整合有氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌制造技术

本发明专利技术公开了整合有氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌，属于生物工程技术领域。本发明专利技术采用合成生物学技术手段多位点多拷贝的将L‑氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶基因整合到大肠杆菌染色体，使大肠杆菌具有更好的生长特性，高密度培养的菌株比原始菌株最终量可提高30％以上。将所述工程菌应用于丹参素的生产，丹参素产量可达87.46mM，同时还能够很好地生产羟基酪醇，羟基酪醇产量可达54.43mM。

【技术实现步骤摘要】
整合有氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌
本专利技术涉及整合有氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌，属于生物工程

技术介绍
L-氨基酸氧化酶广泛存在于细菌、真菌、哺乳动物细胞、蛇毒、昆虫毒素及藻类中(L-aminoacidoxidaseasbiocatalyst:adreamtoofar？Appl.Microbiol.Biotechnol.2013,97:9323-41)。绝大部份L-氨基酸氧化酶氧化氨基酸时会产生过氧化氢从而对自身或环境中的细胞产生毒性。自然界中还存在一类不产过氧化氢的氨基酸氧化酶，这些酶来源于变形杆菌属(Proteussp.)、普罗威登菌属(Providenciasp.)、摩根菌属(Morganellasp.)等。通过相关文献报道这些菌体中的氧化酶从将氨基酸脱氢生成对应酮酸后，电子经过膜呼吸链传递给细胞色素氧化酶，最后与氧结合生成水，这类酶也被称为L-氨基酸脱氢酶或氨基酸脱胺酶。葡萄糖脱氢酶是短链乙醇脱氢酶家族的一员，在辅酶NAD(P)+等存在时能够催化β-D-葡萄糖转化成D-葡萄糖酸内酯，而反应生成的D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因工程菌，其特征在于，在大肠杆菌染色体的一个或多个位点上整合一个或多个拷贝数的氨基酸氧化酶基因和葡萄糖脱氢酶基因；所述染色体的一个或多个位点包括：dkgB、eaeH、lysO、bluF、tam、glsB、rcs、mntH、nupG、pitB、rbsA或pgi。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因工程菌，其特征在于，在大肠杆菌染色体的一个或多个位点上整合一个或多个拷贝数的氨基酸氧化酶基因和葡萄糖脱氢酶基因；所述染色体的一个或多个位点包括：dkgB、eaeH、lysO、bluF、tam、glsB、rcs、mntH、nupG、pitB、rbsA或pgi。


2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，将氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶基因进行多拷贝整合；所述多拷贝为6～30个拷贝。


3.根据权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述L-氨基酸氧化酶来源于ProteusmirabilisATCC29906或CosenzaeamyxofaciensATCC19692；所述葡萄糖脱氢酶来源于GluconobactersuboxydansATCC621、HaloferaxmediterraneiATCC33500或BacillussubtilisATCC13952。


4.根据权利要求1～3任一所述的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coliBL21、E.coliJM109、E.coliDH5α或E.coliTop10。


5.根据权利要求1～4任一所述的基因工程菌，其特征在于，还表达氨基酸氧化酶和葡萄糖脱氢酶参与的代谢途径中相关的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡宇杰，熊天真，丁彦蕊，白亚军，郑晓晖，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32