本发明专利技术公开了一种用于孤独症辅助诊断的circRNA检测试剂盒，属于RNA检测技术领域。本发明专利技术提供的用于孤独症辅助诊断的试剂盒，通过提取待测样品总RNA，再进行circRNA逆转录，对所得逆转录产物进行qPCR从而检测目标circRNA的相对表达，成功实现了快速灵敏特异的检测孤独症标志物hsa_circ_0004566。本发明专利技术提供的用于孤独症辅助诊断的试剂盒能够非侵入(大脑组织)性、生物学客观的检测孤独症标志物，可在早期识别孤独症患儿、辅助诊断孤独症患者以及时进行干预和治疗中发挥作用，具有重大的临床价值和社会经济意义。
【技术实现步骤摘要】
一种用于孤独症辅助诊断的circRNA检测试剂盒
本专利技术涉及RNA检测
，特别是涉及一种用于孤独症辅助诊断的circRNA检测试剂盒。
技术介绍
孤独症谱系障碍(Autismspectrumdisorder，ASD)是一组严重影响儿童身心健康的神经发育障碍疾病，患儿主要表现为不同程度的语言障碍、社交障碍、兴趣狭窄以及行为方式刻板等。多起病于婴幼儿期。目前，孤独症已成为我国6岁以下儿童致残的主要原因，严重危害了儿童身心健康并给社会和家庭带来沉重的经济和精神负担。目前，国际上临床诊断ASD的方法主要是依据对患儿的言语、行为等主观观察和评估。使用孤独症行为量表(AutismBehaviorChecklist，ABC)、儿童孤独症评定量表(ChildhoodAutismRatingScale，CARS)、孤独症诊断观察量表(AutismDiagnosticObservationSchedule，2ndedition，ADOS-2)和孤独症诊断访谈量表修订版(AutismDiagnosticInterviewRevised，ADI-R)进行评估。这些诊断所需的信息基本来源于患儿主要照顾者对患病儿童的描述，导致信息偏主观化，产生很多误差，容易造成漏诊和误诊。而且对于不具有典型症状的ASD患者，需要较长的时间才能准确识别、诊断。这一等待时间就推延了儿童诊断和进行早期干预的关键阶段，阻碍了患儿孤独症症状的缓解和改善。ASD病因复杂，发病机制尚不明确。虽然大量研究发现了与ASD相关的遗传因素，但这些遗传因素仅能解释10％～30％的ASD病因，并未发现确切的ASD致病基因。近年来，表观遗传机制被认为是导致神经发育异常的潜在诱因。人类基因组中73％区域的转录产物是非编码RNA。环状RNA(circularRNA，circRNA)是新兴的一类不具有游离的5'端帽子和3'端poly(A)尾巴，以共价键形成环形结构的特殊非编码RNA分子。circRNA不易被RNA核酸外切酶降解，比线性RNA更加稳定，大量存在于真核细胞的细胞质中，具有一定的组织性、时序性和疾病特异性，是一种表达稳定的潜在生物标志物。准确地确定患者的表观遗传数据，是精准医疗的前提，对孤独症患儿进行孤独症相关circRNA的检测，是早期有效诊断孤独症患者的必要前提。但是，目前对于孤独症没有一个早期、客观的诊断的方法。专利技术一种新型、非侵入性、生物学客观的用于孤独症辅助诊断的circRNA检测的试剂盒，具有重大的社会经济意义以及临床价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于孤独症辅助诊断的circRNA检测试剂盒，以解决上述现有技术存在的问题。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供circRNAhsa_circ_0004566作为孤独症生物标志物的应用。本专利技术还提供一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，所述试剂盒中包括检测hsa_circ_0004566的引物组。优选的，所述检测hsa_circ_0004566的引物组序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。优选的，所述试剂盒中还包括RNA提取试剂，EnzymeMix，ReactionBuffer、RandomPrimers，无核酸酶水，PremixExTaqII和ROXdyeII。优选的，所述试剂盒中还包括检测内参基因的引物组。优选的，所述的内参基因为GAPDH，所述的检测内参基因的引物组序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。本专利技术还提供一种利用所述的用于孤独症辅助诊断的试剂盒检测circRNAhsa_circ_0004566的方法，所述试剂盒的使用方法为：先提取待测样品总RNA，再进行circRNA逆转录，所得产物进行qPCR从而检测hsa_circ_0004566的相对表达。优选的，所述circRNA逆转录体系为：EnzymeMix2μL，ReactionBuffer、RandomPrimers4μL，总RNA500ng，无核酸酶水补足20μL。优选的，所述qPCR反应体系为PremixExTaqII10.0μL和ROXdyeII0.5μL，正向引物和反向引物各0.5μL，cDNA2.0μL，无核酸酶水6.5μL。优选的，所述qPCR反应程序为95℃预变性120s；95℃变性15s，63℃退火20s，共50个循环。本专利技术公开了以下技术效果：本专利技术提供两种circRNA作为孤独症标志物的应用以及用于孤独症辅助诊断的试剂盒。本专利技术所述的用于孤独症辅助诊断的试剂盒能够非侵入(大脑组织)性、生物学客观的检测孤独症标志物，具有快速、灵敏、特异的特点，可在早期识别孤独症患儿、辅助诊断孤独症患者以及时进行干预和治疗中发挥作用，具有重大的临床价值和社会经济意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为hsa_circ_0004566的熔解曲线图；图2为GAPDH的熔解曲线图；图3为病例组和对照组hsa_circ_0004566表达水平比较图；图4为hsa_circ_0004566诊断孤独症的ROC曲线图。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。实施例1(1)Trizol法提取孤独症病人血浆或血清中总RNA1)吸取300μL血浆或血清于新的EP管中,加入900μLTrizol,室温下静置本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.circRNA hsa_circ_0004566作为孤独症生物标志物的应用。/n
【技术特征摘要】
1.circRNAhsa_circ_0004566作为孤独症生物标志物的应用。
2.一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括检测hsa_circ_0004566的引物组。
3.根据权利要求2所述的一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa_circ_0004566的引物组序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。
4.根据权利要求2所述的一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括RNA提取试剂，EnzymeMix，ReactionBuffer、RandomPrimers，无核酸酶水，PremixExTaqII和ROXdyeII。
5.根据权利要求2所述的一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括检测内参基因的引物组。
6.根据权利要求5所述的一种用于孤独症辅助诊断的试剂盒，其特征在于，所述的内参基因为GAPDH，所述的检测内参基因的引物组序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。
7.一种利用权利要求2-6任一项所述的用于孤独症辅助诊断的试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔立华，杜文冉，冯福民，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：河北;13
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