一种fkbS基因、含其的基因工程菌及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种fkbS基因，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明专利技术还提供了一种生产子囊霉素的基因工程菌，其为天然生产子囊霉素的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中过表达该fkbS基因的工程菌。此外，本发明专利技术还提供了该基因工程菌的制备方法和用途。利用本发明专利技术所述基因工程菌，可有效提高子囊霉素的产量，并且同时降低了杂质含量；利用本发明专利技术所述基因工程菌生产子囊霉素，成本较低，适于工业化生产。适于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种fkbS基因、含其的基因工程菌及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种fkbS基因、含其的基因工程菌及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]巴豆酰-CoA还原酶(crotonyl-CoA carboxylase/reductase，CCR)在微生物的次生代谢过程中起到重要作用，它能够催化巴豆酰-CoA合成乙基丙二酰辅酶A(乙基丙二酰-CoA)，而后者是形成子囊霉素(ascomycin,FK520)结构的关键前体。在子囊霉素的产生菌株(Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus ATCC 14891)中，目前已报道的生物合成簇并不完整，尤其是编码巴豆酰-CoA还原酶的基因fkbS只有460bp被报道。最近公开的专利(CN107629994A)通过向子囊霉素产生菌中整合外源编码巴豆酰-CoA还原酶和3-氧酰基-酰基载体蛋白合酶III的基因，将子囊霉素提高至550mg/L，FK523/FK520为10％(图1中R为CH2CH3时，所示结构图为子囊霉素FK520；R为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种fkbS基因，其特征在于，所述fkbS基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；较佳地，所述fkbS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。2.一种包含如权利要求1所述的fkbS基因的重组表达载体；较佳地，所述重组表达载体的骨架为含有强启动子的质粒；更佳地，所述重组表达载体的骨架为含有红霉素抗性基因启动子、链霉菌启动子或硫链丝菌素诱导型启动子的质粒；进一步更佳地，所述重组表达载体的骨架为含有Perm*、kasOp*或tipAp的质粒，优选质粒pSET-152。3.一种转化体，其特征在于，在宿主中导入如权利要求1所述的fkbS基因或者如权利要求2所述的重组表达载体；较佳地，所述宿主为大肠杆菌；优选大肠杆菌ET12567。4.一种FKBS蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。5.一种生产子囊霉素的基因工程菌，其特征在于，其为天然生产子囊霉素的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中过表达如权利要求1所述的fkbS基因的工程菌；较佳地，所述基因工程菌为在所述天然生产子囊霉素的吸水链霉菌的基因组中整合了所述fkbS基因的工程菌，或所述基因工程菌为包含含有所述fkbS基因的重组表达载体的工程菌；其中，所述整合的位点优选为attB位点，更优选ΦC31 attB位点；和/或，所述天然生产子囊霉素的吸水链霉菌含有一个、两个或者三个拷贝的fkbS基因；和/或，所述天然生产子囊霉素的吸水链霉菌为吸水链霉菌ATCC 14891。6.一种制备如权利要求5所述的基因工程菌的方法，其特征在于，包括将如权利要求3所述的转化体与天然生产子囊霉素的吸水链霉菌进行接合培养，挑选接合子即得；较佳地，所述天然生产子囊霉素的吸水链霉菌为吸水链霉菌ATCC14891；和/或，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈少欣，余志拓，吴远杰，张正玉，赵苗苗，
申请(专利权)人：中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：