检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法，包括免疫层析试纸条和样本稀释液。本发明专利技术的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以犬胰脂肪酶单克隆抗体定量检测犬胰腺炎，借助免疫分析仪检测荧光信号，通过光电磁信号放大系统使检测灵敏度得到大大的提高，有效排除背景色的干扰，减少了人为因素对结果的误判，操作安全、简单、快速(15min)、灵敏度高。而且本发明专利技术针对犬胰腺炎的检测将样本稀释液进行了改进，加入0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐(MAPK)和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵(AESA)，能够提高检测的准确度。够提高检测的准确度。够提高检测的准确度。

【技术实现步骤摘要】
检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫层析
，特别是涉及一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]胰腺炎是一种胰腺的炎症疾病，它与不同种类的炎症细胞相关，也可以被定义为胰腺的自消化性炎症。胰腺炎通常开始于消化酶的提前激活。而消化酶的提前激活可以由创伤、药物感染甚至饮食引起。胰腺炎可分为急性胰腺炎和慢性胰腺炎。犬急性胰腺炎在临床上更为常见，程度从轻微到致命都有可能，这令其很难与其他胃肠道疾病区分开来。急性胰腺炎发病急，病程短，所以及时诊治对其格外重要。
[0003]目前检测犬胰腺炎的免疫学方法主要有酶联免疫法、金标免疫渗滤法(金标法)、化学发光法、分子诊断法(PCR)等。但是金标免疫渗滤法(金标法)灵敏度不高，重复性和准确性均有欠缺，抗干扰能力不足，检测时间长，致使临床价值受到很大的限制。化学发光法需要大型仪器，而且对实验人员的要求较高，在宠物医院难以普及。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供一种准确度较高的检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒。
[0005]一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，包括免疫层析试纸条和样本稀释液；
[0006]所述样本稀释液为含有0.5wt％～2wt％吐温20、0.5wt％～2wt％聚乙烯吡咯烷酮40、0.001M～0.005M乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钾、0.001wt％～0.005wt％防腐剂P300、0.2M～0.5M氯化钠、0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵的缓冲液；
[0007]所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫的两端分别与所述样品垫及所述反应膜搭接，所述反应膜远离所述结合垫的一端与所述吸水垫搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述结合垫，所述结合垫上含有分别用荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体和第一质控抗体，所述检测线上包被有犬胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。
[0008]在其中一个实施例中，所述样品垫上含有鼠IgG、伊文斯兰、阻断剂R-001、吐温20和BSA。
[0009]在其中一个实施例中，所述结合垫上还含有吐温20、BSA和蔗糖。
[0010]在其中一个实施例中，所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体，所述第二质控抗体为兔IgG抗体。
[0011]在其中一个实施例中，所述荧光微球为荧光胶乳微球。
[0012]在其中一个实施例中，所述荧光微球的直径为200mm～500nm，所述荧光微球在300nm～400nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。
[0013]本专利技术还提供了一种上述荧光免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0014]将所述吐温20、聚乙烯吡咯烷酮40、乙二胺四乙酸二钠、防腐剂P300、氯化钠、月桂基磷酸单酯钾盐、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵和Tris盐酸缓冲液混合得到所述样本稀释液；
[0015]将分别用荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体和第一质控抗体包被在结合垫上；
[0016]将犬胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成所述检测线；
[0017]将第二质控抗体包被在所述反应膜上形成与所述检测线相间隔的所述质控线；
[0018]将所述样品垫、所述吸水垫、所述结合垫及所述反应膜设于所述底板上，得到所述免疫层析试纸条。
[0019]在其中一个实施例中，所述样品垫的制备方法包括以下步骤：制备含有0.5mg/mL～2mg/mL鼠IgG、0.5wt％～1wt％伊文斯兰、0.1mg/mL～2mg/mL阻断剂R-001、0.5wt％～3wt％吐温20和2wt％～5wt％BSA的样品垫稀释液，并以2μL/cm～8μL/cm的喷涂量喷在玻璃纤维垫上。
[0020]在其中一个实施例中，所述荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体的制备方法包括以下步骤：将荧光微球与活化缓冲液混合进行活化，然后离心弃上清并加入终止液终止活化，收集活化后的荧光微球与犬胰脂肪酶单克隆检测抗体混合孵育60min～120min，然后加入封闭液孵育30min～60min，离心弃上清后加入微球稀释液。
[0021]在其中一个实施例中，所述活化缓冲液为含有5mg/mL～10mg/mL N-羟基琥珀酰亚胺和5mg/mL～10mg/mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的Tris缓冲液；所述终止液为含有0.1wt％～0.5wt％甲醇的MES缓冲液；所述封闭液为含有0.5wt％～2wt％BSA的Tris缓冲液；所述微球稀释液为含有0.5wt％～3wt％吐温20、2wt％～5wt％BSA和3wt％～10wt％蔗糖的PBS缓冲液。
[0022]本专利技术的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以犬胰脂肪酶单克隆抗体定量检测犬胰腺炎，借助免疫分析仪检测荧光信号，通过光电磁信号放大系统使检测灵敏度得到大大的提高，有效排除背景色的干扰，减少了人为因素对结果的误判，操作安全、简单、快速(15min)、灵敏度高。脂肪酶主要来源于胰腺，是胰腺分泌的消化酶之一。在急性胰腺炎时，脂肪酶与淀粉酶呈平行性改变，但脂肪酶的升高在血清中出现较晚，持续时间长，所以采用犬胰脂肪酶单克隆抗体诊断胰腺炎的特异性更高。而且本专利技术针对犬胰腺炎的检测将样本稀释液进行了改进，加入0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐(MAPK)和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵(AESA)，能够提高检测的准确度。本专利技术的荧光免疫层析试剂盒的基本原理为双抗体夹心法，即样本中的待测物与分散在结合垫的荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体结合形成复合物。在层析作用下，复合物沿着反应膜向前扩散，复合物被固定在反应膜检测线上对应的犬胰脂肪酶单克隆捕获抗体所捕获。样本中待测物越多，反应形成的复合物也越多，检测线上积聚的复合物则越多，显色就更加明显，荧光信号的强度反应了被捕获的待测物的数量。荧光微球标记的第一质控抗体则层析至质控线，与第二质控抗体结合显色。
附图说明
[0023]图1为本专利技术试剂盒的线性拟合方程图；
[0024]图2为本专利技术试剂盒在常温保存6个月、12个月、18个月、24个月后的检测数据图；
[0025]图3为本专利技术试剂盒与韩国安捷Vcheck试剂的相关性图；
[0026]图4为不同样本稀释液的检测结果差异图。
具体实施方式
[0027]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0028]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测犬胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括免疫层析试纸条和样本稀释液；所述样本稀释液为含有0.5wt％～2wt％吐温20、0.5wt％～2wt％聚乙烯吡咯烷酮40、0.001M～0.005M乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钾、0.001wt％～0.005wt％防腐剂P300、0.2M～0.5M氯化钠、0.1wt％～1.0wt％月桂基磷酸单酯钾盐和0.01wt％～1.0wt％脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵的缓冲液；所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫的两端分别与所述样品垫及所述反应膜搭接，所述反应膜远离所述结合垫的一端与所述吸水垫搭接，所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线，所述检测线较所述质控线更靠近所述结合垫，所述结合垫上含有分别用荧光微球标记的犬胰脂肪酶单克隆检测抗体和第一质控抗体，所述检测线上包被有犬胰脂肪酶单克隆捕获抗体，所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述样品垫上含有鼠IgG、伊文斯兰、阻断剂R-001、吐温20和BSA。3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述结合垫上还含有吐温20、BSA和蔗糖。4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体，所述第二质控抗体为兔IgG抗体。5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为荧光胶乳微球。6.根据权利要求5所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球的直径为200mm～500nm，所述荧光微球在300nm～400nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。7.一种权利要求1～6任一项所述的荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述吐温2...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁才弗，王伟，杨晶，
申请(专利权)人：海卫特广州医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：