【技术实现步骤摘要】
一种细胞病理学样本的多重染色制片方法
本专利技术涉及细胞病理学领域的一种细胞多重染色制片方法。该方法可以在细胞样本上，同时显示详细的细胞形态学特点，和一个或者多个特定生物标记物的表达信息。染色结果适合在普通光学显微镜下观察，在符合病理学家对细胞病理形态学诊断要求的前提下，可以同时观察一个或者多个特定生物标记物在同一细胞上的表达。本专利技术还涉及所述方法得到的细胞和载有所述细胞的病理切片。
技术介绍
细胞病理学主要是根据细胞内异常状况，研究疾病发生的原因、发病原理，以及疾病发生过程中，细胞的生理功能发生改变的规律，从而提出诊断和防治疾病的依据。临床样本涵盖脱落细胞学、细针吸取细胞学、血液循环肿瘤细胞，其他细胞学（手术中的细胞学，骨髓、外周血细胞学，艾滋病细胞学等）。早期的细胞病理学常规染色方法包括巴氏（Papanicolaou）、瑞氏-吉姆萨（Wright-Giemsa）等。目前最常用的是迪夫快速染色（Diff-Quik）,其染液是采用世界卫生组织(WHO)推荐的快速染色方法而配制，与瑞氏-吉姆萨类似都是利用巴氏技术原...
【技术保护点】
1.对细胞样本进行免疫组化染色和/或核酸显色原位杂交染色以及可用来病理学诊断的细胞形态学染色的多重染色方法，包括：/na) 在容器中制备细胞样本的细胞悬液；/nb) 在所述容器中的所述细胞悬液中，对所述细胞进行免疫组化染色和/或核酸显色原位杂交染色，包括：/ni) 在所述细胞悬液中加入特异性结合所述细胞上的抗原和/或核酸标志物的第一抗体和/或第一核酸探针，完成所述第一抗体和/或第一核酸探针与所述抗原和/或核酸标志物的特异性结合；/nii) 去除未结合的所述第一抗体和/或第一核酸探针，然后重新制备细胞悬液，/niii) 在所述细胞悬液中加入缀合了显色酶的第二抗体和/或显色酶标...
【技术特征摘要】
1.对细胞样本进行免疫组化染色和/或核酸显色原位杂交染色以及可用来病理学诊断的细胞形态学染色的多重染色方法，包括：
a)在容器中制备细胞样本的细胞悬液；
b)在所述容器中的所述细胞悬液中，对所述细胞进行免疫组化染色和/或核酸显色原位杂交染色，包括：
i)在所述细胞悬液中加入特异性结合所述细胞上的抗原和/或核酸标志物的第一抗体和/或第一核酸探针，完成所述第一抗体和/或第一核酸探针与所述抗原和/或核酸标志物的特异性结合；
ii)去除未结合的所述第一抗体和/或第一核酸探针，然后重新制备细胞悬液，
iii)在所述细胞悬液中加入缀合了显色酶的第二抗体和/或显色酶标记的第二核酸探针，使其特异性结合第一抗体和/或第一核酸探针；
iv)去除未结合的所述缀合了显色酶的第二抗体和/或显色酶标记的第二核酸探针，然后重新制备细胞悬液，
v)在所述细胞悬液中加入显色底物进行显色，在显色过程中，不断震荡悬浮在液体中的细胞，使催化产生的显色沉淀产物均匀散开而避免集中堆积；以及
vi)去除多余的显色底物，然后重新制备细胞悬液；以及
c)在所述容器中对所述细胞进行可用来病理诊断的细胞形态学染色，然后将多重染色的细胞涂布到病理玻片上；或者，将经过免疫组化染色和/或核酸显色原位杂交染色的细胞涂布到病理玻片上，进行可用来病理诊断的形态学染色。
2.权利要求1所述的方法，其中步骤ii)、iv)和vi)中去除未结合的所述第一抗体和/或第一核酸探针、去除未结合的所述缀合了显色酶的第二抗体和/或显色酶标记的第二核酸探针和去除多余的显色底物通过以下步骤：
i)清洗细胞；
ii)离心沉淀细胞；和
iii)丢弃上清液。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述可用来病理学诊断的细胞形态学染色选自Diff-Quik染色、巴氏（Papanicolaou）、瑞氏-吉姆萨（Wright-Giemsa）染色，和H&E染色。
4.权利要求3所述的方法，其中所述可用来病理学诊断的细胞形态学染色是Diff-Quik染色。
5.权利要求1-3的任一项所述的方法，其中所述细胞样本选自细胞病理学针吸活检穿刺的样本、血液循环肿瘤细胞样本、宫颈刮片细胞样本，和尿液脱落细胞样本，或者所述细胞样本是通过稀释来自患者的样本的细胞沉淀物而得到的，所述来自患者的样本选自体液、血液、血清、血浆、尿、唾液、汗液、痰、精液、粘液、泪液、淋巴...
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