马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法技术

本发明专利技术涉及马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法，其是针对植物来源的样品，使用探针电喷雾电离质谱法，分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的方法，所述方法具备以下步骤：稀释步骤，在所述样品中添加缓冲液进行稀释；以及，质谱分析步骤，将稀释后的所述样品进行探针电喷雾电离，并导入到质谱分析装置，所述缓冲液含有铵盐以及酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸。有铵盐以及酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸。有铵盐以及酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸。

【技术实现步骤摘要】
马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法


[0001]本专利技术涉及分析化学、质谱分析、中草药分析等领域，尤其涉及一种马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法。

技术介绍

[0002]马兜铃酸是一大类硝基菲类化合物，主要有马兜铃酸A、B、C、D(也有时被称为马兜铃酸I、II、III、IV)等。许多马兜铃属及细辛属等马兜铃科植物中都含有马兜铃酸，并常与马兜铃内酰胺共存。这些植物广泛地用作中药材，例如天仙藤、马兜铃、寻骨风、朱砂莲、细辛等。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，马兜铃酸、含马兜铃酸的植物在一类致癌物清单中。此外，马兜铃酸可以引发肾小管坏死，进而出现不可逆转的肾间质纤维化，这种肾毒性与用药剂量相关。因此，马兜铃酸在中草药和食物中的含量检测分析具有重大意义。
[0003]最近，在鱼腥草等植物中也发现了几种马兜铃内酰胺，这些植物在亚洲国家广泛作为蔬菜食用。鱼腥草中所含的马兜铃内酯的危害尚不明确，但非常有必要监测中草药和食物中的这些化合物。
[0004]近年来，作为检测马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的方法，开发了基于近红外光谱技术来测定中药材中的马兜铃酸I的方法(专利文献1)、基于液相色谱法检测药材和消肿止痛酊中的马兜铃酸A的方法(专利文献2)。此外，迄今例如报道了，通过LC-MS、LC-MSMS、以及LC和高分辨率质谱联用的方法(非专利文献1～3)。其中，LC-MS和LC-MSMS都需要液相色谱分离然后用质谱进行检测。由于马兜铃科植物的强基质效应，通常通过稀释、色谱分离和/或固相萃取来减少LC系统中的干扰物和污染物，操作烦杂，分析耗时。例如，非专利文献1和2中记载的方法的分析时间分别为30分钟、3.5分钟。对于LC和高分辨率质谱联用，主要应用于马兜铃酸类物质的定性分析，难以进行准确的定量。
[0005]如上可见，现有技术中，在通过质谱分析法进行马兜铃酸类物质的定量分析必须预先进行LC分离步骤，分析时间非常长，另一方面，基于高分辨率质谱技术，虽然能够实现快速的定性分析，但无法实现可靠的定量分析。因此，迫切需要开发快速筛选和定量分析中药和/或食物中的马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的方法。
[0006]引证文件列表
[0007]专利文献
[0008]专利文献1：CN 108918460A
[0009]专利文献2：CN 101455695 A
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：A simple and selective detection method for aristolochic acid in crude drugs using solid-phase extraction.J Nat Med,2013,67:838-843
[0012]非专利文献2：超高效液相色谱-串联质谱测定保健食品中马兜铃酸A.中国现代应用药学,2013,30:186-189
[0013]非专利文献3：Characterization and quantitation of aristolochic acid analogs in different parts of Aristolochiae Fructus,using UHPLC-Q/TOF-MS and UHPLC-QqQ-MS.Chin J Nat Med,2017,15:392-400

技术实现思路

[0014]专利技术要解决的问题
[0015]针对现有技术中存在的难以快速且准确地对马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺进行定性/定量分析的问题，本专利技术提供一种马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法，该方法基于探针电喷雾电离技术使利用特定缓冲液稀释后的样品进行电离，并通过质谱法分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺，从而在供于质谱分析之前无需进行色谱分离，能够实现快速且准确的定性和定量分析。
[0016]此外，本专利技术还提供一种探针电喷雾电离法中使用的探针的前处理方法，其通过以特定步骤对探针施加电压，从而提高探针的使用寿命、分析的灵敏度和稳定性。
[0017]用于解决问题的方案
[0018]本专利技术中，使用如下方案解决了快速且准确地定性和定量分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的技术问题。
[0019]1.一种马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法，其特征在于，其是针对植物来源的样品，使用探针电喷雾电离质谱法，分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的方法，
[0020]所述方法具备以下步骤：
[0021]稀释步骤，在所述样品中添加缓冲液进行稀释；以及，
[0022]质谱分析步骤，将稀释后的所述样品进行探针电喷雾电离，并导入到质谱分析装置，
[0023]所述缓冲液含有铵盐以及酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸。
[0024]2.根据前述1所述的分析方法，其特征在于，所述样品为选自由蔬菜、中药材、中药提取物、以及中药制剂组成的组中的任一种。
[0025]3.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述样品为固体样品，在所述稀释步骤之前，还包括以下步骤：
[0026]粉碎步骤，将所述固体样品粉碎；以及，
[0027]提取步骤，在粉碎后的所述固体样品中加入提取溶剂进行提取，得到样品提取液，
[0028]将所述样品提取液供于所述稀释步骤。
[0029]4.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述缓冲液含有水和有机溶剂。
[0030]5.根据前述4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂与水的体积比为70/30～20/80。
[0031]6.根据前述4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂为选自由二甲亚砜、甲酰胺和碳数为2～4的醇组成的组中的任一种或两种以上。
[0032]7.根据前述4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂为异丙醇和/或乙醇。
[0033]8.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述铵盐为甲酸铵，所述pKa为4.8以下的羧酸为甲酸。
[0034]9.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺
为选自由马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D和马兜铃内酰胺I组成的组中的任一种或两种以上。
[0035]10.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述质谱分析装置为三重四极杆质谱仪。
[0036]11.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述质谱分析步骤中，在多反应监测模式下分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺。
[0037]12.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述质谱分析步骤中的所述探针电喷雾电离所使用的探针的表面具有硅涂层。
[0038]13.根据前述1或2所述的分析方法，其特征在于，所述质谱分析步骤中的所述探针电喷雾电离所使用的探针实施了前处理，
[0039]所述前处理包括：
[0040]浸渍步骤，将所述探针的前端浸渍于酸性的前处理液；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的分析方法，其特征在于，其是针对植物来源的样品，使用探针电喷雾电离质谱法，分析马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺的方法，所述方法具备以下步骤：稀释步骤，在所述样品中添加缓冲液进行稀释；以及，质谱分析步骤，将稀释后的所述样品进行探针电喷雾电离，并导入到质谱分析装置，所述缓冲液含有铵盐以及酸解离常数pKa为4.8以下的羧酸。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述样品为选自由蔬菜、中药材、中药提取物、以及中药制剂组成的组中的任一种。3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，所述样品为固体样品，在所述稀释步骤之前，还包括以下步骤：粉碎步骤，将所述固体样品粉碎；以及，提取步骤，在粉碎后的所述固体样品中加入提取溶剂进行提取，得到样品提取液，将所述样品提取液供于所述稀释步骤。4.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，所述缓冲液含有水和有机溶剂。5.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂与水的体积比为70/30～20/80。6.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂为选自由二甲亚砜、甲酰胺和碳数为2～4的醇组成的组中的任一种或两种以上。7.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述有机溶剂为异丙醇和/或乙醇。8.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，所述铵盐为甲酸铵，所述pKa为4.8以下的羧酸为甲酸。9.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，所述马兜铃酸和/或马兜铃内酰胺为选自由马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C、马兜铃酸D和马兜铃内酰胺I组成的组中的任一种或两种以上。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈振贺，滨田尚树，
申请(专利权)人：岛津企业管理中国有限公司，
类型：发明
国别省市：