一种乌苯美司原料药中的杂质及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种乌苯美司原料药制备过程产生的一种杂质，同时提供了该杂质的制备方法，本发明专利技术制备得到的该杂质纯度达到99%，能够作为对照品用于乌苯美司原料药及其制剂产品的质量控制过程。

【技术实现步骤摘要】
一种乌苯美司原料药中的杂质及其制备方法
本专利技术涉及药物合成方法领域，具体涉及一种乌苯美司生产过程中产生的杂质以及该杂质的制备方法。
技术介绍
乌苯美司(Ubenimex；Bestatin)是从橄榄网状链霉菌的培养液中分离而得的一种低分子二肽化合物，它具有抑制肿瘤细胞表面氨基肽酶B、N和亮氨酸氨基肽酶作用，诱导肿瘤细胞凋亡和促进宿主细胞免疫功能，增强抗癌作用的双重功能，于1987年在日本上市。乌苯美司在临床上常和其他化疗药物联合应用于急性髓性的白血病、慢性髓性的白血病、肺鳞癌、恶性黑色素瘤、胃瘤等的治疗；和放疗联合，用于鼻咽癌等肿瘤疾病的治疗，还用于各种因素引起的免疫功能低下者，试用于骨髓发育不良综合症及单纯红细胞再生不良症的治疗。各种临床结果反馈该药物在增强人体免疫能力方面具有显著疗效，乌苯美司能显著提高癌症患者的生存率，改善其生活质量。乌苯美司化学名为N-[(2S,3R)-4-苯基-3-氨基-2-羟基丁酰]-L-亮氨酸，结构式如下：最早合成乌苯美司的方法是生物化学的细菌发酵方法，由UmezawaH等公开于J.Antibiot.1976,29,97。随着全球对乌苯美司需求不断增加，仅通过发酵生产乌苯美司已经不能满足药品市场的需求，而利用化学合成的方法更有利于工业化生产，越来越多的化学合成方法被报道。但由于乌苯美司结构复杂，结构中的肽键对酸碱敏感，且高温下不稳定，已报道的一些合成路线需要使用昂贵实际和危险化学品或产品纯度太低，因此能应用于工业化生产的路线目前只有一条，由抗生素杂志(JournalofAntibiotics，1983,36(6)：695-699)发表，反应路线为：乌苯美司含有三个手性中心，因此合成得到的乌苯美司原料药中可能含有有7个光学异构体杂质，此外合成过程中还会产生例如式Ⅵ、Ⅶ化合物等一系列的衍生物杂质。另外，现有技术CN109721505A还公开了一种乌苯美司合成中的杂质化合物，结构式为：乌苯美司合成过程中可能产生如此多的杂质，导致乌苯美司原料药的质量控制存在难度，难以生产出高质量的乌苯美司原料。而专利技术人在制备乌苯美司原料药过程中发现，除了上述已公开的杂质外，还存在量极少但对原料药产品质量有影响的杂质。由于量极少难以收集进行结构确证，为乌苯美司原料药的质量控制带来了困难。但为了获得高质量的乌苯美司原料药并进一步制备安全有效的乌苯美司制剂，有必要对该杂质进行结构确证并合成出纯度较高的该杂质化合物用于乌苯美司原料药的质量控制过程。
技术实现思路
本专利技术提供一种乌苯美司原料药制备过程产生的一种杂质及其制备方法，本专利技术制备得到的该杂质纯度达到99％，能够作为对照品用于乌苯美司原料药及其制剂产品的质量控制过程。本专利技术提供的一种乌苯美司原料药中的杂质，其特征在于，所述杂质的结构式如式Ⅰ所示：在乌苯美司生产过程中，发现产生的目标杂质影响乌苯美司质量，但由于产生的量太少，无法收集足够量符合进行结构确证要求的样品。本专利技术在通过液质联用测试得到该杂质的分子量后进行分析，推测该杂质可能是由起始物料(2S,3R)-4-苯基-3-苄氧甲酰氨基-2-羟基丁酸中有未保护氨基的(2S,3R)-4-苯基-3-氨基-2-羟基丁酸存在，反生如下的副反应而产生的杂质Ⅰ：但由于该反应的反应物活性位点较多，直接用该路线制备目标杂质反应产物过多，产品纯度和收率无法达到要求。因此，专利技术人根据推测的式Ⅰ化合物的结构,选择三种不同的氨基保护基，包括Cbz(苄氧羰基)、Boc(叔丁氧羰基)、Fmoc(芴甲氧羰基)，按照以下三条合成路线进行制备。路线一：路线二：路线三：但经试验发现，仅有路线一(采用苄氧羰基保护基)能够制备得到目标化合物，路线二和路线三无法制备得到纯度合格的杂质Ⅰ产品。因此，本专利技术提供的式Ⅰ所示的乌苯美司原料药中的杂质的制备方法，其特征在于按照以下合成路线制备：具体包含以下步骤：步骤1)：式Ⅱ化合物与氯甲酸苄酯在碱试剂作用下反应得到式Ⅲ化合物N-[(2S,3R)-3-苄氧基酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸；步骤2)：将式Ⅲ化合物在缩合剂作用下进行缩合反应得到式Ⅳ缩合物；步骤3)：缩合物在氢气/钯碳条件下脱保护基，得到式Ⅰ化合物粗品；步骤4)：将式Ⅰ化合物粗品溶于稀盐酸溶液，用氨水调pH值为5～6，搅拌析晶，过滤干燥。进一步优化，步骤1)式Ⅱ化合物即N-[(2S,3R)-3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸(乌苯美司)与氨基保护剂氯甲酸苄酯的摩尔比为1:1～3，优选1:2，反应温度为0～10℃，优选为0～4℃。所述碱试剂为NaHCO3、Na2CO3或K2CO3。步骤2)缩合反应的缩合剂通常可选自HOBt/DIC(1-羟基苯并三唑/N,N-二异丙基碳二亚胺)、HOBt/DCC(1,3-二环己基碳二亚胺)/三乙胺、PyBOP(六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷)/HOBt/DIPEA(N，N-二异丙基乙胺)、TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯)/HOBt/DIPEA、HBTU(2-(1H-苯并三唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐)/HOBt/DIPEA、HOSU/DCC/Na2CO3(N-羟基丁二酰亚胺/N,N-二环己基碳二亚胺/碳酸钠)，但经试验发现，只有HOSU/DCC/Na2CO3才能制备得到较高收率的产品，因此步骤2)缩合剂选择HOSU/DCC/Na2CO3。该步骤反应温度为10～30℃。步骤3)所述脱保护基采用钯炭氢化的方法，其中钯炭为5～10％含量，优选5％；钯炭用量为式Ⅳ缩合物重量的5％～25％，优选为20％；氢气压力为0.5～2.0Mpa，优选1.0～1.5Mpa。步骤4)的析晶原理是式Ⅰ化合物结构中同时含有氨基和羧基，类似氨基酸的化学性质，存在等电点，利用等电点时溶解度最小的特征采用等电点沉淀法进行式Ⅰ化合物的纯化。式Ⅰ化合物用稀盐酸溶解后用氨水调pH至其等电点附近，能够使产品析出，过滤除去杂质。所述稀盐酸浓度为1～3mol/L，优选浓度为1mol/L。通过缓慢滴加氨水调pH发现式Ⅰ化合物在pH5～6时析出最多，因此式Ⅰ化合物纯化析晶时调pH5～6，但pH值对产品的纯度影响不大。析晶温度为0～10℃时，产品纯度在99％以上，0～5℃时可同时达到最高收率。pH及析晶温度对产品收率及纯度的影响考察见下表。pH值对收率及纯度影响pH4.04.555.25.56.07.08.0收率3.1％12.8％68.4％72.3％85.9％60.7％46.9％2.3％析晶温度对收率及纯度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乌苯美司原料药中的杂质，其特征在于，所述杂质的结构式如式Ⅰ所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种乌苯美司原料药中的杂质，其特征在于，所述杂质的结构式如式Ⅰ所示：





2.式Ⅰ所示的乌苯美司原料药中的杂质的制备方法，其特征在于按照以下合成路线制备：



具体包含以下步骤：
步骤1)：式Ⅱ化合物与氯甲酸苄酯在碱试剂作用下反应得到式Ⅲ化合物N-[(2S,3R)-3-苄氧基酰胺基-2-羟基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸；
步骤2)：将式Ⅲ化合物在缩合剂作用下进行缩合反应得到式Ⅳ缩合物；
步骤3)：缩合物在氢气/钯碳条件下脱保护基，得到式Ⅰ化合物粗品；
步骤4)：将式Ⅰ化合物粗品溶于稀盐酸溶液，用氨水调pH值为5～6，搅拌析晶，过滤干燥。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述碱试剂为NaHCO3、Na2CO3或K2CO3。


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【专利技术属性】
技术研发人员：吴子强，刘东华，于玉根，雷光华，陈齐阳，袁文，
申请(专利权)人：深圳万乐药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44