本发明专利技术涉及一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法，所述方法中的色谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200‑400nm，进样量为1‑100μl，柱温为10‑45℃。本发明专利技术的检测方法实现了氢醌与有关物质的有效分离与检测，显著提高了氢醌的用药安全性，并具有操作简便、分离度高、专属性好、灵敏度高等优点。
【技术实现步骤摘要】
一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法及其应用
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种高效分离并检测氢醌中对苯醌含量的高效液相色谱法及其应用。
技术介绍
氢醌(又称对苯二酚)为酪氨酸酶抑制剂，主要通过络合作用抑制酪氨酸酶活性，调控黑色素细胞代谢过程，使表皮内多巴反应阳性黑色素细胞数量显著减少，产生可逆性的皮肤褪色。Oettel于1936年首次提出氢醌具有美白皮肤的作用。自20世纪60年代起，许多国家将氢醌用作化妆品的增白剂和皮肤科用于治疗色素沉着症、祛斑等外用制剂。但须严格控制氢醌的用量。氢醌不稳定，易受光照、温度等环境因素的影响而发生氧化降解反应。氢醌在制备过程中引入工艺杂质和副产物外，在其制备及储存中易发生氧化降解反应而生成氧化降解杂质(如对苯醌等)。已有研究表明，对苯醌是光敏感性比氢醌更强的基因毒性物质，且光照将加速氢醌的氧化降解反应。对苯醌为氢醌的主要氧化降解产物，且容易与氢醌形成有色复合物，进而影响氢醌及其产品的纯度、质量、稳定性和其性状外观等，需要严格控制其限量在安全范围之内。另有研究表明，氢醌制备储存中生成的杂质(如对苯醌、连苯三酚、间苯二酚、邻苯二酚等)对皮肤、黏膜及中枢神经呼吸系统具有较强的刺激作用，需对其加以质量控制并具有十分重要的临床价值。为此，如何科学筛选高效分离并检测氢醌及其有关物质的检测方法，进而有效控制药品质量，以保障药品的有效性和安全性成为迫切需要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术提供了一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法，该方法通过优化色谱条件和洗脱条件，实现氢醌与对苯醌的高效分离与检测，并具有专属性好、灵敏度高等优点，可用于氢醌与对苯醌的高效分离与含量测定，实现药品质量可控，保障用药安全。本专利技术的目的在于提供一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法，所述方法中的色谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200-400nm，进样量为1-100μl，柱温为10-45℃。本专利技术的优选技术方案中，所述A相中含有浓度为0-0.5％的酸，优选A相中的酸含量为0.02-0.3％，还优选A相中的酸含量为0.05-0.1％。本专利技术的优选技术方案中，所述A相pH1.0-pH6.0，优选A相pH2.0-pH5.0，更优选A相pH2.5-pH4.0，还优选A相pH2.7-pH3.85。本专利技术的优选技术方案中，所述的酸选自甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵的任一种或其组合。本专利技术的优选技术方案中，流动相中的A相:B相的体积比为99:1-70:30，优选为98:2-80:20，更优选为97:3-90:10。本专利技术的优选技术方案中，所述流动相洗脱选自等度洗脱、梯度洗脱的任一种。本专利技术的优选技术方案中，所述流动相的流速为0.6-1.5ml/min，优选为0.8-1.2ml/min，更优选为0.9-1.0ml/min。本专利技术的优选技术方案中，所述检测波长为210nm-290nm，优选为210-230nm。本专利技术的优选技术方案中，稀释溶剂用于配置、溶解、稀释供试品溶液、对照溶液、对照品溶液的任一种，优选稀释溶剂选自水、甲醇、乙腈、流动相的任一种。本专利技术的优选技术方案中,所述柱温为20-40℃，优选为20℃、25℃、30℃、35℃的任一种。本专利技术的优选技术方案中，所述进样量为5-50μl，优选为10μl、15μl、20μl、30μl、40μl的任一种。本专利技术的优选技术方案中，所述的色谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种。本专利技术的优选技术方案中，所述的色谱柱选自GL-science、WondaSil、TSKgel、AgelaVenusil、InertsilODS-P、XBridgeHPLC色谱柱的任一种或其组合。本专利技术的优选技术方案中，所述色谱柱的直径为3-5mm，色谱柱的长度100-300mm，色谱柱中的填料粒径为3-5μm。本专利技术的优选技术方案中，所述的色谱柱选自GL-scienceC18WondaSilC18Superb4.6×250mm5μm、InertsilODS-P4.6×250mm5μm、TOSOHTSKgelC184.6×250mm5μm、AgelaVenusilC184.6×250mm5μm的任一种或其组合。本专利技术的优选技术方案中,供试品浓度为0.5μg/ml-3mg/ml，优选为1μg/ml-2mg/ml，更优选为2μg/ml-1mg/ml。本专利技术的优选技术方案中，氢醌中的有关物质选自对苯醌、苯胺、偏苯三酚、间苯三酚、连苯三酚、间苯二酚、邻苯二酚、苯酚、对苯二酚硫酸钾中的任一种或其组合。本专利技术的优选技术方案中,所述色谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为80:20-95：5，其中，A相为0.03-0.50％的冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量为5-50μl，柱温为25-35℃，流速为0.6-1.5ml/min。本专利技术的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为85:15-92：8，其中，A相为0.05-0.25％冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量为5-20μl，柱温为28-32℃，流速为0.8-1.2ml/min。本专利技术的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为90:10，其中，A相为0.1％冰乙酸溶液，B相为甲醇，等度洗脱，检测波长为210nm、220nm、230nm的任一种或其组合，进样量为10-15μl，柱温为30℃，流速为0.9-1ml/min。本专利技术的优选技术方案中,所述色谱柱选自十八烷基键合硅胶反相柱、十二烷基键合硅胶反相柱、八烷基键合硅胶反相柱、六烷基键合硅胶反相柱、四烷基键合硅胶反相柱、丙基酰胺键合硅胶柱的任一种，流动相中的A相：B相的体积比为90:10-99：1，其中，A相为0.03-0.50％冰乙酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-290nm，进样量为5-50μl，柱温为25-35℃，流速为0.6-1.5ml/min。本专利技术的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为95:5-98：2，其中，A相为0.05-0.25％冰乙酸溶液，B相为乙腈，等度洗脱，检测波长为210-230nm，进样量为5-20μl，柱温为28-32℃，流速为0.8-1.2ml/min。本专利技术的优选技术方案中，流动相中的A相：B相的体积比为97:3-94:6，其中，A相为0.1％冰乙本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法，其特征在于，所述方法中的色谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200-400nm，进样量为1-100μl，柱温为10-45℃。/n
【技术特征摘要】
20200814 CN 20201081892481.一种高效分离并检测氢醌中对苯醌的高效液相色谱法，其特征在于，所述方法中的色谱柱选自反相柱或可采用反相溶剂的正相柱的任一种，所述流动相由A相和B相组成，其中，A相选自水、甲醇水溶液、乙腈水溶液中的任一种，B相选自甲醇、乙腈中的任一种，检测波长为200-400nm，进样量为1-100μl，柱温为10-45℃。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述A相中含有浓度为0-0.5％的酸，优选A相中的酸含量为0.02-0.3％，还优选A相中的酸含量为0.05-0.1％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述A相pH1.0-pH6.0，优选A相pH2.0-pH5.0，更优选A相pH2.5-pH4.0，还优选A相pH2.7-pH3.85。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述的酸选自甲酸、冰乙酸、三氟乙酸、磷酸、磷酸盐的任一种或其组合，优选磷酸盐选自磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏冠荣，尹贝立，
申请(专利权)人：广东人人康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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