一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒及构建制造技术

本发明专利技术提出了一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒及构建，利用腺病毒穿梭载体pShuttle为基础质粒，在多克隆位点上利用限制性核酸内切酶KpnI和Bgl II插入内部核糖体进入位点元件序列，从而构建了一个包含双顺反子序列并携带有两个并行的多克隆位点的用于腺病毒载体构建的真核表达穿梭载体。通过PCR扩增和基因测序证实该载体构建成功；该载体可用于双基因或多基因的真核表达和相应腺病毒载体的构建等实验研究，为基因功能研究提供了便利。

【技术实现步骤摘要】
一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒及构建
本专利技术属于腺病毒载体的构建领域，涉及一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒及构建。
技术介绍
近年来，具有多种基因的基因治疗已受到高度重视，在基因功能研究中，为了研究基因的特征、蛋白的生化特性及其功能机制，通常也需要构建双基因或多基因表达载体；但是，目前尚没有构建多个顺反子的有效工具。以人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus,CMV)、猿猴病毒40(Simianvirus,SV40)、人的延伸因子1α亚基(Humanelongationfactor1αsubunit，EF-1α)等启动子为基础的真核表达载体以及逆转录病毒载体被广泛应用于外源基因的转导和表达，尤其在作为基因疫苗和基因治疗载体的方面应用更为广泛。这些载体往往是表达双基因载体(Doublegenevector)。但这两个基因往往转录表达效率不高，甚至导致目的基因表达水平很低，其原因是这两个启动子都是真核启动子，转录起始存在竞争干扰现象；结果导致双基因载体没有单基因载体(Singlegenevec本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒，基因序列如序列表中SEQ IDNO：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒，基因序列如序列表中SEQIDNO：1所示。


2.一种用于腺病毒载体构建的携带双顺反子的穿梭质粒构建，步骤如下：
（1）引物设计与合成
根据pIRES的基因序列，设计两条扩增IRES的引物，上游引物（IRES-F）：5’tagcgcgtaatactggtacctcaatattggccattagc3’，下游引物（IRES-R）:5’aaccacgcccagatctgtttattgcagcttataa3’，下划线序列分别代表KpnI和BglII酶切位点；
（2）IRES的扩增与克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：王家宁，
申请(专利权)人：十堰市人民医院湖北医药学院附属人民医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42