【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】己酮糖激酶(KHK)iRNA组合物及其使用方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2018年9月18日提交的美国临时专利申请第62/732,600号的优先权的权益，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，其以ASCII格式电子提交，全文通过引入并入本文。所述ASCII副本于2019年9月13日创建，名称为121301-06020_SL.txt，大小为309,325字节。
技术介绍
[0005]流行病学研究表明，西方饮食是现代肥胖流行的主要原因之一。与使用浓缩软饮料和加工食品相关的果糖摄取提高被认为是导致该流行病的主要因素。到1967年，高果糖玉米甜味剂开始在食品工业中获得广泛使用。尽管葡萄糖和果糖具有每分子相同的热值，但这两种糖被不同地代谢，并利用不同的GLUT转运体。果糖几乎完全在肝脏中代谢，并且与葡萄糖代谢途径不同，果糖代谢途径不受产物反馈抑制的调节(Khaitan Z et al.、(2013)J.Nutr.Metab.2013、Article ID 682673、1-12)。尽管己糖激酶和磷酸果糖激酶(PFK)调节从葡萄糖产生甘油醛-3-P，果糖激酶或己酮糖激酶(KHK)负责将果糖在肝脏中磷酸化为果糖-1-磷酸，但其不被增加的果糖-1-磷酸浓度下调。因此，所有进入细胞的果糖都被迅速磷酸化。(Cirillo P.et al.,(2009)J.Am.Soc.Nephrol.20:545-553)。持续利用ATP将果糖磷酸化为果糖-1-磷酸导致细胞内磷酸消耗、...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表达的双链核糖核酸(dsRNA)试剂，其中所述dsRNA试剂包含有义链和反义链，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸89-107、176-194、264-282、474-492、508-526、529-547、562-580、616-646、682-700、705-723、705-757、705-799、739-757、739-799、760-799、804-822、837-855、892-910、959-977、992-1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含与SEQ ID NO:2的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。2.一种用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表达的双链核糖核酸(dsRNA)试剂，其中所述dsRNA试剂包含有义链和反义链，所述反义链包含互补区域，所述互补区域包含与表3或5中列出的反义序列中任一者相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。3.根据权利要求2所述的dsRNA试剂，其中所述反义链包含与选自AD-72506、AD-72319、AD-72502、AD-72513、AD-72499、AD-72303、AD-72500、AD-72522、AD-72512、AD-72304、AD-72514、AD-72257、AD-72295、AD-72332、AD-72507、AD-72311、AD-72501、AD-72508、AD-72293、AD-72322、AD-72264、AD-72290、AD-72338、AD-72315、AD-72272、AD-72337、AD-72298、AD-72503、AD-72327、AD-72521、AD-72309、AD-72313、AD-72517、AD-72316、AD-72335、或AD-72317的双链体中的反义序列中任一者相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。4.根据权利要求1-3中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述有义链和反义链包含选自表3或5中的序列中任一者的序列。5.根据权利要求1-4中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述dsRNA包含至少一个修饰的核苷酸。6.根据权利要求1-4中任一项所述的dsRNA试剂，其中所述有义链的所有核苷酸和所述反义链的所有核苷酸包含修饰。7.一种用于抑制己酮糖激酶(KHK)基因表达的双链核糖核酸(dsRNA)试剂，其中所述dsRNA试剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸89-107、176-194、264-282、474-492、508-526、529-547、562-580、616-646、682-700、705-723、705-757、705-799、739-757、739-799、760-799、804-822、837-855、892-910、959-977、992-1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含与SEQ ID NO:2的核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，其中所述有义链的基本上所有核苷酸和所述反义链的基本上所有核苷酸是修饰的核苷酸，和其中所述有义链与在3
’
端连接的配体缀合。8.根据权利要求7所述的dsRNA试剂，其中所述有义链的所有核苷酸和所述反义链的所有核苷酸包含修饰。9.根据权利要求7所述的dsRNA试剂，其中所述修饰的核苷酸中的至少一个选自脱氧-核苷酸、3
’
端脱氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修饰的核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、
2'-脱氧修饰的核苷酸、锁核苷酸、非锁核苷酸、构象限制的核苷酸、约束乙基核苷酸、无碱基核苷酸、2
’-
氨基修饰的核苷酸、2
’-
O-烯丙基修饰的核苷酸、2
’-
C-烷基修饰的核苷酸、2
’-
羟基修饰的核苷酸、2
’-
甲氧基乙基修饰的核苷酸、2
’-
O-烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰的核苷酸、1,5-脱水己糖醇修饰的核苷酸、环己烯基修饰的核苷酸、包含硫代磷酸酯基的核苷酸、包含甲基膦酸酯基的核苷酸、包含5
’-
磷酸酯的核苷酸、包含5
’-
磷酸酯模拟物的核苷酸。10.根据权利要求9所述的dsRNA试剂，其中所述修饰的核苷酸包含3
’
端脱氧-胸腺嘧啶核苷酸(dT)的短序列。11.根据权利要求2或3所述的dsRNA试剂，其中所述互补区域的长度是至少17个核苷酸。12.根据权利要求2或3所述的dsRNA试剂，其中所述互补区域的长度是19-21个核苷酸。13.根据权利要求12所述的dsRNA试剂，其中所述互补区域的长度是19个核苷酸。14.根据权利要求1-3和7中任一项所述的dsRNA试剂，其中每条链的长度不超过30个核苷酸。15.根据权利要求1-3和7中任一项所述的dsRNA试剂，其中至少一条链包含具有至少1个核苷酸的3
’
突出端。16.根据权利要求1-3和7中任一项所述的dsRNA试剂，其中至少一条链包含具有至少2个核苷酸的3
’
突出端。17.根据权利要求1-3中任一项所述的dsRNA试剂，其进一步包含配体。18.根据权利要求17所述的dsRNA试剂，其中所述配体与所述dsRNA试剂的有义链的3
’
端缀合。19.根据权利要求7或17所述的dsRNA试剂，其中所述配体是N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)衍生物。20.根据权利要求19所述的dsRNA试剂，其中所述配体为21.根据权利要求19所述的dsRNA试剂，其中所述dsRNA试剂如以下示意图所示与所述配体缀合
且其中X是O或S。22.根据权利要求21所述的dsRNA试剂，其中X是O。23.根据权利要求2或3所述的dsRNA试剂，其中所述互补区域包含表3或5的反义序列之一。24.根据权利要求2或3所述的dsRNA试剂，其中所述互补区域由表3或5的反义序列之一组成。25.一种用于抑制细胞中己酮糖激酶(KHK)基因表达的双链核糖核酸(dsRNA)试剂，其中所述dsRNA试剂包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与编码KHK的mRNA互补的区域，其中每条链的长度是约14至约30个核苷酸，其中所述dsRNA试剂由式(III)表示：有义：5'n
p-N
a-(XXX)
i-N
b-YYY-N
b-(ZZZ)
j-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-
N
a
′-
(X
′
X
′
X
′
)
k-N
b
′-
Y
′
Y
′
Y
′-
N
b
′-
(Z
′
Z
′
Z
′
)
l-N
a
′-
n
q
′
5'(III)其中：i、j、k和l各自独立地为0或1；p、p
’
，q和q
’
各自独立地为0-6；N
a
和N
a
’
各自独立地表示包含0-25个修饰或未修饰的核苷酸或其组合的寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个不同地修饰的核苷酸；N
b
和N
b
’
各自独立地表示包含0-10个修饰或未修饰的核苷酸或其组合的寡核苷酸序列；n
p
、n
P
’
、n
q
和n
q
’
各自可以存在或不存在，各自独立地表示突出端核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X
’
X
’
X
’
、Y
’
Y
’
Y
’
和Z
’
Z
’
Z
’
各自独立地表示在三个连续核苷酸上的三个相同修饰的一个基序；N
b
上的修饰不同于Y上的修饰，且N
b
’
上的修饰不同于Y
’
上的修饰；和其中所述有义链与至少一个配体缀合。26.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中i为0；j为0；i为1；j为1；i和j两者为0；或者i和j两者为1。27.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中k为0；l为0；k为1；l为1；k和l两者为0；或者k和l两者为1。28.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中XXX与X
’
X
’
X
’
互补，YYY与Y
’
Y
’
Y
’
互补，且ZZZ与Z
’
Z
’
Z
’
互补。29.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中YYY基序出现在所述有义链的切割位点处
或附近。30.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中Y
’
Y
’
Y
’
基序出现在所述反义链从5
’
端开始的第11、12和13位。31.根据权利要求30所述的dsRNA试剂，其中Y
’
是2
’-
O-甲基。32.根据权利要求29所述的dsRNA试剂，其中式(III)由式(IIIa)表示：有义：5'n
p-N
a-YYY-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-N
a
′-Y
′
Y
′
Y
′-
N
a
′-n
q
′
5'(IIIa)。33.根据权利要求29所述的dsRNA试剂，其中式(III)由式(IIIb)表示：有义：5'n
p-N
a-YYY-N
b-ZZZ-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-N
a
′-Y
′
Y
′
Y
′-
N
b
′-Z
′
Z
′
Z
′-
N
a
′-n
q
′
5'(IIIb)其中N
b
和N
b
’
各自独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。34.根据权利要求29所述的dsRNA试剂，其中式(III)由式(IIIc)表示：有义：5'n
p-N
a
–
XXX-N
b-YYY-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-N
a
′-X
′
X
′
X
′-
N
b
′-Y
′
Y
′
Y
′-
N
a
′-n
q
′
5'(IIIc)其中N
b
和N
b
’
各自独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。35.根据权利要求29所述的dsRNA试剂，其中式(III)由式(IIId)表示：有义：5'n
p-N
a
–
XXX-N
b-YYY-N
b-ZZZ-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-N
a
′-X
′
X
′
X
′-
N
b
′-Y
′
Y
′
Y
′-
N
b
′-Z
′
Z
′
Z
′-
N
a
′-n
q
′
5'(IIId)其中N
b
和N
b
’
各自独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列，并且N
a
和N
a
’
各自独立地表示包含2-10个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。36.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是15-30个核苷酸对。37.根据权利要求36所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是17-23个核苷酸对。38.根据权利要求36所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是17-25个核苷酸对。39.根据权利要求36所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是23-27个核苷酸对。40.根据权利要求36所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是19-21个核苷酸对。41.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中所述双链区域的长度是21-23个核苷酸对。42.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中每条链的长度是15-30个核苷酸。43.根据权利要求7、25和35中任一项所述的dsRNA试剂，其中每条链的长度是19-30个核苷酸。44.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中在核苷酸上的修饰选自LNA、HNA、CeNA、2
’-
甲氧基乙基、2
’-
O-烷基、2
’-
O-烯丙基、2
’-
C-烯丙基、2
’-
氟、2
’-
脱氧、2
’
羟基及其组合。45.根据权利要求44所述的dsRNA试剂，其中在核苷酸上的修饰为2
’-
O-甲基或2
’-
氟修饰。46.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中所述配体是通过单价、二价或三价分支接头连接的一个或多个GalNAc衍生物。47.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，所述配体为
48.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中所述配体连接至所述有义链的3
’
端。49.根据权利要求48所述的dsRNA试剂，其中所述RNAi试剂如以下示意图所示与所述配体缀合50.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中所述试剂进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接。51.根据权利要求50所述的dsRNA试剂，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接位于一条链的3
’
端。52.根据权利要求51所述的dsRNA试剂，其中所述链是反义链。53.根据权利要求51所述的dsRNA试剂，其中所述链是有义链。54.根据权利要求50所述的dsRNA试剂，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接位于一条链的5
’
端。55.根据权利要求54所述的dsRNA试剂，其中所述链是反义链。56.根据权利要求54所述的dsRNA试剂，其中所述链是有义链。57.根据权利要求50所述的dsRNA试剂，其中所述硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间连接位于一条链的5
’
和3
’
端两者。58.根据权利要求57所述的dsRNA试剂，其中所述链是反义链。59.根据权利要求7或25所述的dsRNA试剂，其中位于所述双链体的反义链的5
’
端的第1位的碱基对是AU碱基对。60.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中Y核苷酸包含2
’-
氟修饰。61.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中Y
’
核苷酸包含2
’-
O-甲基修饰。62.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中p
’
>0。63.根据权利要求25所述的dsRNA试剂，其中p
’
＝2。
1010、922-1041、1013-1041、1069-1108、1169-1140、1111-1140、1155-1196、1221-1261、1267-1294、或1320-1350中任一者的核苷酸序列的至少14个连续核苷酸，并且其中所述反义链包含与编码KHK的mRNA互补的区域，其中每条链的长度是约14至约30个核苷酸，其中所述dsRNA试剂由式(III)表示：有义：5'n
p-N
a-(XXX)
i-N
b-YYY-N
b-(ZZZ)
j-N
a-n
q
3'反义：3'n
p
′-
N
a
′-
(X
′
X
′
X
′
)
k-N
b
【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。