HSV-2-DELTA-gD疫苗及其生产和使用方法技术

分别提供了重组单纯疱疹病毒2(HSV

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HSV-2-DELTA-gD疫苗及其生产和使用方法
[0001]政府支持声明
[0002]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的编号为AI117321和AI007501的政府支持下完成的。政府在本专利技术中具有一定的权利。

技术介绍

[0003]包括流感和HIV病毒感染在内的病原体感染对总体健康具有重大影响。已经为包括流感和HIV病毒感染两者在内的许多病原体开发了疫苗，但是它们都有缺点和局限性。因此，必须设计和评估新的疫苗策略。

技术实现思路

[0004]本文公开了新的和改进的基于HSV-2的疫苗，其用于多种抗原性靶标，包括流感和HIV。
[0005]提供了一种用于生产针对异源抗原的疫苗载体的工艺，所述工艺包括：
[0006]a)提供HSV-2基因组，其包括：
[0007](i)编码HSV-2糖蛋白D的基因的全部或部分缺失，和
[0008](ii)包含启动子-FP构建体的核酸，其中FP是编码荧光蛋白的核酸；
[0009]b)用(i)a)的HSV-2基因组和(ii)编码异源抗原的线性DNA片段共转染宿主细胞，所述共转染在所述HSV-2基因组和所述DNA片段之间发生等位基因重组的条件下进行；
[0010]c)筛选由b)产生的噬菌斑(plaque)，以鉴定在引发荧光蛋白荧光的激发光下不显示荧光的噬菌斑；
[0011]d)从c)中的不显示荧光的那些噬菌斑中回收重组HSV-2病毒或病毒粒子，以获得针对异源抗原的疫苗载体。
[0012]还提供了通过本文所述的工艺制备的具有编码异源抗原的基因组的重组单纯疱疹病毒2(HSV-2)。
[0013]还提供了一种重组单纯疱疹病毒2(HSV-2)，其具有(i)HSV-2糖蛋白D编码基因(称为ΔgD-2)在其基因组中的完全缺失和(ii)(a)编码：启动子、异源抗原信号序列、异源抗原或(b)编码：启动子、异源抗原。
[0014]还提供了一种重组单纯疱疹病毒2(HSV-2)，其具有(i)HSV-2糖蛋白D编码基因在其基因组中的部分缺失和(ii)(a)依次编码HSV-2gD信号序列、异源抗原、HSV-2gD跨膜结构域，任选地HSV-2gD胞质结构域，但不编码HSV-2gD胞外结构域，或(b)依次编码HSV-2gD信号序列、异源抗原和HSV-2gD的跨膜胞质尾区。
[0015]还提供了其中包含如本文所述的重组HSV-2病毒的分离的细胞，其中所述细胞不存在于人类中。
[0016]还提供了包含如本文所述的重组HSV-2病毒的疫苗组合物。
[0017]还提供了药物组合物，其包含如本文所述的重组HSV-2病毒和药学上可接受的载体。
[0018]还提供了一种引发和/或增强受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(i)如本文所述的重组HSV-2病毒；(ii)如本文所述的疫苗；或(iii)如本文所述的药物组合物，其量可有效引发和/或增强受试者中的免疫应答。
[0019]还提供了一种治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(i)如本文所述的重组HSV-2病毒；(ii)如本文所述的疫苗；或(iii)如本文所述的药物组合物，其量可有效治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性。
[0020]还提供了一种治疗受试者中的HIV感染或降低受试者中HIV感染的可能性的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(i)如本文所述的重组HSV-2病毒；(ii)如本文所述的疫苗；或(iii)如本文所述的药物组合物，其量可有效治疗受试者中的HIV感染或降低受试者中HIV感染的可能性。
[0021]还提供了针对流感感染为受试者接种疫苗的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(i)如本文所述的重组HSV-2病毒；(ii)如本文所述的疫苗；或(iii)如本文所述的药物组合物，其量在针对流感感染为受试者接种疫苗方面是有效的。
[0022]还提供了针对HIV感染为受试者接种疫苗的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(i)如本文所述的重组HSV-2病毒；(ii)如本文所述的疫苗；或(iii)如本文所述的药物组合物，其量在针对HIV感染为受试者接种疫苗方面是有效的。
[0023]还提供了定量细胞群中抗体依赖性细胞介导的杀伤(ADCK)的速率或数量的方法，所述方法包括：在允许荧光蛋白在细胞中表达的条件下，用表达荧光蛋白的重组HSV-2感染细胞群中的多个细胞，所述重组HSV-2包含缺失了编码HSV-2gD的基因的基因组；使多个被感染的细胞与含有抗体的溶液和免疫细胞群接触；以及，在一个或多个时间点定量显示荧光蛋白荧光的和任选的一种或多种标记物的细胞的数量，以便随时间定量活的被感染的细胞的数量，从而定量细胞群中ADCK的速率或数量。
附图说明
[0024]图1A-1B：HSV-2ΔgD::HA和HSV-2ΔgD::HA茎是通过质粒DNA和ΔgD-2::P
EF1α-RFP(B3x2.8，也称为ΔgD-2::RFP)基因组DNA的共转染而创建的，并通过PCR进行了验证。图1A：将含有所需gD::HA基因的纯化的pYUB2169用PacI切割，并与HSV-2ΔgD::PEF1α-RFP基因组DNA共转染到VD60细胞中。使用电穿孔。将得到的RFP-噬菌斑纯化3次，并评估HA的存在。图1B：重组病毒通过来自质粒和重组病毒DNA的细胞外HA结构域的PCR扩增来验证。所使用的引物位于细胞外HA结构域的上游和下游100个碱基对(bp)处。两种重组病毒均显示了所需的条带，通过与质粒DNA的比较可见。在含有来自ΔgD*2(B3x2.9)的DNA的孔中不存在该尺寸的条带(泳道1和4)。泳道2显示来自pYUB2169的DNA，其包含全长HA构建体。泳道3显示了来自重组HSV-2ΔgD-2::HA(B3x2.10)的DNA，其包含非密码子优化的全长细胞外HA结构域。泳道5显示了来自重组HSV-2ΔgD-2::HA茎的DNA，其包含密码子优化的HA的茎结构域。泳道6显示了来自B3x2.11的DNA。
[0025]图2显示了对用ΔgD-2::GFP(B3x 2.7)或ΔgD-2(B3x 2.9)疫苗接种的抗体应答。
[0026]图3显示了用ΔgD-2::GFP病毒与用未标记的ΔgD-2病毒感染的细胞的抗体依赖性细胞毒性的结果。
[0027]图4：对ΔgD-2::GFP病毒与对未标记病毒的T细胞应答。
[0028]图5：ΔgD-2疫苗接种可防止野生型HSV-2株4674攻击，与ΔgD-2::GFP的保护相似。
[0029]图6：嵌合ΔgD-2::HA病毒的构建和在小鼠中的免疫应答。在A/Puerto Rico/1934/8(PR8)HA(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列和功能结构域中指示与HA1茎区、HA1头区、HA2茎区、HA2跨膜区和HA2胞质区相对应的区。对于嵌合ΔgD-2::HA病毒，将HA1茎、HA1头(或4个甘氨酸残本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于生产针对异源抗原的疫苗载体的工艺，所述工艺包括：a)提供HSV-2基因组，其包括：(i)编码HSV-2糖蛋白D的基因的完全或部分缺失，和(ii)包含启动子-FP构建体的核酸，其中FP是编码荧光蛋白的核酸；b)用(i)a)的HSV-2基因组和(ii)编码异源抗原的线性DNA片段共转染宿主细胞，所述共转染在所述HSV-2基因组和所述DNA片段之间发生等位基因重组的条件下进行；c)筛选由b)产生的噬菌斑，以鉴定在引发荧光蛋白荧光的激发光下不显示荧光的噬菌斑；和d)从c)中不显示荧光的那些噬菌斑中回收重组HSV-2病毒或病毒粒子，以获得针对异源抗原的疫苗载体。2.根据权利要求1所述的工艺，其中所述宿主细胞是HSV-1糖蛋白D补充细胞。3.根据权利要求1或权利要求2所述的工艺，其中所述启动子-FP构建体的启动子是异源启动子。4.根据权利要求1-3中的任一项所述的工艺，其中所述共转染通过电穿孔进行。5.根据权利要求1-4中的任一项所述的工艺，其中所述荧光蛋白是红色荧光蛋白(RFP)。6.根据权利要求1-5中的任一项所述的工艺，其中使用以下共转染所述宿主细胞：(i)a)的HSV-2基因组和(ii)线性DNA片段，所述线性DNA片段依次编码(i)HSV-2gD信号序列、异源抗原、HSV-2gD跨膜结构异域、HSV-2gD胞质结构域，但不编码HSV-2gD胞外结构域，或依次编码(ii)HSV-2gD信号序列、异源抗原和HSV-2gD的胞质结构域。7.根据权利要求1-5中的任一项所述的工艺，其中使用以下共转染所述宿主细胞：(i)a)的HSV-2基因组和(ii)线性DNA片段，所述线性DNA片段依次编码(i)启动子、异源抗原以及任选的poly-A信号。8.根据权利要求1-7中的任一项所述的工艺，其中所述异源抗原是流感抗原。9.根据权利要求1-8中的任一项所述的工艺，其中所述异源抗原是流感血凝素(HA)抗原。10.根据权利要求9所述的工艺，其中所述HA抗原是全长HA胞外结构域或是HA茎。11.根据权利要求1-7中的任一项所述的工艺，其中所述异源抗原是HIV抗原。12.根据权利要求11所述的工艺，其中所述HIV抗原是Env gp145。13.根据权利要求1-12中的任一项所述的工艺，其中所述异源抗原在上游CMV启动子的控制下并且具有下游SV40 poly-A信号。14.根据权利要求1-13中的任一项所述的工艺，其中所述启动子是延伸因子1α基因的启动子(P
EF1α
)，并且其中P
EF1α
和FP融合在一起(P
EF1α-FP)。15.一种疫苗载体或一种重组单纯疱疹病毒-2(HSV-2)，其包含编码异源抗原的基因组，并由如权利要求1-14中的任一项所述的工艺制备。16.一种重组单纯疱疹病毒-2(HSV-2)，其包含：(i)HSV-2糖蛋白D编码基因在其基因组中的完全缺失；和(ii)(a)线性DNA片段，其编码启动子、异源抗原信号序列和异源抗原，或者(b)编码启动子和异源抗原。
17.一种重组单纯疱疹病毒-2(HSV-2)，其包含：(i)HSV-2糖蛋白D编码基因在其基因组中的部分缺失；和(ii)(a)线性DNA片段，其依次编码HSV-2gD信号序列、异源抗原、HSV-2gD跨膜结构域，任选地，HSV-2gD胞质结构域，但不编码HSV-2gD胞外结构域，或(b)线性DNA片段，其依次编码HSV-2gD信号序列、异源抗原和HSV-2gD的跨膜胞质尾区。18.根据权利要求16或17所述的重组HSV-2，其进一步包括在其脂质双层上的寄生虫表面糖蛋白，其中所述寄生虫是哺乳动物的寄生虫。19.根据权利要求16-18中的任一项所述的重组HSV-2，其中所述HSV-2糖蛋白D编码基因是HSV-2U
S
6基因。20.根据权利要求16-19中的任一项所述的重组HSV-2，其中所述异源抗原是流感抗原。21.根据权利要求16-20中的任一项所述的重组HSV-2，其中所述异源抗原是血凝素(HA)抗原。22.根据权利要求21所述的重组HSV-2，其中所述HA抗原是全长HA胞外结构域或是HA茎。23.根据权利要求16-19中的任一项所述的重组HSV-2，其中所述异源抗原是HIV抗原。24.根据权利要求23所述的重组HSV-2，其中所述HIV抗原是Env gp145。25.一种细胞，其在其中包含如权利要求16-24中的任一项所述的重组病毒，其中所述细胞不存在于人类中。26.一种疫苗组合物，其包含如权利要求16-24中的任一项所述的重组病毒。27.一种药物组合物，其包含如权利要求16-24中的任一项所述的病毒和药学上可接受的载体。28.一种引发和/或增强受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定量的如权利要求16-24中的任一项所述的重组病毒，其量可有效引发和/或增强受试者中的免疫应答。29.一种引发和/或增强受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定量的如权利要求26所述的疫苗，其量可有效引发和/或增强受试者中的免疫应答。30.一种引发和/或增强受试者中的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定量的如权利要求27所述的药物组合物，其量可有效引发和/或增强受试者中的免疫应答。31.一种治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定量的如权利要求16-22中的任一项所述的重组病毒，其量可有效治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性。32.一种治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定量的如权利要求26所述的疫苗，其量可有效治疗受试者中的流感感染或降低受试者中流感感染的可能性。33.一种治疗受试者中流感感染或降低受试者中流感感染的可能性的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：威廉，
申请(专利权)人：阿尔伯特爱因斯坦医学院，
类型：发明
国别省市：