基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒及方法，包含生物磁珠‑NR‑LBD蛋白溶液、NCoA‑DNA标签嵌合物溶液、一对特异性引物、结合反应液以及荧光定量PCR反应体系。本发明专利技术首先将活化的生物磁珠‑NR‑LBD蛋白溶液、NCoA‑DNA标签嵌合物溶液和适量体积的待测物质用结合反应液共同孵育，然后磁性分离清洗所述检测体系并用1×荧光定量PCR反应体系重悬，再加入特异性引物进行荧光定量PCR扩增，根据Ct值定量表征待测物质的核受体活性。本试剂盒及检测方法具有特异性强、重复性好、检出限低、超高灵敏度、测试通量高、快速简便的优点。

【技术实现步骤摘要】
基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒及方法
本专利技术涉及环境化合物的检测
，特别是涉及一种基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒及方法。
技术介绍
生态环境安全和食品安全是关系人类生存的两大重要因素，拥有良好的生态环境和足够安全的食品供给，人类才能更健康地生存和发展。然而，人类工业和农业在推动经济迅猛发展的同时也给环境安全和食品安全带来沉重的负担。越来越多的化合物通过各种方式途径进入到人类的生存环境中，它们在环境中稳定存在，具有很强的生物积累性。内分泌干扰物(EndocrineDisruptingChemicals，EDCs)也称环境激素，是指环境中存在的外源性干扰人类或动物内分泌系统诸环节并导致异常效应的化学物质。它们通过摄入、接触、积累等各种非直接途径给生物体带来异常影响，即使极低的浓度也可能引起生殖障碍、发育异常、行为异常、免疫功能减退、幼体死亡等问题。内分泌干扰物种类繁多、毒性持久、危害潜伏期长，可过生物富集和食物链的传递，最终对高等动物和人类造成危害。环境内分泌干扰物质种类繁多，结构复杂多变，许多人工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于，包括生物磁珠-NR-LBD蛋白溶液、NCoA-DNA标签嵌合物溶液、一对特异性引物、结合反应液以及荧光定量PCR反应体系。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于，包括生物磁珠-NR-LBD蛋白溶液、NCoA-DNA标签嵌合物溶液、一对特异性引物、结合反应液以及荧光定量PCR反应体系。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物磁珠-NR-LBD蛋白通过以下步骤制备得到：以人或小鼠细胞或组织的cDNA为模板，参考NCBI公布的与人或小鼠健康关系密切的人或小鼠核受体NR的编码序列，对NR配体结合域NR-LBD的编码序列进行扩增，经原核细胞表达与纯化获得NR-LBD蛋白；该NR-LBD蛋白与预处理的生物磁珠联合孵育，获得生物磁珠-NR-LBD蛋白。


3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述与人或小鼠健康关系密切的核受体NR包括雌激素受体ER、孕激素受体PR、雄激素受体AR、甲状腺激素受体TR、糖皮质激素受体GR、盐皮质激素受体MR、过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR、组成型雄甾烷受体CAR、孕烷X受体PXR、维生素D受体VDR、维甲酸受体RAR、维甲酸相关孤核受体ROR、肝脏X受体LXR、法尼醇X受体FXR和雌激素相关受体ERR。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述NCoA-DNA标签嵌合物通过以下步骤制备得到：以人或小鼠细胞或组织的cDNA为模板，参考NCBI公布的人或小鼠核受体共激活因子NCoA的编码序列，对核受体共激活因子NCoA的编码序列进行扩增，经原核细胞表达与纯化获得NCoA蛋白；采用DNA-蛋白交联的策略将NCoA蛋白与DNA标签序列组装成NCoA-DNA标签嵌合物。


5.如权利要求4所述的基于荧光定量PCR筛选痕量内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于，所述人或小鼠核受体共激活因子NCoA包括甾醇受体共激活因子、激活的信号共整合因子2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1。


6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA标签序列为来源于自然存在的基因或人工...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾晓静，张照斌，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11