双特异性抗PSMAX抗CD28抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了双特异性抗原结合分子，其包括特异性结合人CD28的第一抗原结合结构域和特异性结合人PSMA的第二抗原结合分子。在某些实施例中，本发明专利技术的双特异性抗原结合分子能够抑制表达PSMA的肿瘤(如前列腺肿瘤)的生长。本发明专利技术的所述抗体和双特异性抗原结合分子可用于治疗以下疾病和病症，在所述疾病和病症中，上调的或诱导的靶向性免疫应答是期望的和/或在治疗上是有益的。在治疗上是有益的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性抗PSMA X抗CD28抗体及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请涉及并要求于2018年6月21日提交的美国临时申请第62/688,227号、于2018年12月19日提交的美国临时申请第62/781,930号、于2018年12月19日提交的美国临时申请第62/781,980号以及于2019年3月8日提交的美国临时申请第62/815,878号的优先权。前述申请的全部内容通过引用明确地并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且特此将其通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2019年6月20日，被命名为10367WO01_118003-45220_SL.TXT并且大小为48,690字节。


[0005]本专利技术涉及结合CD28和如PSMA等靶分子的双特异性抗原结合分子及其使用方法。

技术介绍

[0006]CD28是在T细胞表面表达的I型跨膜蛋白，其具有组装成同源二聚体的单个细胞外Ig-V样结构域。CD28是CD80(B7.1)和CD86(B7.2)蛋白的受体，并且由在APC上表达的CD80或CD86活化。CD28与CD80或CD86的结合提供了对T细胞活化和存活重要的共刺激信号。除了T细胞受体(TCR)之外，通过CD28的T细胞刺激为各种白细胞介素的产生提供了强效信号。CD28在TCR活化之后加强细胞信号，如由NFκB转录因子控制的通路。CD28共信号对于有效的T细胞活化(如T细胞分化、增殖、细胞因子释放和细胞死亡)很重要。
[0007]已提出抗CD28抗体用于涉及T细胞活化的治疗目的。一种特殊的抗CD28抗体，TGN1412(抗CD28超激动剂)用于临床试验。TGN1412诱导细胞因子风暴，这是毒理学或离体人PBMC研究中未预测到的。2006年，以0.1mg/kg的剂量向六名健康志愿者静脉注射TGN1412(抗CD28超激动剂)。在2小时内，所有六名患者都有明显的炎症反应(细胞因子风暴)。在16小时内，所有患者均出现多器官衰竭。用皮质类固醇治疗受试者，并且细胞因子水平在2-3天内恢复到正常水平。在1期研究(与CRS相关联)中，0.1mg/kg的起始剂量基于食蟹猴的50mg/kg的未观察到的副作用水平“NOAEL”的500倍的倍数(Suntharalingam等人，“1期试验中抗CD28单克隆抗体TGN1412的细胞因子风暴(Cytokine Storm in a Phase 1 Trial of the Anti-CD28 Monoclonal Antibody TGN1412)”，《新英格兰医学期刊(NEJM)》355：1018-1028(2006))。
[0008]对食蟹猴的毒理学研究无法预测在人类中观察到的细胞因子应答。
[0009]PSMA(前列腺特异性膜抗原)/FOLH1是“充分表征”的肿瘤靶标。PSMA是在前列腺癌中过度表达的II型跨膜糖蛋白。其也称为谷氨酸羧肽酶II(GPC)。在正常人类前列腺中，PSMA与前列腺导管周围的上皮细胞的细胞质和顶面相关联。前列腺组织的发育不良性转化和/或致瘤性转化导致PSMA从顶膜转移到导管的管腔表面。PSMA被组成性地内吞，并且其未脱落。PSMA是各种临床ADC(抗体-药物缀合物)试验和成像方法的目标。PSMA在人类前列腺
腺癌中高度表达，并且与转移(淋巴结)相匹配。在前列腺肿瘤中，PSMA表达水平根据阶段和级别而增加。向雄激素非依赖性前列腺癌的转变最终导致表达增加。有趣的是，在一些实体肿瘤(包含结肠癌、肺癌、乳腺癌、肾癌和膀胱癌亚型)的肿瘤新脉管系统中也报道了PSMA表达。
[0010]PSMA也在正常组织中表达。在前列腺上皮细胞、十二指肠、肾小管细胞、唾液腺和星形胶质细胞中发现表达最强。PSMA在输卵管和乳腺中被弱表达，并且在宫颈内皮中极少表达。
[0011]结合CD28和靶抗原(如PSMA)的双特异性抗原结合分子在治疗环境中是有用的，在所述治疗环境中，需要表达靶抗原的细胞的特异性靶向和T细胞介导的杀伤。还需要在药物组合物中安全使用的抗CD28抗体。

技术实现思路

[0012]在第一方面，本专利技术提供了结合CD28和靶抗原的双特异性抗原结合分子。根据某些示例性实施例，所述双特异性抗原结合分子结合CD28和PSMA；这种双特异性抗原结合分子在本文中也称为“抗CD28/抗PSMA双特异性分子”。所述抗CD28/抗PSMA双特异性分子的抗PSMA部分可用于靶向表达PSMA的肿瘤细胞(例如，前列腺肿瘤细胞)，并且所述双特异性分子的抗CD28部分可用于活化T细胞。肿瘤细胞上的PSMA和T细胞上的CD28的同时结合促进了活化的T细胞对所靶向的肿瘤细胞的定向杀伤(细胞裂解)。因此，本专利技术的抗CD28/抗PSMA双特异性分子尤其可用于治疗与表达PSMA的肿瘤相关或由其引起的疾病和病症(例如，前列腺癌)。
[0013]根据本专利技术的此方面的双特异性抗原结合分子包括特异性结合人CD28的第一抗原结合结构域和特异性结合PSMA的第二抗原结合结构域。本专利技术包含抗CD28/抗PSMA双特异性分子(例如，双特异性抗体)，其中每个抗原结合结构域包括与轻链可变区(LCVR)配对的重链可变区(HCVR)。在本专利技术的某些示例性实施例中，抗CD28抗原结合结构域和抗PSMA抗原结合结构域各自包括与共同LCVR配对的不同的独特的HCVR。
[0014]本专利技术提供了抗CD28/抗PSMA双特异性分子，其中特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域包括如表1中所示的HCVR氨基酸序列中的任何一个。特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域还可以包括如表1中所示的LCVR氨基酸序列中的任何一个。根据某些实施例，特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域包括如表1中所示的HCVR/LCVR氨基酸序列对中的任何一个。本专利技术还提供了抗CD28/抗PSMA双特异性分子，其中特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域包括如表1中所示的重链CDR1-CDR2-CDR3氨基酸序列中的任何一个和/或如表1中所示的轻链CDR1-CDR2-CDR3氨基酸序列中的任何一个。
[0015]根据某些实施例，本专利技术提供了抗CD28/抗PSMA双特异性分子，其中特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域包括重链可变区(HCVR)，所述重链可变区具有选自由SEQ ID NO：10、34和58组成的组的氨基酸序列或其基本上类似的序列，所述基本上类似的序列具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性。
[0016]本专利技术还提供了抗CD28/抗PSMA双特异性分子，其中特异性结合CD28的所述第一抗原结合结构域包括轻链可变区(LCVR)，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO：18、42和66组成的组的氨基酸序列或其基本上类似的序列，所述基本上类似的序列具有至少90％、
至少95％、至少98％或至少99％序列同一性。
[0017]本专利技术还提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)第一抗原结合结构域(D1)，所述第一抗原结合结构域结合人CD28的K
D
小于约10-6
M，如在25℃下通过表面等离子体共振所测量的；以及b)第二抗原结合结构域(D2)，所述第二抗原结合结构域特异性结合靶肿瘤细胞上的人前列腺特异性膜抗原(PSMA)的K
D
小于约10-9
M，如在25℃下通过表面等离子体共振所测量的。2.根据权利要求1所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子与人T细胞的表面结合，其中EC
50
小于约10-6
M，如通过体外FACS结合测定所测量的。3.根据权利要求1所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子与食蟹猴T细胞的表面结合，其中EC
50
小于约10-7
M，如通过体外FACS结合测定所测量的。4.根据权利要求1所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子与表达PSMA的细胞系的表面结合，其中EC
50
小于约10-8
M，如通过体外FACS结合测定所测量的。5.根据权利要求1所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中当与抗PSMA X CD3双特异性抗体结合使用并在表达PSMA的靶细胞上测试时，所述双特异性抗原结合分子表现出共刺激效应。6.根据权利要求5所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中通过以下中的一个或多个示出了所述共刺激效应：(a)活化并引导人T细胞杀伤表达PSMA的靶细胞的能力；(b)在T细胞上上调PD-1的能力；(c)增加从PBMC释放细胞因子IFNγ和TNF的能力；(d)耗竭肿瘤细胞的能力；或(f)增强肿瘤清除的能力。7.根据权利要求6所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中通过以下中的一个或多个进一步示出了所述共刺激效应：(g)在基于T细胞/APC荧光素酶的报告基因测定中活化NFκB活性；或(h)使用原代CD4
+
T细胞/APC功能测定法来测量IL-2细胞因子产量。8.根据权利要求1到7中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子与被工程化为表达CD28的细胞特异性结合，其中EC
50
在约5.0nM到约10nM的范围内，如通过电化学发光检测平台所测量的。9.根据权利要求1到7中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子与人上皮前列腺癌细胞系特异性结合，其中EC
50
在约0.3nM到约5.0nM的范围内，如通过电化学发光检测平台所测量的。10.根据权利要求1到9中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述靶肿瘤细胞是前列腺癌细胞。11.根据权利要求1到10中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合结构域(D1)包括：a)包含在重链可变区(HCVR)内的三个重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，所述重链可变区包括选自由SEQ ID NO：10、34和58组成的组的氨基酸序列；以及b)包含在轻链可变区(LCVR)内的三个轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，所述轻链可变区包括选自由SEQ ID NO：18、42和66组成的组的氨基酸序列。12.根据权利要求11所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：
a)HCDRl，其包括选自由SEQ ID NO：12、36和60组成的组的氨基酸序列；HCDR2，其包括选自由SEQ ID NO：14、38和62组成的组的氨基酸序列；以及HCDR3，其包括选自由SEQ ID NO：16、40和64组成的组的氨基酸序列。13.根据权利要求12所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)LCDR1，其包括选自由SEQ ID NO：20、44和68组成的组的氨基酸序列；LCDR2，其包括选自由SEQ ID NO：22、46和70组成的组的氨基酸序列；以及LCDR3，其包括选自由SEQ ID NO：24、48和72组成的组的氨基酸序列。14.根据权利要求11所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合结构域包括：a)一组HCVR CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，所述组包括选自由SEQ ID NO：12、14、16；36、38、40；60、62和64组成的组的氨基酸序列，以及一组LCVR CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)，所述组包括SEQ ID NO：20、22、24；44、46、48；以及68、70、72的氨基酸序列。15.根据权利要求11所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合结构域包括HCVR/LCVR对，所述HCVR/LCVR对包括选自由SEQ ID NO：10/18；34/42和58/66组成的组的氨基酸序列。16.根据权利要求1到15中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合结构域包括：a)包含在HCVR内的三个HCDR，所述HCVR包括选自由SEQ ID NO：2、26和50组成的组的氨基酸序列；以及b)包含在LCVR内的三个LCDR，所述LCVR包括选自由SEQ ID NO：18、42和66组成的组的氨基酸序列。17.根据权利要求16所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合结构域包括：a)HCDR1，其包括选自由SEQ ID NO：4、28和52组成的组的氨基酸序列；b)HCDR2，其包括选自由SEQ ID NO：6、30和54组成的组的氨基酸序列；以及C)HCDR3，其包括选自由SEQ ID NO：8、32和56组成的组的氨基酸序列。18.根据权利要求17所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合结构域包括：a)LCDR1，其包括选自由SEQ ID NO：20、44和68组成的组的氨基酸序列；LCDR2，其包括选自由SEQ ID NO：22、46和70组成的组的氨基酸序列；以及LCDR3，其包括选自由SEQ ID NO：24、48和72组成的组的氨基酸序列。19.根据权利要求18所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合结构域包括：a)一组HCVR CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，所述组包括选自由SEQ ID NO：4、6、8；28、30、32；以及52、54、56组成的组的氨基酸序列；以及一组LCVR CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)，所述组包括选自由SEQ ID NO：20、22、24；44、46、48；以及68、70、72组成的组的氨基酸序列。20.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：12、14、16的氨基酸序列的HCVR CDR和包含SEQ ID NO：20、22、24的氨基酸序列的LCVR CDR；以及
b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：4、6、8的氨基酸序列的HCVR CDR和包含SEQ ID NO：20、22、24的氨基酸序列的LCVR CDR。21.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：36、38、40的氨基酸序列的HCDR和包含SEQ ID NO：44、46、48的氨基酸序列的LCDR；以及b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：28、30、32的氨基酸序列的HCDR和包含SEQ ID NO：44、46、48的氨基酸序列的LCDR。22.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：60、62、64的氨基酸序列的HCDR和包含SEQ ID NO：68、70、72的氨基酸序列的LCDR；以及b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：52、54、56的氨基酸序列的HCDR和包含SEQ ID NO：68、70、72的氨基酸序列的LCDR。23.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其包括：a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：10/18的氨基酸序列的HCVR/LCVR对；以及b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：2/18的氨基酸序列的HCVR/LCVR对。24.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中：a)所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：34/42的氨基酸序列的HCVR/LCVR对；并且b)所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：26/42的氨基酸序列的HCVR/LCVR对。25.根据权利要求1到19中任一项所述的分离的双特异性抗原结合分子，其中a)所述第一抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：58/66的氨基酸序列的HCVR/LCVR对；并b)所述第二抗原结合结构域包括包含SEQ ID NO：50/66的氨基酸序列的HCVR/LCVR对。26.一种分离的双特异性抗原结合分子，其与参考抗体竞争结合PSMA，或结合到PSMA上的同一表位，其中所述参考抗体包括具有HCVR/LCVR对的第一抗原结合结构域，所述HCVR/LCVR对包括SEQ ID NO：10/18、34/42或58/66的氨基酸序列，以及具有HCVR/LCVR对的第二抗原结合结构域，所述HCVR/LCVR对包括SEQ ID NO：2/18、26/42或50/66的氨基酸序列。27.一种分离的双特异性抗原结合分子，其与参考抗体竞争结合人CD28，或结合到人CD28上的同一表位，其中所述参考抗体包括具有HCVR/LCVR对的第一抗原结合结构域，所述HCVR/LCVR对包括SEQ ID NO：10/18、34/42或58/66的氨基酸序列，以及具有HCVR/LCVR对的第二抗原结合结构域，所述HCVR/LCVR对包括SEQ ID NO：2/18、26/42和50/66的氨基酸序列。28.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到27中任一项所述的双特异性抗原结合分子和药学上可接受的载剂或稀释剂。29.一种核酸，其包括对根据权利要求1到27中任一项所述的双特异性抗体进行编码的核苷酸序列。30.一种表达载体，其包括根据权利要求29所述的核酸。
31.一种宿主细胞，其包括根据权利要求30所述的表达载体。32.一种在受试者中抑制前列腺细胞肿瘤生长的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1到27中任一项所述的分离的双特异性抗体或根据权利要求28所述的药物组合物。33.根据权利要求32所述的方法，其进一步包括施用第二治疗剂。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述第二治疗剂包括抗肿瘤药剂、放射疗法、抗体药物缀合物、与抗肿瘤药剂缀合的双特异性抗体、检查点抑制剂或其组合。35.一种治疗患有前列腺癌或患有另一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：