一种检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒，对当前的新型冠状病毒疫情防控具有较大意义。本发明专利技术提供了检测新型冠状病毒的引物组，所述引物组选自以下引物组A

【技术实现步骤摘要】
一种检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒，以及其应用。

技术介绍

[0002][0003]核酸检测涉及到提取、扩增、检测等环节，对实验室环境和操作人员要求较高，一个完整的新冠病毒核酸检测程序往往需要专业测试人员连续3小时以上的双手离台操作，涉及大型的荧光定量PCR仪，因此核酸检测的普及和现场应用受到限制，进而导致了大量疑似病s例患者和密切接触人群不能够及时得到确诊，同时由于某些方法由于反应体系灵敏度不够容易造成检测结果的假阴性从而出现漏检问题。因此有必要开发一种操作便捷、检测快速、灵敏度高的新型冠状病毒的反应体系/试剂盒。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于：设计检测新型冠状病毒的引物组，针对新型冠状病毒具有通用性，对非新型冠状病毒具有特异性。
[0005]本专利技术的再一目的在于：提供使用上述引物组的试剂盒，以达到操作简便、检测时间短，灵敏度高，降低假阴性和漏检率。
[0006]本专利技术通过LAMP反应体系/试剂的优化，克服当前新型冠状病毒分子检测领域中所遇到的由于操作复杂、检测时间长而造成大量疑似病例患者和密切接触人群不能够及时得到确诊，以及由于反应体系灵敏度较低易造成检测结果呈假阴性从而出现漏检的问题。
[0007]本专利技术要解决的另一个技术问题是提供检测新型冠状病毒的引物及试剂盒。
[0008]环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是近年来发展起来的一种新型等温核酸扩增方法，该法针对靶序列的6个区域设计特异性引物，利用一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在等温条件保温约60 min，即可完成核酸扩增反应。该技术具有不需要PCR仪或荧光定量PCR仪、等温下即可完成，肉眼即可判断反应结果，以及操作便捷、检测时间短、灵敏度高、特异性强等优点。新冠疫情爆发后，研究人员基于LAMP原理研制了新冠病毒的检测方法，如Yinhua Zhang et al. (2020)[文献见：Rapid Molecular Detection of SARS-CoV-2 (COVID-19) Virus RNA Using Colorimetric LAMP. doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.26.20028373 ]以新型冠状病毒的ORF和N基因设计了LAMP扩增引物，其中检测灵敏度较高的包含引物组NA的反应体系最低可检测到120拷贝的RNA。为了进一步提高检测灵敏度，降低假阴性和漏检率，本专利技术开发了一种检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒，并在此基础上完成本专利技术。
[0009]本专利技术公开了一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV/Sars-CoV-2）的引物组及试剂盒。所述引物组兼具特异性和通用性。所述试剂盒包括酶反应体系和显色剂，通过在酶反应体系下进行等温扩增反应，通过显色剂辅助判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是
否存在新型冠状病毒。本专利技术检测试剂盒具有操作便捷、检测速度快、灵敏度高特点，可以加快疑似病例患者和密切接触人群检测速度，同时最大限度地避免当前由检测灵敏度低引致的漏检问题。
[0010]本专利技术提供一种检测新型冠状病毒的引物组，所述引物组选自以下引物组A-C之任意一组：引物组A：上游外引物A_F3: 5
’-
TTTCACAAATATTACCAGATCCA-3
’
（SEQ ID NO: 1）下游外引物A_B3: 5
’-
AAACAGTAAGGCCGTTAAAC-3
’
（SEQ ID NO: 2）上游内引物A_FIP: 5
’-
AGCATCTGCAAGTGTCACTTTTCAAAACCAAGCAAGAGGT-3
’
（SEQ ID NO: 3）下游内引物A_BIP: 5
’-
GGCTTCATCAAACAATATGGTGATTTTGTGCACAAATGAGGTCT-3
’
（SEQ ID NO: 4）环引物A_LB: 5
’-
GCCTTGGTGATATTGCTGCT-3
’
（SEQ ID NO: 5）引物组B：上游外引物B_F3: 5
’-
CATGTTCTTTTGGTGGTGT-3
’
（SEQ ID NO: 6）下游外引物B_B3: 5
’-
TTAAACAGCCTGCACGTG-3
’
（SEQ ID NO: 7）上游内引物B_FIP: 5
’-
CTTCTGTGCAGTTAACATCCTGATATAACACCAGGAACAAATACTTCT-3
’
（SEQ ID NO: 8）下游内引物B_BIP: 5
’-
TCCCTGTTGCTATTCATGCAGATTAGAACCTGTAGAATAAACACG-3
’
（SEQ ID NO: 9）。
[0011]引物组C：上游外引物C_F3: 5
’-ꢀ
CAGTCAAGCCTCTTCTCGTT-3
’
（SEQ ID NO: 10）下游外引物C_B3: 5
’-ꢀ
AGAAGCCTCAGCAGCAGAT-3
’
（SEQ ID NO: 11）上游内引物C_FIP: 5
’-ꢀ
GCCAGCCATTCTAGCAGGAGAACCTCATCACGTAGTCGCAAC-3
’
（SEQ ID NO: 12）下游内引物C_BIP: 5
’-ꢀ
ATGCTGCTCTTGCTTTGCTGCTGCCTTGTTGTTGTTGGCCT-3
’
（SEQ ID NO: 13）。
[0012]基于上述引物组，本专利技术提供了一种检测新型冠状病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物组中的任意一组。
[0013]较好的，本专利技术所述的试剂盒，其还包括dNTP 溶液、Bst DNA聚合酶中的一种或多种。
[0014]较好的，本专利技术所述的试剂盒，其还包括逆转录酶。
[0015]较好的，本专利技术所述的试剂盒，还包括显色剂；所述显色剂选自Sybr Green I、Genefinder或GelRed。
[0016]较好的，本专利技术所述的试剂盒还包括Bst DNA聚合酶反应缓冲液、Mg
2+
或者甜菜碱中的一种或者几种。
[0017]本专利技术的试剂盒可以采用常规技术方法制备。例如，根据引物序列，使用化学合成的方法逐个或者逐段的连接引物。
[0018]具体而言，本专利技术所述的试剂盒，其还包括Bst DNA聚合酶反应缓冲液、Mg
2+
、甜菜
碱、dNTP 溶液、Bst DNA聚合酶、逆转录本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测新型冠状病毒的引物组，其特征在于，所述引物组选自以下引物组A-C之任意一组：所述的引物组A的引物包括下列序列：上游外引物A_F3: 5
’-
TTTCACAAATATTACCAGATCCA-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 1），下游外引物A_B3: 5
’-
AAACAGTAAGGCCGTTAAAC-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 2），上游内引物A_FIP: 5
’-
AGCATCTGCAAGTGTCACTTTTCAAAACCAAGCAAGAGGT-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 3），下游内引物A_BIP: 5
’-
GGCTTCATCAAACAATATGGTGATTTTGTGCACAAATGAGGTCT-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 4），环引物A_LB: 5
’-
GCCTTGGTGATATTGCTGCT-3
’
（SEQ ID NO: 5）；所述的引物组B的引物包括下列序列：上游外引物B_F3: 5
’-
CATGTTCTTTTGGTGGTGT-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 6），下游外引物B_B3: 5
’-
TTAAACAGCCTGCACGTG-3
’
（SEQ ID NO: 7），上游内引物B_FIP: 5
’-
CTTCTGTGCAGTTAACATCCTGATATAACACCAGGAACAAATACTTCT-3
’ꢀ
（SEQ ID NO: 8），下游内引物B_BIP:5
’-
TCCCTGTTGCTATTCATGCAGATTAGAACCTGTAGAATAAACACG-3
’
（SEQ ID NO: 9）；所述的引物组C的引物包括下列序列：上游外引物C_F3: 5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，李雪玲，田静，徐艳，陈晓敏，刘泽熙，梁辉，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：