检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条。本发明专利技术的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以猫胰脂肪酶单克隆抗体定量检测猫胰腺炎，不仅填补了目前市场上没有荧光免疫层析定量检测猫胰腺炎的空白，同时也提高了检测灵敏度和准确度，并且将定量检测时间大大缩短，具有快速、简单、干扰小等优点。而且本发明专利技术针对猫胰腺炎的检测将试剂盒进行了改进，取消了试纸条上的结合垫，增加荧光标记组分的提供，可以将待测样本与荧光标记组分混合后加至样品垫进行测试，可以提高反应的均一性，从而达到更高的精密度和准确度。

【技术实现步骤摘要】
检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及免疫层析
，特别是涉及一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
胰腺炎分为急性胰腺炎和慢性胰腺炎。急性胰腺炎是指腺体细胞被激活的胰腺急性疾病。目前，国内外的兽医临床上对急性胰腺炎的诊断主要是依靠体检和实验室诊断相结合。但是大量临床数据显示对于猫胰腺炎的诊断特异性和敏感性都不强，无法单纯通过这些方法对急性胰腺炎进行确诊。目前在中国兽医临床上用于诊断猫胰腺炎的实验方法主要是测量血浆淀粉酶，但是淀粉酶波动范围较大，猫的品种之间也具有较大的差异性。目前检测猫胰腺炎的免疫学方法主要有金标免疫渗滤法(金标法)、化学发光法、分子诊断法(PCR)等。但是金标免疫渗滤法(金标法)灵敏度不高，重复性和准确性均有欠缺，抗干扰能力不足，检测时间长，致使临床价值受到很大的限制。化学发光法、分子诊断法需要大型仪器，而且对实验人员的要求较高，在宠物医院难以普及。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种准确度较高的检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒。一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；所述荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、反应膜和吸水垫，所述样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫，所述检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。在其中一个实施例中，所述荧光标记组分中各物质的浓度为：海藻糖0.5wt％～3wt％、BSA2wt％～7wt％，蔗糖5wt％～20wt％、月桂醇醚磷酸酯钾0.1wt％～2wt％、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体5wt％～15wt％、荧光微球标记的第一质控抗体5wt％～15wt％。在其中一个实施例中，所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体，所述第二质控抗体为兔IgG抗体。在其中一个实施例中，所述荧光微球为荧光胶乳微球。在其中一个实施例中，所述荧光微球的直径为300mm～500nm，所述荧光微球在300nm～500nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。本专利技术还提供了一种所述荧光免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：将所述海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体、荧光微球标记的第一质控抗体与缓冲液混合得到所述荧光标记组分；将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成所述检测线；将第二质控抗体包被在所述反应膜上形成与所述检测线相间隔的所述质控线；将所述样品垫、所述反应膜和所述吸水垫设于所述底板上，得到所述免疫层析试纸条。在其中一个实施例中，在反应膜上形成所述检测线的方法包括以下步骤：用含2wt％～10wt％海藻糖的缓冲液将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体稀释到0.3mg/mL～1mg/mL，作为检测线工作液；用所述检测线工作液在反应膜上划线后烘干，形成所述检测线。在其中一个实施例中，在反应膜上形成所述质控线的方法包括以下步骤：用含2wt％～10wt％蔗糖的缓冲液将第二质控抗体稀释到0.3mg/mL～1mg/mL，作为质控线工作液；用所述质控线工作液在反应膜上划线后烘干，形成所述质控线。在其中一个实施例中，所述划线的出液量为0.5μL/cm～2μL/cm，所述烘干的条件为40℃～60℃烘48～72小时。在其中一个实施例中，所述荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体的制备方法包括以下步骤：将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液，然后加入猫胰脂肪酶单克隆检测抗体室温孵育1.5～3小时。本专利技术的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以猫胰脂肪酶单克隆抗体定量检测猫胰腺炎，不仅填补了目前市场上没有荧光免疫层析定量检测猫胰腺炎的空白，同时也提高了检测灵敏度和准确度，并且将定量检测时间大大缩短，具有快速、简单、干扰小等优点。脂肪酶主要来源于胰腺，是胰腺分泌的消化酶之一。在急性胰腺炎时，脂肪酶与淀粉酶呈平行性改变，但脂肪酶的升高在血清中出现较晚，持续时间长，所以采用猫胰脂肪酶单克隆抗体诊断胰腺炎的特异性更高。而且本专利技术针对猫胰腺炎的检测将试剂盒进行了改进，取消了试纸条上的结合垫，增加荧光标记组分的提供，可以将待测样本与荧光标记组分混合后加至样品垫进行测试，可以提高反应的均一性，从而达到更高的精密度和准确度。而且，在荧光标记组分中加入月桂醇醚磷酸酯钾与其他组分配合，能够进一步提高检测的准确度。本专利技术的荧光免疫层析试剂盒的基本原理为双抗体夹心法，即样本中的待测物与荧光标记组分中的荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体结合形成复合物。加至样品垫后在层析作用下，复合物沿着反应膜向前扩散，复合物被固定在反应膜检测线上对应的猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体所捕获。样本中待测物越多，反应形成的复合物也越多，检测线上积聚的复合物则越多，显色就更加明显，荧光信号的强度反应了被捕获的待测物的数量。荧光微球标记的第一质控抗体则层析至质控线，与第二质控抗体结合显色。附图说明图1为本专利技术试剂盒的线性拟合方程图；图2为本专利技术试剂盒在常温保存6个月、12个月、18个月、24个月后的检测数据图；图3为本专利技术试剂盒与荧光标记组分喷于结合垫的试剂盒的检测对比图；图4为不同荧光标记组分的检测结果差异图；图5为本专利技术试剂盒与韩国安捷Vcheck试剂的相关性图；图6为荧光标记组分中加入MAEPK与不加MAEPK的检测时间差异。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术一实施例的检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条。荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体。免疫层析试纸条包括底板和设于底板上的样品垫、反应膜和吸水垫，样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接，反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，检测线较质控线更靠近样品垫，检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体，质控线包被有能够与第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。本专利技术的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；/n所述荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；/n所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、反应膜和吸水垫，所述样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫，所述检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；
所述荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；
所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、反应膜和吸水垫，所述样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫，所述检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。


2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光标记组分中各物质的浓度为：海藻糖0.5wt％～3wt％、BSA2wt％～7wt％，蔗糖5wt％～20wt％、月桂醇醚磷酸酯钾0.1wt％～2wt％、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体5wt％～15wt％、荧光微球标记的第一质控抗体5wt％～15wt％。


3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体，所述第二质控抗体为兔IgG抗体。


4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为荧光胶乳微球。


5.根据权利要求4所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球的直径为300mm～500nm，所述荧光微球在300nm～500nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。


6.一种权利要求1～5任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁才弗，王伟，邓艳珍，
申请(专利权)人：海卫特广州医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44