一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，具体涉及椎间盘退变疾病技术领域，该组合物，每2mL该组合物中至少包括脐带间充质干细胞5

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物


[0001]本专利技术属于椎间盘退变疾病
，具体涉及一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物。

技术介绍

[0002]下腰痛(LBP,Low Back Pain)是一项重要的公共卫生问题。当今世界上大约6.5亿人受其影响，随着人口老龄化，其社会经济消耗在不断增加。更有甚者，下腰痛是导致就医行为的第二大原因，Chris Maher教授2017年在Lancet发文称下腰痛是发达和发展中国家伤残损失健康生命年(Years Lived with Disability)的首要原因。
[0003]椎间盘源性腰痛的药物、手术等常规治疗方式，治疗费用相对较高，对患者带来的痛苦相对较大、创伤也相对较大，长期研究发现，该疾病也有一定概率引发相邻椎间盘的加速退变。当前，椎间盘源性腰痛一般是药物治疗，如果失败，则通过侵入性手术(脊柱融合术或椎间盘置换术)作为最终选择。脊柱融合术的术后临床成功率在50％-70％之间。脊柱融合术会引起邻近节段退变的发展，这一情况往往需要再次手术。再者，脊柱融合术的花费巨大，并且可能会由于长的恢复时间和终生损伤引发附加费用。至于椎间盘置换术(TDR)，一项随机对照研究的meta分析指出，在2年的随访研究中，TDR与脊柱融合术有着相似的安全性和效果，并且TDR在提高生理功能，减轻疼痛和缩短住院时间方面表现出优势。然而，一项更早的系统性回顾指出：脊柱外科医生在进行大量的椎间盘置换术时应该足够谨慎，因为其并发症可能会在随后一些年发生。
[0004]面对这些治疗方案的局限，考虑到近来椎间盘退变的病理生理机制知识，特别是椎间盘退变过程中髓核细胞的消耗，用功能细胞和生物材料来进行髓核增补(细胞疗法)的方法现在已经成为预防椎间盘退变的一项备选方案。大量的临床前期研究已经实施并部分证实了这一再生细胞疗法的科学性。同时，在人体的初步研究中细胞疗法的有效性已经得到评估。但是尚无用于椎间盘退变的组合物。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是现有技术中，用于治疗椎间盘退变常用椎间盘退化常用TDR，但是其风险较大，并且常有并发症，目前的一些研究中提到可以用功能细胞和生物材料进行髓核增补(细胞疗法)的方法来实现，因此如何制备出一种适用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物则是亟待解决的技术问题。
[0006]因此我们研究用于治疗椎间盘退变的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，在具体使用过程中，用于治疗椎间盘退变的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物在不改变原有的脊柱力学结构，不置换原有椎间盘的前提下，在原位产生再生椎间盘作用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，每2mL该
组合物中至少包括脐带间充质干细胞5
×
10^5个、PRP凝胶和100单位的凝血酶。
[0009]进一步地，每2mL该组合物中还包括0.08mg NGF。
[0010]进一步地，该组合物中，脐带间充质干细胞的平均细胞活度≥98％。
[0011]进一步地，所述组合物按照以下步骤制成：
[0012]用2ml PRP重悬5
×
10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。
[0013]进一步地，所述组合物按照以下步骤制成：
[0014]取2mlPRP，向其中加入0.08mg NGF，混合均匀，然后再将加入NGF的2ml PRP重悬5
×
10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。
[0015]NGF起到营养神经细胞的作用，PRP主要为修复作用，两者相结合，减少退行性病变对神经系统的影响。
[0016]进一步地，
[0017]所述PRP凝胶的制备方法如下：
[0018](1)将血样平均分装到15ml离心管中，每管不超过15ml，300g(升速9，降速7)离心8min～10min；
[0019](2)全血分成三层，上层是上清液，下层是红细胞，两层交接处可见一层很薄的浅黄色界面，即PRP层，用移液枪接触液面，小心地吸取全部上清液至交界面下3mm，转移到15ml离心管中，配平，800g(升速9，降速7)离心6min；
[0020](3)离心管中液体分为两层，吸取3/4上清液用移液器转移到另一个离心管中，剩余血清用移液器接触液面，小心的吸取上清液至交界面下3mm，转移到新离心管中，即PRP凝胶。
[0021]进一步地，，
[0022]步骤(1)中离心时间为8min。
[0023]进一步地，所述脐带间充质干细胞的培养方式如下：
[0024](1)平置培养瓶使脐带组织块尽量均匀分布于整个底面，将培养瓶放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱；培养条件：37℃，二氧化碳体积分数为5％；
[0025](2)一周以后，拿出培养瓶，观察有无干细胞生长，每日观察，直至有干细胞生长，开始换液；
[0026](3)半量换液：若观察到培养瓶内有干细胞生长，进行半量换液，稍稍倾斜培养瓶，用移液管轻轻吸掉旧的培养基(注意不要将组织块吸出)，补足等量新鲜培养基，放置二氧化碳恒温恒湿培养箱开始培养，培养条件：37℃，二氧化碳体积分数为5％，观察细胞生长情况，细胞集中的地方融合度达到80％～90％；
[0027](4)吸弃培养瓶中的培养液及组织块，并用氯化钠注射液轻轻冲洗细胞培养瓶1～2遍；
[0028](5)消化：消化细胞，消化至在倒置显微镜镜下观察到细胞大部分由梭形变为圆形并脱落；
[0029](6)收集细胞，原培养瓶中每瓶加入10～15ml氯化钠注射液轻轻吹打，将贴壁细胞吹打下来；
[0030](7)过滤：收集细胞悬液至50ml离心管，筛网过滤；
[0031](8)细胞计数：轻轻吹打，重悬细胞，吹打混匀，取样计数；
[0032](9)离心洗涤：计数5
×
10^5离心洗涤，离心上清液倒掉，底部干细胞即为脐带间充质干细胞。
[0033]本专利技术的优点是：
[0034](1)本专利技术的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物制备方法简单，该组合物中细胞形态未改变，并且细胞活率可达98.4％～99.5％。对于治疗椎间盘退变常用椎间盘退化效果更好。
[0035](2)本专利技术的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，在具体使用过程中，用于治疗椎间盘退变的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物在不改变原有的脊柱力学结构，不置换原有椎间盘的前提下，在原位产生再生椎间盘作用，不需再进行TDR，降低了风险，和后遗症，并发症，并且应用操作难度低，患者可接受程度更大，造成创伤更小。
附图说明
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，每2mL该组合物中至少包括脐带间充质干细胞5
×
10^5个、PRP凝胶和100单位的凝血酶。2.根据权利要求1所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，每2mL该组合物中还包括0.08mg NGF。3.根据权利要求1或2所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，该组合物中，脐带间充质干细胞的平均细胞活度≥98％。4.根据权利要求1或3所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，所述组合物按照以下步骤制成：用2ml PRP重悬5
×
10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。5.根据权利要求2或3所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，所述组合物按照以下步骤制成：取2mlPRP，向其中加入0.08mg NGF，混合均匀，然后再将加入NGF的2ml PRP重悬5
×
10^5个脐带间充质干细胞，混匀，向其中加入100单位的凝血酶，混合均匀。6.根据根据权利要求1所述的用于治疗椎间盘退变疾病的PRP凝胶负载脐带间充质干细胞组合物，其特征是，所述PRP凝胶的制备方法如下：(1)将血样平均分装到15ml离心管中，每管不超过15ml，300g(升速9，降速7)离心8min～10min；(2)全血分成三层，上层是上清液，下层是红细胞，两层交接处可见一层很薄的浅黄色界面，即PRP层，用移液枪接触液面，小心地吸取全部上清液至交界面下3mm，转移到15ml离心管...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙明辉，赵达旺，程雷，陈义，逯晓明，
申请(专利权)人：山东博森医学工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：