重编程载体制造技术

重编程允许人或动物体的任何成熟细胞或体细胞“转化”为多能干细胞。可以通过将外源因子(通常是转录因子)引入成熟细胞来进行重编程。该方法可以在不使用胚胎的情况下产生诱导性多能干细胞，优点是它们可以从个体产生并返回/重新植入到同一个体中。发明专利技术人已经开发了使用瞬时载体瞬时表达外源重编程因子的方法，其中所述载体是闭合线性DNA。出人意料地，以这种方式开发的多能干细胞稳定，并且在表型上更接近于诸如ESC的天然干细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重编程载体专利技术背景重编程可以将人或动物体的任何成熟细胞或体细胞“转化”为多能干细胞。通过将外源因子(通常是转录因子)引入成熟细胞，可以诱导重编程。该方法可以在不使用胚胎的情况下产生诱导性多能干细胞，优点是它们可以从一个个体产生并返回/重新植入到同一个体中。通过重编程建立的细胞系称为诱导性多能干细胞(iPSC)，其表现出与胚胎干细胞(ESC)所具有相同的多能性和自我更新的性质。诱导性多能干细胞能够无限增殖，且具有分化成所有身体细胞类型的潜力，并因此可用于疾病建模和药物发现。干细胞研究给基于细胞的疗法的产生带来巨大前景，并有助于人类发育和再生医学的研究。人类体细胞基因重编程为人诱导性多能干细胞(hiPSC)，这可以为许多研究用途和最终疗法提供可补充的细胞来源。例如，可以使用诱导性干细胞来评估人细胞群的生理学和病理学反应。可以通过许多方法从成熟细胞类型诱导产生多能干细胞，但是大多数方法都涉及表达外源重编程因子，以诱导重编程。成功的iPSC产生通常需要2到4周表达重编程因子。这个时间窗口阻碍了使用瞬时载体单次转染。因此，需要通过多次使用瞬时DNA表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码一个或多个重编程因子的闭合线性DNA载体在产生诱导性多能干细胞中的用途。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180405 GB 1805683.81.编码一个或多个重编程因子的闭合线性DNA载体在产生诱导性多能干细胞中的用途。


2.一种产生诱导性多能干细胞(iPSC)的方法，其包括将一种或多种编码一个或多个重编程因子的闭合线性载体引入体细胞群，并培养所述细胞以实现一个或多个重编程因子的表达。


3.如权利要求1所述的用途或如权利要求2所述的方法，其中提供了两种或更多种的闭合线性DNA载体，每个载体编码一个或多个不同的重编程因子。


4.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中所述重编程因子选自以下的任意一个或多个：Oct3/4、Sox2、Sox1、Sox3、Sox15、Sox18、Klf1、Klf2、Klf4、Klf5、c-myc、L-myc和N-myc、NANOG和/或LIN28。


5.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中所述闭合线性DNA载体缺少EBNA1或EBNA1的功能性衍生物或变体和/或OriP或OriP的功能性衍生物或变体。


6.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中所述闭合线性DNA载体缺少任何用于敲低p53的序列。


7.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中所述重编程因子可操作地连接至一个或多个启动子，优选可操作地连接至所述闭合线性DNA载体上的同一启动子。


8.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中所述闭合线性DNA载体缺少以下一项或多项：
(i)细菌CpG基序；
(ii)细菌复制起点；和/或
(iii)抗生素抗性基因。


9.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中将所述闭合线性DNA载体引入体细胞，任选成熟体细胞中。


10.如任一前述权利要求所述的用途或方法，其中经由转染，任选经由核转染，引入所述闭合线性DNA载体。


11.如权利要求10所述的用途或方法，其中在转染或核转染之后在重编程完成之前将所述细胞培养约30天，优选28至32天。...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·卡尔博尼奇克，L·卡佩罗尼，J·泰特，T·麦凯，C·桑顿，
申请(专利权)人：塔驰莱特IP有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB