检测PIEZO1基因突变的引物、试剂盒和方法技术

本发明专利技术涉及一种检测PIEZO1基因突变的引物和方法，其包括扩增PIEZO1基因外显子序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明专利技术可快速地将PIEZO1基因外显子的突变检测出来。本发明专利技术检测结果准确，可以辅助诊断遗传性口型红细胞增多症，对疾病的诊断有重要的参考意义。

【技术实现步骤摘要】
检测PIEZO1基因突变的引物、试剂盒和方法
本专利技术属于分子检测领域，特别涉及一种检测PIEZO1基因突变的引物、试剂盒和检测方法。
技术介绍
遗传性口型红细胞增多症(hereditarystomatocytosis，HSt)是一组以红细胞膜的离子渗透功能异常和成熟红细胞形态改变为特征的罕见遗传性溶血性贫血，其血液中出现不同比例的口形红细胞，口形红细胞是以宽的横向裂口或口状为特征的红细胞，可见于各种获得性遗传性疾病。在遗传性口形红细胞增多症中，口形红细胞的比例大于5％(正常小于4％)，最高可达10％～50％。遗传性口型红细胞增多症包括脱水性HSt，又称遗传性干瘪细胞增多症(hereditaryxerocytosis，Hx)和水化性HSt，Hx是HSt中最常见的亚型。Hx诊断主要基于临床特征和外周血红细胞形态，以往由于低发病率和临床表型异质性常致该病诊断延误。2018年Kaufman等报道，近年美国Hx发病率为1/8000，高于经典估测发病率(1/5000)约6倍，诊断时中位年龄约51岁。Hst临床表型异质性强而诊断手段有限，容易漏诊本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测PIEZO1基因突变的引物，其特征在于，包括扩增PIEZO1基因的引物，其碱基序列为：/nPIEZO1-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCTCCAGGCCCCAAC/nPIEZO1-1R：AACAGCTATGACCATGTCATGCTTCAGGAATGCG/nPIEZO1-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCATCCTCTGTTGGCGACCTA/nPIEZO1-2R：AACAGCTATGACCATGATTTCGGGACCCCTCATCTT/nPIEZO1-3-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTCAGGCCTCTGGGCTC/nPIEZO1-3...

【技术特征摘要】
1.检测PIEZO1基因突变的引物，其特征在于，包括扩增PIEZO1基因的引物，其碱基序列为：
PIEZO1-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCTCCAGGCCCCAAC
PIEZO1-1R：AACAGCTATGACCATGTCATGCTTCAGGAATGCG
PIEZO1-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCATCCTCTGTTGGCGACCTA
PIEZO1-2R：AACAGCTATGACCATGATTTCGGGACCCCTCATCTT
PIEZO1-3-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTCAGGCCTCTGGGCTC
PIEZO1-3-4R：AACAGCTATGACCATGGGTGGGAGTGTGGATGAGTC
PIEZO1-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGATTTCAGGCCCCAGGAAGT
PIEZO1-5R：AACAGCTATGACCATGCCTCAAAATGGCTGAGACCAC
PIEZO1-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGAGAGGTGGCGTCAGTG
PIEZO1-6R：AACAGCTATGACCATGTGTCTCCACAGTCATCAGGG
PIEZO1-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGATGACTGTGGAGACAGCG
PIEZO1-7R：AACAGCTATGACCATGGGCTAGACGAGCCAGGTG
PIEZO1-8-10F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCCACCTGGCTCGTCTA
PIEZO1-8-10R：AACAGCTATGACCATGCCGCACCCAGCCATACCTT
PIZEO1-11-12F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTAGGGCATAGTCAGGGTGGG
PIZEO1-11-12R：AACAGCTATGACCATGCGGGCAAGTGGACATTGAACAG
PIEZO1-13-15F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGCTGACTGTGACACCC
PIEZO1-13-15R：AACAGCTATGACCATGGGGAAGTGCACGGGGTTT
PIEZO1-16F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCGTCTACACCTTCCAGTTC
PIEZO1-16R：AACAGCTATGACCATGTTGGTATGAGCAAATGCCCCTT
PIEZO1-17F：TGTAAAACGACGGCCAGTACAGGGCTTCTTCCAGCC
PIEZO1-17R：AACAGCTATGACCATGAGCTGGGCAGGCCAGAG
PIEZO1-18-19F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGCCTGAAGGTGGGTTGG
PIEZO1-18-19R：AACAGCTATGACCATGTCGGGCTGCGAATACAGAGTT
PIEZO1-20-21F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTCCCTGTTTCTCAAACACCTG
PIEZO1-20-21R：AACAGCTATGACCATGGGCAATGTCCTTGCCTCACC
PIEZO1-23F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGACCGGGTGTCTCAGG
PIEZO1-23R：AACAGCTATGACCATGACTTGTGAGCAGATTTGGGG
PIEZO1-24-25F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTGGGAGGTGGGATTTATG
PIEZO1-24-25R：AACAGCTATGACCATGGCATCTGCTCCACGAAGAC
PIEZO1-26-27F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCACCGTCATCATCTCCAAG
PIEZO1-26-27R：AACAGCTATGACCATGGGCCTGAGACAGTGAGGAAC
PIEZO1-28-29F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTTGCTGGGGTCGAGTGC
PIEZO1-28-29R：AACAGCTATGACCATGGCCTGCCAGACAGAGGGT
PIEZO1-30F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGACGGGAGCACTCACAGC
PIEZO1-30R：AACAGCTATGACCATGGAAGATAGCAGGCCAGGCAGA
PIEZO1-31F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGTCTGGCTGGGAGTC
PIEZO1-31R：AACAGCTATGACCATGCTGACACCCTCTATGCTGCC
PIEZO1-32-33F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCACCCAACTCCTGAATGG
PIEZO1-32-33R：AACAGCTATGACCATGGCCAAGAGAGACCTCCCAC
PIEZO1-35-36F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTGCTCTGCCTGACTACGC
PIEZO1-35-36R：AACAGCTATGACCATGCATGACGGCCCGATCTGTT
PIEZO1-37F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTCATGCCTTCGGGCAG
PIEZO1-37R：AACAGCTATGACCATGCAGGTACTTGACGACCACCG
PIEZO1-38F：TGTAAAACGACGGCCAGTGACGGCCATCGTCTTCAC
PIEZO1-38R：AACAGCTATGACCATGCCCTGGTGGAGAGCACAG
PIEZO1-39F：TGTAAAACGACGGCCAGTCACCTGTGCTCTCCACCAG
PIEZO1-39R：AACAGCTATGACCATGTCTGAGAAAGACCCTCCCTG
PIEZO1-40-42F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTCAGGAGCCATGAGCCAG
PIEZO1-40-42R：AACAGCTATGACCATGGGACCCCATCAGAAACAGCC
PIEZO1-42-43F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAGAGCTCAGCAGCCACC
PIEZO1-42-43R：AACAGCTATGACCATGCCAGGGTTCCCGTCAGG
PIEZO1-44F：TGTAAAACGACGGCCAGTAACCTCTTCCTCTTCCAGGG
PIEZO1-44R：AACAGCTATGACCATGGCAGTGCCTCTGTCTTAGGG
PIEZO1-45-47F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCAGAGCTGAGCGTATGACC
PIEZO1-45-47R：AACAGCTATGACCATGCCAAGTCCAGGACGAACCTC
PIEZO1-47-48F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCTGCCCTGTGAAAGCTG
PIEZO1-47-48R：AACAGCTATGACCATGGGTGCTGGCAGGTCAGG
PIEZO1-49-50F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGGGCTGTGCCAGGTTG
PIEZO1-49-50R：AACAGCTATGACCATGGGGGAAGCTGGTGAGTCC
PIEZO1-51F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGCTACGGGTGAGTGAGTG
PIEZO1-51R：AACAGCTATGACCATGCAGAGCTGAGCGTGAGGAC。


2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括检测PIEZO1基因的测序引物，其碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。


3.检测PIEZO1基因突变情况的方法，包括以下步骤：
(1)抽提血液中的组织DNA；
(2)利用PCR扩增引物扩增步骤(1)中提取的DNA，获得扩增产物；所述PCR扩增引物的碱基序列为：
PIEZO1-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTCTCCAGGCCCCAAC
PIEZO1-1R：AACAGCTATGACCATGTCATGCTTCAGGAATGCG
PIEZO1-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCATCCTCTGTTGGCGACCTA
PIEZO1-2R：AACAGCTATGACCATGATTTCGGGACCCCTCATCTT
PIEZO1-3-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTCAGGCCTCTGGGCTC
PIEZO1-3-4R：AACAGCTATGACCATGGGTGGGAGTGTGGATGAGTC
PIEZO1-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGATTTCAGGCCCCAGGAAGT
PIEZO1-5R：AACAGCTATGACCATGCCTCAAAATGGCTGAGACCAC
PIEZO1-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGAGAGGTGGCGTCAGTG
PIEZO1-6R：AACAGCTATGACCATGTGTCTCCACAGTCATCAGGG
PIEZO1-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGATGACTGTGGAGACAGCG
PIEZO1-7R：AACAGCTATGACCATGGGCTAGACGAGCCAGGTG
PIEZO1-8-10F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCCACCTGGCTCGTCTA
PIEZO1-8-10R：AACAGCTATGACCATGCCGCACCCAGCCATACCTT
PIZEO1-11-12F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTTTAGGGCATAGTCAGGGTGGG
PIZEO1-11-12R：AACAGCTATGACCATGCGGGCAAGTGGACATTGAACAG
PIEZO1-13-15F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGCTGACTGTGACACCC
PIEZO1-13-15R：AACAGCTATGACCATGGGGAAGTGCACGGGGTTT
PIEZO1-16F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCGTCTACACCTTCCAGTTC
PIEZO1-16R：AACAGCTATGACCATGTTGGTATGAGCAAATGCCCCTT
PIEZO1-17F：TGTAAAACGACGGCCAGTACAGGGCTTCTTCCAGCC
PIEZO1-17R：AACAGCTATGACCATGAGCTGGGCAGGCCAGAG
PIEZO1-18-19F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGCCTGAAGGTGGGTTGG
PIEZO1-18-19R：AACAGCTATGACCATGTCGGGCTGCGAATACAGAGTT
PIEZO1-20-21F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTCCCTGTTTCTCAAACACCTG
PIEZO1-20-21R：AACAGCTATGACCATGGGCAATGTCCTTGCCTCACC
PIEZO1-23F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGACCGGGTGTCTCAGG
PIEZO1-23R：AACAGCTATGACCATGACTTGTGAGCAGATTTGGGG
PIEZO1-24-25F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTGGGAGGTGGGATTTATG
PIEZO1-24-25R：AACAGCTATGACCATGGCATCTGCTCCACGAAGAC
PIEZO1-26-27F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCACCGTCATCATCTCCAAG
PIEZO1-26-27R：AACAGCTATGACCATGGGCCTGAGACAGTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘赵玲，王淑一，
申请(专利权)人：长沙艾迪康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43