提高条形码拆分率的测序方法和试剂盒技术

一种提高条形码拆分率的测序方法和试剂盒，该方法包括：提供插入片段测序引物、阻断的占位引物和待测模板，其中占位引物的3’端被阻断而不能延伸，且占位引物在待测模板上的杂交位置位于条形码测序引物杂交位置或其下游区域；将插入片段测序引物和占位引物杂交到待测模板上，对插入片段进行测序；在插入片段测序完成并阻断测序产物3’羟基端后，去除占位引物并杂交上条形码测序引物，或将占位引物的3’端恢复成3’羟基基团作为条形码测序引物，进行条形码测序。本发明专利技术的方法在不影响单端测序数据质量的前提下，解决单端测序读长超过插入片段长度而导致部分插入片段过短的序列不能被拆分出来的问题。

【技术实现步骤摘要】
提高条形码拆分率的测序方法和试剂盒
本专利技术涉及测序
，具体涉及一种提高条形码拆分率的测序方法和试剂盒。
技术介绍
现有的二代测序方法包括插入片段测序和条形码测序，可以先测序插入片段，再测序条形码；或者先测序条形码，再测插入片段。先测序插入片段，再测序条形码的方法存在一个问题：文库的插入片段长度是弥散分布的，当需要将插入片段读通时，较短的插入片段待测物的接头和条形码部分会被测通而导致条形码的测序引物无法与待测序列结合而不能测序，从而导致这部分插入片段过短的待测物不能被拆分出而被过滤掉。但是如果先测序条形码，再测插入片段，会导致插入片段的起始质量值偏低和整体质量值降低，可能是因为测条形码序列后，插入片段的测序引物的杂交会受影响。
技术实现思路
本专利技术提供一种提高条形码拆分率的测序方法和试剂盒，在不影响单端测序数据质量的前提下，解决单端测序读长超过插入片段长度而导致部分插入片段过短的序列不能被拆分出来的问题。根据第一方面，一种实施例中提供一种提高条形码拆分率的测序方法，该方法包括：提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高条形码拆分率的测序方法，其特征在于，所述方法包括：/n提供插入片段测序引物、阻断的占位引物和待测模板，其中，所述待测模板上具有插入片段测序引物杂交位置、插入片段和条形码测序引物杂交位置，所述占位引物的3’端被阻断而不能延伸，且所述占位引物在所述待测模板上的杂交位置位于所述条形码测序引物杂交位置或其下游区域；/n将所述插入片段测序引物和所述占位引物杂交到所述待测模板上，从所述插入片段测序引物开始延伸而对所述插入片段进行测序；/n在所述插入片段测序完成并阻断测序产物3’羟基端后，去除所述占位引物并杂交上条形码测序引物，或将杂交位置位于所述条形码测序引物杂交位置的占位引物的3’端恢复成3...

【技术特征摘要】
1.一种提高条形码拆分率的测序方法，其特征在于，所述方法包括：
提供插入片段测序引物、阻断的占位引物和待测模板，其中，所述待测模板上具有插入片段测序引物杂交位置、插入片段和条形码测序引物杂交位置，所述占位引物的3’端被阻断而不能延伸，且所述占位引物在所述待测模板上的杂交位置位于所述条形码测序引物杂交位置或其下游区域；
将所述插入片段测序引物和所述占位引物杂交到所述待测模板上，从所述插入片段测序引物开始延伸而对所述插入片段进行测序；
在所述插入片段测序完成并阻断测序产物3’羟基端后，去除所述占位引物并杂交上条形码测序引物，或将杂交位置位于所述条形码测序引物杂交位置的占位引物的3’端恢复成3’羟基基团作为条形码测序引物，进行条形码测序。


2.一种提高条形码拆分率的测序方法，其特征在于，所述方法包括：
提供阻断的插入片段测序引物、条形码测序引物和待测模板，其中，所述待测模板上具有插入片段测序引物杂交位置、插入片段和条形码测序引物杂交位置，所述插入片段测序引物的3’端被阻断而不能延伸；
将所述阻断的插入片段测序引物和所述条形码测序引物杂交到所述待测模板上，从所述条形码测序引物开始延伸而进行条形码测序；
在条形码测序完成并阻断测序产物3’羟基端后，将所述阻断的插入片段测序引物的3’端恢复成3’羟基基团作为插入片段测序引物，或去除所述阻断的插入片段测序引物并杂交上具有3’羟基基团的插入片段测序引物，对所述插入片段进行测序。


3.根据权利要求1或2所述的测序方法，其特征在于，所述阻断的占位引物或所述阻断的插入片段测序引物的3’羟基端被不可恢复或可恢复的阻断，其中所述不可恢复的阻断通过3’羟基端加ddNTP方式进行，所述可恢复的阻断通过3’羟基端加磷酸化修饰方式进行。


4.根据权利要求1或2所述的测序方法，其特征在于，所述待测模板是DNA纳米球。


5.根据权利要求1或2所述的测序方法，其特征在于，用甲酰胺去除所述阻断的占位引物或所述阻断的插入片段测序引物。

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静静，罗银玲，龚梅花，李计广，徐崇钧，蒋慧，
申请(专利权)人：深圳华大智造科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44