本发明专利技术公开了一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，其包括：荧光免疫层析试纸条以及样品稀释液，所述荧光免疫层析试纸条包括：底衬、样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，所述硝酸纤维素膜上靠近吸水垫端设置有互相平行的质控线和检测线，所述硝酸纤维素膜靠近样本垫端设置有示踪粒子标记抗体线。本发明专利技术通过配置特殊复溶液的方式，将示踪粒子标记抗体直接划在硝酸纤维素膜上，取代了现有技术中的划线方式以及常规的结合垫结构，不仅提升了检测灵敏度和准确率还简化了试纸条的制备工艺。同时，本发明专利技术通过配备样本稀释液，在加样前对样本进行前处理，可以溶血现象的产生，避免背景噪音干扰，进一步提升检测的稳定性。
【技术实现步骤摘要】
一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒及其制备方法
本专利技术属于医学检验领域，具体涉及一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
CRP作为医院的常规检测项目，通常作为细菌感染和病毒感染的炎症反应指标，指导抗生素的使用。而且对评价冠心病的严重程度及冠心病危险分层也有着重要的指导意义：有研究显示血液CRP水平有助于评估冠脉狭窄程度和临床稳定性，血液CRP浓度的升高会显著增加冠心病患者急性冠脉综合症的发生率，对冠心病支架术后的检测也可有效评价；CRP的检测对脑卒中患者也有着重要的临床意义：CRP水平既可反映脑卒中患者体内的严重程度，还可反映患者脑梗死的程度，可作为判别脑血管疾病风险和预后的非特异性指标；对糖尿病人群CRP水平分布及其影响因素的监测，可以对糖尿病人群未来发生心血管事件进行预测和探讨，对降低CRP水平可否改善糖尿病人群的预后具有一定的参考意义。综上所述，临床工作中，CRP的监测不只适用于炎症患者，还对糖尿病患者，冠心病患者，脑卒中患者等都有重要临床意义。较为早期的CRP检测方法包括胶乳凝集实验法、免疫比浊法、放射免疫测定法等等，但是分别存在灵敏度低、检测范围小、同位素污染等各种缺陷，目前已经逐渐被淘汰。近年来，由于免疫层析法的快速发展。免疫层析法快速检测CRP已成为趋势，专利CN103226143A公开了一种划球工艺，通过将标记物划在硝酸纤维素膜上，使试纸条结构简单，反应时间稳定，同时提高了检测的精密度，但是该试纸条在示踪粒子标记抗体线的制备上需要多道工序，需先将封闭蛋白液划于硝酸纤维素膜上，干燥后于同一位置划标记物并进行二次干燥，即进行了两步划线和干燥的程序，制备工艺相对复杂，耗费时间长，不易操作，对技术人员的专业性要求较高。同时，在现有工艺中，当CRP的检测样本为全血时，极易出现溶血现象，进而导致测试背景差等问题。
技术实现思路
本专利技术提供了一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，通过将抗体标记物直接划在硝酸纤维素膜上，简化了试纸条的制备工艺，同时提供了一种CRP检测用稀释液，解决了检测全血时出现的溶血问题。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术手段：一种全量程C反应蛋白检测用样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液包括2-6mmol/LK+、80-180mmol/Lcl-、90-190mmol/LNa+、2-9mmol/LHPO42-、0.7-2.5mmol/LH2PO4-、0.5-2g/L的防腐剂以及5-20g/L的表面活性剂。优选地，所述样品稀释液包括1-3g/L十二水磷酸氢二钠、0.1-0.3g/L磷酸二氢钾、5-10g/L氯化钠、5-20g/L表面活性剂、0.5-2g/L防腐剂以及0.1-0.3g/L氯化钾。优选地，所述表面活性剂选自Tween、Triton、Tetronic1307或Brij58中的至少一种，所述Tween优选为Tween-20或Tween-80，所述Triton优选为TritonX-305或Triton100，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种。一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，包括荧光免疫层析试纸条，其特征在于，还包括权利要求1所述的样品稀释液。优选地，所述荧光免疫层析试纸条包括：底衬、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜搭接在底衬上，所述样品垫搭接在硝酸纤维素膜的一端，所述吸水垫搭接在硝酸纤维素膜的另一端，所述硝酸纤维素膜上靠近吸水垫端设置有互相平行的质控线和检测线，所述硝酸纤维素膜靠近样品垫端设置有示踪粒子标记抗体线。优选地，所述示踪粒子为荧光素、羧基荧光素、2-甲氧基荧光素、罗丹明、藻红蛋白或量子点中的一种。一种测定全量程C反应蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)荧光抗体复合物的制备：将CRP单抗加入荧光微球中，室温搅拌反应，加入BSA，封闭搅拌，随后离心弃上清，沉淀以荧光抗体复溶液恢复体积；(2)硝酸纤维素膜的制备a.检测线的制备：将鼠抗人C反应蛋白单克隆抗体用PBS缓冲液稀释，在离硝酸纤维素膜左端划检测线；b.质控线的制备：将羊抗鸡IgG抗体在硝酸纤维素膜右端划质控线，该线与检测线平行，然后在干燥箱内干燥；c.示踪粒子标记抗体线的制备：将步骤(1)制备得到的荧光-抗体复合物以包被于硝酸纤维素膜左端，然后在干燥箱内干燥，密封干燥保存；(3)组装：在底衬上依次紧密搭接样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切条。优选地，所述荧光抗体复溶液包括：5-15mmol/L缓冲液、20-40g/L蛋白、5-40g/L表面活性剂、20-50g/L糖类、1-5g/L大分子物质以及0.5～1g/L的防腐剂，所述缓冲液选自MOPSO缓冲液、HEPES缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液中的至少一种，所述蛋白选自牛血清白蛋白或酪蛋白中的至少一种，所述表面活性剂选自Tween、曲拉通或Brij58中的至少一种，所述Tween优选为Tween-80，，所述糖类选自蔗糖或海藻糖中的一种，所述大分子物质选自PEG或PVP中的至少一种，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种。优选地，还包括样本稀释液的制备，所述样本稀释液包括：1-3g/L十二水磷酸氢二钠、0.1-0.3g/L磷酸二氢钾、5-10g/L氯化钠、5-20g/L表面活性剂、0.5-2g/L防腐剂以及0.1-0.3g/L氯化钾，所述表面活性剂选自Tween、Triton、Tetronic1307或Brij58中的至少一种，所述Tween优选为Tween-20或Tween-80，所述Triton优选为TritonX-305或Triton100，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种。上述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)用所述样品稀释液对样品进行前处理，得到待测样品；(2)用所述试纸条对所述待测样品进行检测，得到检测后的试纸条；(3)用荧光免疫分析仪分析检测后的试纸条，得到检测结果。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术通过配置特殊复溶液的方式，将示踪粒子标记抗体直接划在硝酸纤维素膜上，取代了封闭蛋白线辅助划线的方式以及常规的包被示踪粒子标记抗体的结合垫，一方面简化了试纸条的制备工艺，将制备时间大大缩短，同时提高了试纸条制备的成品率，降低了物料成本；另一方面提升了试纸条的特异性和稳定性，进一步提升了检测结果的准确性。(2)本专利技术通过采用特殊样本稀释液，在样品检测前针对样本进行前处理，使全血测试不会出现漏血，背景检测均匀干净，降低了背景干扰，提升了检测的精密度和准确性。附图说明图1为实施例1中的C反应蛋白荧光检测试纸条的结构示意图；图2为实施例2中用于计算CRP标准品浓度-CRP浓度的信号值标准曲线；图3为实施例2提供的CRP测定值与样本值的相关性图；图4为实施例3提供的CRP测定值与样本值的相关性图。附图标记为：检测线1；质本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种全量程C反应蛋白检测用样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液包括2-6mmol/L K
【技术特征摘要】
1.一种全量程C反应蛋白检测用样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液包括2-6mmol/LK+、80-180mmol/Lcl-、90-190mmol/LNa+、2-9mmol/LHPO42-、0.7-2.5mmol/LH2PO4-、0.5-2g/L的防腐剂以及5-20g/L的表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的一种全量程C反应蛋白检测用样品稀释液，其特征在于，所述样品稀释液包括1-3g/L十二水磷酸氢二钠、0.1-0.3g/L磷酸二氢钾、5-10g/L氯化钠、5-20g/L表面活性剂、0.5-2g/L防腐剂以及0.1-0.3g/L氯化钾。
3.根据权利要求1或2所述的一种全量程C反应蛋白检测用样品稀释液，其特征在于，所述表面活性剂选自Tween、Triton、Tetronic1307或Brij58中的至少一种，所述Tween优选为Tween-20或Tween-80，所述Triton优选为TritonX-305或Triton100，所述防腐剂选自proclin-300或叠氮钠中的至少一种。
4.一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，包括荧光免疫层析试纸条，其特征在于，还包括权利要求1所述的样品稀释液。
5.根据权利要求4所述的一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，其特征在于，所述荧光免疫层析试纸条包括：底衬、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜搭接在底衬上，所述样品垫搭接在硝酸纤维素膜的一端，所述吸水垫搭接在硝酸纤维素膜的另一端，所述硝酸纤维素膜上靠近吸水垫端设置有互相平行的质控线和检测线，所述硝酸纤维素膜靠近样品垫端设置有示踪粒子标记抗体线。
6.根据权利要求5所述的一种测定全量程C反应蛋白的试剂盒，其特征在于，所述示踪粒子为荧光素、羧基荧光素、2-甲氧基荧光素、罗丹明、藻红蛋白或量子点中的一种。
7.一种测定全量程C反应蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)荧光抗体复合物的制备：将CRP单抗加入荧光微球中，室温搅拌反应，加入BSA，封闭搅拌，随后离心弃上清，沉淀以荧光抗体复溶液恢复体积；
(2)硝酸纤维素膜的制备
a.检测线的制备：将鼠...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈娟，刘巧娜，卢飞，
申请(专利权)人：重庆中元汇吉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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