【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测序和生产核酸序列的方法相关申请本申请要求2018年4月5日提交的美国临时专利申请No.62/652,915的优先权利益，其内容整体引入本文作为参考。专利
和背景本专利技术在其一些实施方案中涉及测序和生产核酸序列的方法。核酸用于各种技术中，作为在细胞内或细胞外发生的生物化学反应的催化剂、抑制剂或刺激物。天然形式的核酸分别包含D-核糖或D-脱氧核糖作为RNA或DNA的糖主链。天然存在的核酸易受降解酶活性的影响，所述降解酶活性显著缩短这些分子在天然环境中的作用。因此，镜像生物学系统为在包含这些酶的生物学环境中发生的许多应用带来了希望，如在医学、药物诊断学、生物技术和农业中。例如，核酸酶-抗性L-DNA适配体被归类为血浆稳定的L-适配体药物1,2。然而，这种镜像核酸分子的生产、开发和使用要求灵敏、准确且可重复的方法以验证L-核酸序列的质量、长度和序列。尽管在DNA测序技术中存在引人注目的进步，但尚未报道用于测序L-DNA的实用方法。大多数常用的通过合成进行测序（sequencing-by-synthes...
【技术保护点】
1.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括使所述包含L-核苷酸的核酸序列经历使用选自下述的化学药品的化学测序方法：硫酸二甲酯、甲胺、焦碳酸二乙酯、亚甲蓝、氯钯酸钾、氢氧化钠、四氧化锇、精胺、高锰酸钾、肼、水合肼、盐酸羟胺、焦碳酸二乙酯、甲酸和柠檬酸盐缓冲液。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180405 US 62/6529151.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括使所述包含L-核苷酸的核酸序列经历使用选自下述的化学药品的化学测序方法：硫酸二甲酯、甲胺、焦碳酸二乙酯、亚甲蓝、氯钯酸钾、氢氧化钠、四氧化锇、精胺、高锰酸钾、肼、水合肼、盐酸羟胺、焦碳酸二乙酯、甲酸和柠檬酸盐缓冲液。
2.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括使所述包含L-核苷酸的核酸序列经历化学测序方法，其中所述核酸序列长度包含超过120个核苷酸。
3.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括使所述包含L-核苷酸的核酸序列经历化学测序方法，其中所述化学测序方法包括凝胶-电泳以测定所述核酸序列。
4.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括：
(a)用5-碘乙酰氨基荧光素在所述包含L-核苷酸的核酸序列的5’末端或3’末端进行标记，从而获得标记的包含L-核苷酸的核酸序列；和
(b)使所述标记的包含L-核苷酸的核酸序列经历化学测序方法。
5.标记包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括使用多核苷酸激酶在5’末端标记所述包含L-核苷酸的核酸序列。
6.测序包含L-核苷酸的核酸序列的方法，所述方法包括：
(a)根据权利要求5的方法使用多核苷酸激酶标记所述包含L-核苷酸的核酸序列，从而获得标记的包含L-核苷酸的核酸序列；和
(b)使所述标记的包含L-核苷酸的核酸序列经历化学测序方法。
7.权利要求2-4和6任一项的方法，其中所述化学测序方法包括使用选自硫酸二甲酯、甲胺、焦碳酸二乙酯、亚甲蓝、氯钯酸钾、氢氧化钠、四氧化锇、精胺、高锰酸钾、肼、水合肼、盐酸羟胺、焦碳酸二乙酯、甲酸和柠檬酸盐缓冲液的化学药品。
8.权利要求1和7任一项的方法，其中所述化学药品选自亚甲蓝、氢氧化钠、盐酸羟胺、甲酸和水合肼。
9.权利要求1和3-8任一项的方法，其中所述核酸序列长度包含超过120个核苷酸。
10.权利要求1-8任一项的方法，其中所述核酸序列长度包含超过150个核苷酸。
11.权利要求1-3和7-10任一项的方法，其中所述方法包括用荧光素酰胺（FAM）、5-碘乙酰氨基荧光素或生物素在5’末端或3’末端标记所述核酸序列。
12.权利要求1-3和7-10任一项的方法，其中所述方法包括用荧光素酰胺（FAM）或5-碘乙酰氨基荧光素在5’末端或3’末端标记所述核酸序列。
13.权利要求4和11-12任一项的方法，其中所述标记在5’末端。
14.权利要求1-3和7-10任一项的方法，其中所述方法包括用多核苷酸激酶在5’末端标记所述核酸序列。
15.权利要求5-6和14任一项的方法，其中所述标记包括用放射性同位素进行标记。
16.权利要求1-15任一项的方法，其中所述方法不包括质谱分析法（MS）。
17.权利要求1-16任一项的方法，其中所述核酸序列包含脱氧核糖核苷酸。
18.权利要求1-16任一项的方法，其中所述核酸序列包含核糖核苷酸。
19.权利要求1-18任一项的方法，其中所述化学测序方法包括：
(a)用标记在多个所述核酸序列分子的5’末端或3’末端标记所述多个分子；
(b)在所述(a)之后使用核碱基特异性化学试剂部分修饰所述多个分子，从而使得在靠近修饰的核碱基处切割所述多个分子时获得包含所述标记的所述核酸序列的多个片段；
(c)在所述(b)之后在靠近修饰的核碱基处切割所述多个分子；和
(d...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱听，刘先宇，姜文君，王敏，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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