用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的引物及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，包括引物组1和引物组2，其中引物组1为19对引物组成的特异性PCR引物，引物组2为19条引物组成的单碱基延伸引物。本发明专利技术还提供了用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的制剂，以及用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的方法。采用本发明专利技术提供的专用引物，通过一次检测即可高效的同时完成11种临床常用慢性心力衰竭用药的精准用药预测，大大减少了检测时间，节约了成本，对于指导11种临床常用慢性心力衰竭的药物的精准用药具有非常高的应用价值，适于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的引物及应用
本专利技术属于生物
，特别涉及一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的引物及应用。
技术介绍
心力衰竭是由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引物心脏循环障碍症候群。心力衰竭不是一个独立的疾病，是心脏疾病发展的终末阶段。心力衰竭可分为左心衰竭和右心衰竭，左心衰竭的临床表现主要为肺循环淤血(劳力性呼吸困难、端坐呼吸、阵发性夜间呼吸困难等)和周围灌注不足(乏力、少尿和低血压等)；右心衰竭的临床表现主要为体循环淤血(水肿、胃肠道淤血、肝大以及胸腹水等)。药物治疗是心力衰竭的基石，对改善患者的症状和预后具有十分重要的意义。心力衰竭的药物治疗可以分为改善症状和改善预后两大类：1、改善预后：(1)β受体阻滞剂：代表药物包括美托洛尔和卡维地洛，对于病情稳定的心力衰竭患者，应尽早使用β受体阻滞剂，长期应用可以降低死亡、住院和猝死风险，同时也可以一定程度上减轻症状和改善生活质量。但是应用β受体阻滞剂具有心动过缓、房室传导阻滞、诱发心力衰竭和心功能恶化、引起血管收缩如肢体发冷和间歇性跛行、导致支气管哮喘发作等副作用。(2)肾素-血管紧张素系统抑制剂：包括血管紧张素转化酶抑制剂如培哚普利、依那普利，该类药物可以抑制血管紧张素转化酶活性，从而抑制肾素-血管紧张素系统活化，对心力衰竭患者具有明显的改善预后的益处；血管紧张素II受体拮抗剂包括氯沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦，该类药物通过阻断血管紧张素II与其受体的结合而抑制肾素-血管紧张素系统活性，发挥同血管紧张素转化酶抑制剂类似的作用，主要推荐用于不能耐受血管紧张素转化酶抑制剂的患者；血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂包括沙库巴曲/缬沙坦，该类药物具有血管紧张素II受体拮抗剂和脑啡肽酶抑制剂的双重作用，既可以阻断肾素-血管紧张素系统激活的不利作用，又可以通过调节利钠肽系统发挥保护作用，具有显著的改善预后、减轻心脏重构、改善症状和生活质量等益处。但是上述所有肾素-血管紧张素系统抑制剂均具有低血压、血肌酐升高、高钾血症、血管性水肿等副作用。(3)醛固酮受体拮抗剂：代表药物为螺内酯，在血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素II受体拮抗剂治疗的基础上，加用螺内酯进一步抑制醛固酮在心脏重构中的有害作用，从而降低心力衰竭患者的病死率和再住院率。但是应用螺内酯有电解质异常(包括高钾血症和低钠血症)、抗雄激素样作用或对其他内分泌系统的影响(长期服用本药在男性可致男性乳房发育、阳萎、性功能低)和中枢神经系统表现(长期或大剂量服用本药可发生行走不协调、头痛等)等副作用。2、改善症状：(1)洋地黄类药物：代表药物有地高辛，通过产生正性肌力作用，提高心肌收缩力，增强迷走神经活性以减慢心率，在应用了其他药物仍有症状的患者，加用该类药物可以改善症状和提高运动耐量。但是应用洋地黄类药物具有减慢心率和洋地黄中毒(各种心律失常、腹胀、恶心、呕吐和黄视等)风险。(2)利尿剂：代表药物有呋塞米、托拉塞米，对有液体潴留的患者，均应使用利尿剂，恰当应用利尿剂可以有效缓解心力衰竭引起的呼吸困难和水肿，改善运动耐量，是控制心力衰竭症状最有效的药物之一。但是应用利尿剂有导致低血容量、电解质紊乱、肾功能恶化以及糖脂和尿酸代谢异常的副作用。精准用药是精准医疗的重要组成部分。遗传药理学和药物基因组学研究已经证实，不同患者携带的基因(如药物转运蛋白基因、药物代谢酶基因、DNA修复基因)单核苷酸多态性不同，对药物的反应不同，同一药物对不同患者的疗效、副作用也有很大的差异，因此，从药物疗效及药物副作用的角度出发，进行基因检测指导精准用药，帮助医生筛选出有效的治疗方案，对病人做出最正确的治疗决策，既节省了患者无效的医疗费用，而且提高了治疗效果，减少药物对患者的副作用。以上几种药物的个体差异与基因多态性密切相关。传统的基因多态性检测方法如sanger测序，荧光定量PCR等方法，虽然也可能在临床上提供较好的价值，但是如果同时检测多个SNP位点，则存在费时、经济成本高、时间成本高等原因，不利在临床上大规模推广使用。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术可同时检测多个基因多态性位点，具有兼容性强、通量高、精准度高、性价比高的优点，可用于同时检测美托洛尔、卡维地洛、替米沙坦、培哚普利、氯沙坦、依那普利、呋塞米、托拉塞米、厄贝沙坦、螺内酯、地高辛的精准用药相关基因信息。目前尚未有将基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术应用于心力衰竭药物抵抗或副作用的精准用药基因检测。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供了一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的引物及应用。本专利技术第一个方面提供了一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，包括引物组1和引物组2，其中：所述引物组1为特异性PCR引物，包括引物对1-19；所述引物组2为单碱基延伸引物，包括单碱基延伸引物1-19。本专利技术第二个方面提供了一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的制剂，所述制剂包括试剂一和试剂二；其中：所述试剂一包括根据本专利技术第一个方面所述的引物组1中的引物对1-引物对19，以及PCR缓冲液、MgCl2、dNTP和DNA聚合酶；所述试剂二包括根据本专利技术第一个方面所述的引物组2中的单碱基延伸引物1-单碱基延伸引物19，以及单碱基延伸缓冲液、单碱基延伸酶、单碱基延伸终止Mix。本专利技术第三个方面提供了本专利技术第一个方面的用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，或本专利技术第二个方面的用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的制剂在制备用于检测慢性心力衰竭精准用药的产品中的应用。本专利技术第四个方面提供了一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的方法，包括如下步骤：1)用根据本专利技术第一个方面所述的用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物组1中的引物对1-引物对21，以待测样本的基因组DNA为模板进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2)将所述PCR扩增产物进行碱性磷酸酶消化，得到消化产物；3)将所述消化产物用根据本专利技术第一个方面所述的用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物的引物组2中的单碱基延伸引物1-单碱基延伸引物19进行单碱基延伸反应，得到单碱基延伸反应产物；4)将所述单碱基延伸反应产物经过纯化后，进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测，得到待测样本中慢性心力衰竭精准用药相关基因的SNP位点信息。使用本专利技术提供的用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，通过一次检测即可高效的同时完成11种临床常用慢性心力衰竭精准用药的预测，本专利技术根据采用的SNP位点设计的引物特异性高，准确度好；采用本专利技术提供的用于检测慢性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，其特征在于：/n包括引物组1和引物组2，其中：/n所述引物组1为特异性PCR引物，包括引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19；/n所述引物对1由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对2由序列3所示的单链DNA分子和序列4所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对3由序列5所示的单链DNA分子和序列6所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对4由序列7所示的单链DNA分子和序列8所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对5由序列9所示的单链DNA分子和序列10所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对6由序列11所示的单链DNA分子和序列12所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对7由序列13所示的单链DNA分子和序列14所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对8由序列15所示的单链DNA分子和序列16所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对9由序列17所示的单链DNA分子和序列18所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对10由序列19所示的单链DNA分子和序列20所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对11由序列21所示的单链DNA分子和序列22所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对12由序列23所示的单链DNA分子和序列24所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对13由序列25所示的单链DNA分子和序列26所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对14由序列27所示的单链DNA分子和序列28所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对15由序列29所示的单链DNA分子和序列30所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对16由序列31所示的单链DNA分子和序列32所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对17由序列33所示的单链DNA分子和序列34所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对18由序列35所示的单链DNA分子和序列36所示的单链DNA分子组成；/n所述引物对19由序列37所示的单链DNA分子和序列38所示的单链DNA分子组成；/n所述引物组2为单碱基延伸引物，包括单碱基延伸引物1、单碱基延伸引物2、单碱基延伸引物3、单碱基延伸引物4、单碱基延伸引物5、单碱基延伸引物6、单碱基延伸引物7、单碱基延伸引物8、单碱基延伸引物9、单碱基延伸引物10、单碱基延伸引物11、单碱基延伸引物12、单碱基延伸引物13、单碱基延伸引物14、单碱基延伸引物15、单碱基延伸引物16、单碱基延伸引物17、单碱基延伸引物18、单碱基延伸引物19；/n所述单碱基延伸引物1为序列39所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物2为序列40所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物3为序列41所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物4为序列42所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物5为序列43所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物6为序列44所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物7为序列45所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物8为序列46所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物9为序列47所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物10为序列48所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物11为序列49所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物12为序列50所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物13为序列51所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物14为序列52所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物15为序列53所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物16为序列54所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物17为序列55所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物18为序列56所示的单链DNA分子；/n所述单碱基延伸引物19为序列57所示的单链DNA分子。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测慢性心力衰竭精准用药相关基因SNP位点的专用引物，其特征在于：
包括引物组1和引物组2，其中：
所述引物组1为特异性PCR引物，包括引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19；
所述引物对1由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成；
所述引物对2由序列3所示的单链DNA分子和序列4所示的单链DNA分子组成；
所述引物对3由序列5所示的单链DNA分子和序列6所示的单链DNA分子组成；
所述引物对4由序列7所示的单链DNA分子和序列8所示的单链DNA分子组成；
所述引物对5由序列9所示的单链DNA分子和序列10所示的单链DNA分子组成；
所述引物对6由序列11所示的单链DNA分子和序列12所示的单链DNA分子组成；
所述引物对7由序列13所示的单链DNA分子和序列14所示的单链DNA分子组成；
所述引物对8由序列15所示的单链DNA分子和序列16所示的单链DNA分子组成；
所述引物对9由序列17所示的单链DNA分子和序列18所示的单链DNA分子组成；
所述引物对10由序列19所示的单链DNA分子和序列20所示的单链DNA分子组成；
所述引物对11由序列21所示的单链DNA分子和序列22所示的单链DNA分子组成；
所述引物对12由序列23所示的单链DNA分子和序列24所示的单链DNA分子组成；
所述引物对13由序列25所示的单链DNA分子和序列26所示的单链DNA分子组成；
所述引物对14由序列27所示的单链DNA分子和序列28所示的单链DNA分子组成；
所述引物对15由序列29所示的单链DNA分子和序列30所示的单链DNA分子组成；
所述引物对16由序列31所示的单链DNA分子和序列32所示的单链DNA分子组成；
所述引物对17由序列33所示的单链DNA分子和序列34所示的单链DNA分子组成；
所述引物对18由序列35所示的单链DNA分子和序列36所示的单链DNA分子组成；
所述引物对19由序列37所示的单链DNA分子和序列38所示的单链DNA分子组成；
所述引物组2为单碱基延伸引物，包括单碱基延伸引物1、单碱基延伸引物2、单碱基延伸引物3、单碱基延伸引物4、单碱基延伸引物5、单碱基延伸引物6、单碱基延伸引物7、单碱基延伸引物8、单碱基延伸引物9、单碱基延伸引物10、单碱基延伸引物11、单碱基延伸引物12、单碱基延伸引物13、单碱基延伸引物14、单碱基延伸引物15、单碱基延伸引物16、单碱基延伸引物17、单碱基延伸引物18、单碱基延伸引物19；
所述单碱基延伸引物1为序列39所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物2为序列40所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物3为序列41所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物4为序列42所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物5为序列43所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物6为序列44所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物7为序列45所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物8为序列46所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物9为序列47所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物10为序列48所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物11为序列49所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物12为序列50所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物13为序列51所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物14为序列52所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物15为序列53所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物16为序列54所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物17为序列55所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物18为序列56所示的单链DNA分子；
所述单碱基延伸引物19为序列57所示的单链DNA分子。


2.根据权利要求1所述的专用引物，其特征在于：
所述引物组1中的引物对1-引物对19中的各条引物为等摩尔比混合，构成扩增引物Mix；
所述引物组2中的单...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋俊贤，陈红，郑方芳，赵美，陈江天，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京;11