【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于逆转细胞老化的瞬时细胞重编程相关申请的交叉引用本申请要求于2018年3月13日提交的第62/642538号美国临时专利申请的优先权，该临时专利申请通过引用以其整体并出于所有目的并入本文。关于在联邦政府资助的研究和开发下的公开的权利声明此公开是以授权号R01AR070865和R01AR070864(美国国立卫生研究院(NIH/NIAMS))、授权号P01AG036695、R01AG23806(R37MERIT奖)、R01AG057433和R01AG047820(美国国立卫生研究院(NIH))、美国退伍军人事务部(BLR&D和RR&D成果审评)以及CalPoly资助奖#TB1-01175，在政府支持下开发的。政府拥有本公开的一定权益。
技术介绍
老化的特征在于分子、细胞、组织和生物体水平上逐渐发生的功能丧失。在染色质水平上，老化与表观遗传错误的逐步积累相关，所述表观遗传错误最终导致异常基因调节、干细胞衰竭、衰老以及细胞/组织稳态失调。通过少量转录因子的过表达将核重编程成为多能性的技术，可以通过驱动表观遗传重...
【技术保护点】
1.一种使细胞更生的方法，所述方法包括用编码一种或多种细胞重编程因子的一种或多种非整合型信使RNA来转染细胞不超过五(5)个连续日，从而产生更生的细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180313 US 62/642,5381.一种使细胞更生的方法，所述方法包括用编码一种或多种细胞重编程因子的一种或多种非整合型信使RNA来转染细胞不超过五(5)个连续日，从而产生更生的细胞。
2.权利要求1的方法，其中所述更生的细胞的转录组谱变得与年轻细胞的转录组谱更相似。
3.权利要求2的方法，其中所述更生的细胞的所述转录组谱包括选自RPL37、RHOA、SRSF3、EPHB4、ARHGAP18、RPL31、FKBP2、MAP1LC3B2、Elf1、Phf8、Pol2s2、Taf1和Sin3a的一种或多种基因的基因表达增加。
4.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出一种或多种核和/或表观遗传标志物的基因表达增加。
5.权利要求4的方法，其中所述标志物选自HP1γ、H3K9me3、层支持蛋白LAP2α和SIRT1蛋白。
6.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出蛋白水解活性增加。
7.权利要求6的方法，其中所述蛋白水解活性增加被测量为细胞自噬体形成增加、糜蛋白酶样蛋白酶体活性增加或其组合。
8.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出改善的线粒体健康和功能。
9.权利要求8的方法，其中改善的线粒体健康和功能被测量为线粒体膜电位升高、活性氧簇(ROS)减少或其组合。
10.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出一种或多种SASP细胞因子的表达降低。
11.权利要求10的方法，其中所述SASP细胞因子包括IL18、IL1A、GROA、IL22和IL9中的一种或多种。
12.权利要求1的方法，其中所述更生的细胞呈现出甲基化谱的逆转。
13.权利要求12的方法，其中所述甲基化谱的逆转通过Horvath钟估计来测量。
14.权利要求4的方法，其中所述参考值是从老化的细胞获得的。
15.权利要求1的方法，其中用信使RNA转染所述细胞包括选自以下的方法：lipofectamine和LT-1介导的转染、右旋糖酐介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、电穿孔、mRNA在脂质体中的包封和直接显微注射。
16.权利要求1的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子选自OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28和NANOG。
17.权利要求1的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子包括OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28和NANOG。
18.权利要求1的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
19.权利要求18的方法，其中所述细胞是人类细胞。
20.权利要求19的方法，其中所述细胞来自老年对象。
21.权利要求18的方法，其中所述细胞选自成纤维细胞、内皮细胞、软骨细胞、骨骼肌干细胞、角质化细胞、间充质干细胞和角膜上皮细胞。
22.权利要求21的方法，其中所述细胞是间充质干细胞。
23.权利要求22的方法，其中更生的间充质干细胞呈现出衰老参数(p16、p21和阳性SAβGal染色)的降低，细胞增殖增加和/或ROS水平降低。
24.权利要求1的方法，其中所述方法在体外、离体或体内进行。
25.权利要求24的方法，其中所述方法在体内进行。
26.权利要求25的方法，其中所述细胞在组织或器官内。
27.权利要求26的方法，其中所述方法减少所述组织或器官内的衰老细胞的数量。
28.权利要求27的方法，其中所述方法降低IL18、IL1A、GROA、IL22和IL9中的一种或多种的表达。
29.权利要求1的方法，其中所述方法恢复所述细胞的功能、增加所述细胞的潜能、增强所述细胞的存活能力或增加所述细胞的复制能力或寿命，或其组合。
30.权利要求1的方法，其中所述转染以每天一次进行5天。
31.权利要求1的方法，其中所述转染以每天一次进行4天。
32.权利要求1的方法，其中所述转染以每天一次进行3天。
33.权利要求1的方法，其中所述转染以每天一次进行2天。
34.一种用于治疗对象的与年龄相关的疾病或病况、软骨变性病症、神经变性病症和/或肌肉骨骼功能障碍的方法，所述方法包括施用治疗有效量的细胞，其中所述细胞包括编码一种或多种细胞重编程因子的一种或多种非整合型信使RNA。
35.权利要求34的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子选自OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28和NANOG。
36.权利要求35的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子包括OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、L...
【专利技术属性】
技术研发人员：V·塞巴斯蒂亚诺，T·J·萨尔卡，
申请(专利权)人：利兰斯坦福初级大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US
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