采用的技术方案为：一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器，所述电化学发光适配体传感器是由含有3’-CCCATCAGGGGGCTAGGCTAACACGGTTCGGCTCTCTGAGCCCGGGTTATTTCAGGGGGA-5’COOH碱基序列的适配体负载于Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面而成。如上所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，包括如下步骤：(1)采用湿化学法制备Ti3C2-AgBr纳米复合物，然后将Ti3C2-AgBr纳米复合物分散于DMF中，得分散液；(2)将玻碳电极抛光，依次用硝酸溶液、乙醇溶液和超纯水超声清洗，室温下吹干，获得前处理后的玻碳电极待用；用移液枪移取步骤(1)制得的分散液滴涂在前处理后的玻碳电极表面，自然晾干，得到所述Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极，再通过静电吸附作用将所述适配体负载在Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面，自然晾干，制得所述电化学发光适配体传感器。进一步的，步骤(1)所得分散液中Ti3C2-AgBr纳米复合材料的浓度为2±1mg/mL；和/或，所述步骤(2)中分散液的移取量为6±2μL。进一步的，所述步骤(2)中将适配体负载在Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面的方法为：首先向含有KCl、NaCl、MgCl2和EDTA的Tris-HCl缓冲溶液中加入所述适配体，配制适配体浓度为0.5～10μmol/L的适配体溶液，然后移取6±2μL的所述适配体溶液并将其滴涂在所述的Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面。进一步的，所述适配体溶液中适配体的浓度为2.0～5.0μmol/L，更进一步优选2.5μmol/L。一种检测恩诺沙星的方法，所述方法包括如下步骤：以如上所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，待测样品中的恩诺沙星被定量捕捉到传感器的表面，通过产生的发光信号进行检测。进一步的，还包括如下步骤：步骤1，含K2S2O8的PBS缓冲溶液的配制：用pH为7.0～8.0的0.1mol/L的PBS缓冲溶液配制含0.05～0.1mol/LK2S2O8的PBS缓冲溶液；步骤2，不同浓度的恩诺沙星标准溶液的配制：首先配制恩诺沙星溶液，然后将恩诺沙星溶液加入步骤1中的含K2S2O8的PBS缓冲溶液中，得到一系列不同浓度的恩诺沙星标准溶液，恩诺沙星标准溶液的浓度范围为1×10-12mol/L～1×10-6mol/L；步骤3，标准曲线的绘制：将所述电化学发光适配体传感器置于步骤2配制的不同浓度的恩诺沙星标准溶液中浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合恩诺沙星，然后取出后淋洗，作为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂电极为对电极，组成三电极体系，以步骤1中的含K2S2O8的PBS缓冲溶液为电解液，在-1.8～0V的电化学窗口范围内，光电倍增管高压600～800V，扫速0.05～0.125V/s，进行循环伏安扫描，记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合恩诺沙星前后的发光强度差值与恩诺沙星标准溶液中的恩诺沙星浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程；步骤4，待测样品中恩诺沙星的检测所述样品先过滤再用步骤1中的含K2S2O8的PBS缓冲溶液调节pH至与含K2S2O8的PBS缓冲溶液一致，然后放入电化学发光适配体传感器浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合恩诺沙星，然后取出后淋洗，作为工作电极，再采用步骤3方法检测发光强度，再根据线性回归方程计算出样品中恩诺沙星的浓度。进一步的，步骤3中所述的浸泡时间为20～40min，更进一步优选30min本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述电化学发光适配体传感器是由含有3’-CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCCCGG GTT ATT TCA GGG GGA-5’COOH碱基序列的适配体负载于Ti

【技术特征摘要】
1.一种检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述电化学发光适配体传感器是由含有3’-CCCATCAGGGGGCTAGGCTAACACGGTTCGGCTCTCTGAGCCCGGGTTATTTCAGGGGGA-5’COOH碱基序列的适配体负载于Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面而成。


2.如权利要求1所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)采用湿化学法制备Ti3C2-AgBr纳米复合物，然后将Ti3C2-AgBr纳米复合物分散于DMF中，得分散液；
(2)将玻碳电极抛光，依次用硝酸溶液、乙醇溶液和超纯水超声清洗，室温下吹干，获得前处理后的玻碳电极待用；用移液枪移取步骤(1)制得的分散液滴涂在前处理后的玻碳电极表面，自然晾干，得到所述Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极，再通过静电吸附作用将所述适配体负载在Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面，自然晾干，制得所述电化学发光适配体传感器。


3.根据权利要求2所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：步骤(1)所得分散液中Ti3C2-AgBr纳米复合材料的浓度为2±1mg/mL；和/或，所述步骤(2)中分散液的移取量为6±2μL。


4.根据权利要求2所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中将适配体负载在Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面的方法为：首先向含有KCl、NaCl、MgCl2和EDTA的Tris-HCl缓冲溶液中加入所述适配体，配制适配体浓度为0.5～10μmol/L的适配体溶液，然后移取6±2μL的所述适配体溶液并将其滴涂在所述的Ti3C2-AgBr纳米复合材料修饰的玻碳电极表面。


5.根据权利要求4所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述适配体溶液中适配体的浓度为2.0～5.0μmol/L。


6.根据权利要求4所述的检测恩诺沙星的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述适配体溶液中适配体的浓度为2.5μmol/L。


7.一种检测恩诺沙星的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
以如权利要求1中所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋鼎，秦明，王文昌，陈智栋，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32