血纤维蛋白原γ初始变体的治疗性用途制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗或预防感染的用途的包括血纤维蛋白原γ初始变体的组合物。组合物中的血纤维蛋白原γ初始变体包括至少一条血纤维蛋白原γ初始多肽链。根据本发明专利技术用途的组合物还可包括其他血纤维蛋白原变体。与WT血纤维蛋白原相比，根据本发明专利技术的包括血纤维蛋白原γ初始变体的组合物将感染后的存活时间改善至超过200％。可治疗性地和预防性地使用它们。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】血纤维蛋白原γ初始变体的治疗性用途
本专利技术一般涉及包括γ初始链的血纤维蛋白原变体的用途，特别是涉及它们预防或治疗感染的用途。
技术介绍
血纤维蛋白原为可溶性血浆糖蛋白和二聚分子，其由两对通过二硫桥连接的，命名为Aα、Bβ和γ的三条多肽链组成。三条多肽链由三个分开的基因编码并且各自由3个mRNA合成。将三条多肽链(Aα、Bβ和γ)组装成其作为六链二聚体的最终形式(Aα、Bβ、γ)2出现在内质网(ER)的内腔中。循环中人血纤维蛋白原的成熟的主要形式由长度为610个氨基酸的Aα链、461个氨基酸的Bβ链和411个氨基酸的γ链组成，并且称为普通血纤维蛋白原、HMW血纤维蛋白原、野生型(WT)血纤维蛋白原。然而，已经表明循环血纤维蛋白原为数种变体(其在所有健康的个体的血液中出现并且是Aα链或Bβ链或γ链中改变的结果)的高度异质的混合物。众所周知的血纤维蛋白原的变体(其为可替换剪接的结果)为血浆血纤维蛋白原γ初始(pFibγ’)变体。pFibγ’变体代表人血浆中总血纤维蛋白原的约10％-15％。在循环中，pFibγ’作为异源二聚体存在，其中二聚血纤维蛋白原分子的一半含有WT血纤维蛋白原中发现的γ链，并且相同血纤维蛋白原分子的另一半含有变体γ链。在人中，pFibγ’中的变体γ链由427个氨基酸(γ427)而不是WT血纤维蛋白原中发现的411个氨基酸(γ411)组成。在γ427链中，γ411链的四羧基-末端氨基酸Ala-Gly-Asp-Val(AGDV)被20-mer肽置换。除了在控制出血中起关键作用外，血纤维蛋白原可通过限制病原体生长和介导宿主对病原体的防御机制，用作用于宿主保护的早期防线。然而，数种病原体已经进化出与宿主血纤维蛋白原相互作用的方式而增强病原体毒性。例如，金黄色葡萄球菌使用细菌细胞壁-锚定聚丛因子A(ClfA)结合血纤维蛋白原(可能因为其二聚结构)诱导悬浮物中金黄色葡萄球菌的血纤维蛋白原依赖性聚丛。血纤维蛋白原中的ClfA结合位点定位到WT血纤维蛋白原的血纤维蛋白原γ411的羧基-末端。细菌经ClfA和血纤维蛋白原的结合和随后的聚丛被认为是细菌的重要的毒性因素，并且在数个研究中，已经研究了防止ClfA与血纤维蛋白原γ链的结合的效果。美国2011/0171285公开了哺乳动物血纤维蛋白原的体外研究，ClfA不能与所述哺乳动物血纤维蛋白原结合，因为在两条γ链中已经修饰了在羧基-末端AGDV序列之前的谷氨酰胺(Q)。Flick等(2013)Blood(121):1783-1794公开了纯合子转基因小鼠，其中它们的血纤维蛋白原γ链的羧基-末端的QAGDV序列已经缺失(FibγΔ5/Δ5小鼠)。当用金黄色葡萄球菌细菌挑战时，与具有WT血纤维蛋白原的小鼠相比，这些突变体小鼠已经显著增加了存活率。然而，这些研究使用的分子可等同于从未从血浆中分离的同源二聚体pFibγ’。从血浆中不可能获得足够量的用于医学用途的这种血纤维蛋白原变体。另外，在不存在任何WT血纤维蛋白原的情况下，确定了FibγΔ5/Δ5小鼠中修饰的血纤维蛋白原对细菌结合、聚丛和毒性的效果，并且因此未表明该方法可用作能够与宿主的普通WT血纤维蛋白原竞争并且在存在WT血纤维蛋白原的情况下仍引进临床上有意义的效果的治疗性产品或预防性产品。相应地，期望找到易于获得，在存在宿主WT血纤维蛋白原的情况下对细菌毒性有作用，并且因此是临床上有意义的可选的血纤维蛋白原组合物。附图说明图1根据SEQIDNO.1的人WT血纤维蛋白原γ链(γ411)的羧基-末端。在位置407-411的Gln-Ala-Gly-Asp-Val(QAGDV)基序加下划线。图2根据SEQIDNO.2的20-mer肽，其替换人血纤维蛋白原γ初始的γ链中的AGDV。图3根据SEQIDNO.3的人γ初始链(γ427)的羧基-末端。图4从血浆中纯化的血纤维蛋白原制剂的SDS-PAGE分析，泳道1：总pFib、泳道2：pFibγ411/γ411以及泳道3：pFibγ427/γ411和重组血纤维蛋白原、泳道4：rhFibγ411/γ411和泳道5rhFibγ427/γ427。图5金黄色葡萄球菌USA300野生型(WT)与固定的图5A)从小鼠、人血浆分离的血纤维蛋白原和重组血纤维蛋白原；图5B)WT血纤维蛋白原(pFibγ411/411)、血纤维蛋白原γ初始异源二聚体(pFibγ427/411)和各种其混合物；图5C)WT血纤维蛋白原(pFibγ411/411)、血纤维蛋白原γ初始同源二聚体(rhFibγ427/427)和各种其混合物的黏附。图6通过图6A)从小鼠、人血浆分离的血纤维蛋白原和重组血纤维蛋白原；图6B)WT血纤维蛋白原(pFibγ411/411)、血纤维蛋白原γ初始异源二聚体(pFibγ427/411)和各种其混合物；图6C和图6D)WT血纤维蛋白原(pFibγ411/411)、血纤维蛋白原γ初始同源二聚体(rhFibγ427/427)和各种其混合物诱导的金黄色葡萄球菌USA300WT的聚丛，分别呈指数生长的细胞和稳定期的细胞。图7用图7A)2.0x108CFU；图7B)6.0x108CFU和图7C)7.0x108CFU金黄色葡萄球菌USA300WT挑战的血纤维蛋白原WT小鼠(FibγWT/WT)、杂合子(FibγWT/Δ5)和纯合子(FibγΔ5/Δ5)转基因血纤维蛋白原δ5小鼠的存活曲线。图8用图8A)5.0x108CFU和图8B)1.0x109CFU金黄色葡萄球菌USA300WT挑战之前，补充单一剂量的来自血浆的不同人血纤维蛋白原种类的血纤维蛋白原缺陷小鼠(Fib-/-)的存活曲线。图9用3.2x108CFU金黄色葡萄球菌USA300WT挑战之前，补充单一剂量的pFibγ427/γ411和pFibγ411/411的血纤维蛋白原WT小鼠的存活曲线。图10用6.0x108CFU金黄色葡萄球菌USA300WT挑战之后，与pFibγ411/411相比，补充重复剂量的pFibγ427/γ411的血纤维蛋白原缺陷小鼠的存活曲线。具体实施方式本专利技术涉及用于在治疗或预防感染中的用途的包括血纤维蛋白原γ初始变体的组合物。血纤维蛋白原γ初始变体具有两条α多肽链、两条β多肽链和两条γ多肽链，其中至少一条γ多肽链包括根据SEQIDNO.3的羧基-末端序列。在本专利技术的上下文中，血纤维蛋白原γ链的羧基-末端指的是WT血纤维蛋白原的γ链的氨基酸位置390-411。γ链内的具体氨基酸的位置可通过与WT血纤维蛋白原γ链的氨基酸序列(SEQIDNO.6)的比对来确定。可比对γ链序列的所有或部分，特别是其羧基-末端。标准序列比对工具，比如例如Smith-Waterman算法，可用于比对。当与序列比对时，当比对分数是最高时，则认为该序列被比对了。在本专利技术的上下文中，术语野生型(WT)血纤维蛋白原指的是循环中的成熟的主要形式的人血纤维蛋白原，其由长度为610个氨基酸的Aα链、461个氨基酸的Bβ链和411本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗或预防感染的用途的组合物，所述组合物包括具有两条α多肽链、两条β多肽链和两条γ多肽链的变体血纤维蛋白原，其中至少一条所述γ多肽链包括根据SEQID NO.3的序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180424 EP 18168993.6;20180424 EP 18168996.91.一种用于治疗或预防感染的用途的组合物，所述组合物包括具有两条α多肽链、两条β多肽链和两条γ多肽链的变体血纤维蛋白原，其中至少一条所述γ多肽链包括根据SEQIDNO.3的序列。


2.根据权利要求1所述用途的组合物，其中一条所述γ多肽链包括根据SEQIDNO.1的序列并且另一条γ多肽链包括根据SEQIDNO.3的序列。


3.根据前述权利要求中任一项所述用途的组合物，其进一步包括不大于约75％的包括两条α多肽链、两条β多肽链和两条γ多肽链的血纤维蛋白原，其中两条γ多肽链羧基-末端为根据SEQIDNO.1的并且其中75％为按所述组合物中的总血纤维蛋白原的重量计。


4.根据前述权利要求中任一项所述用途的组合物，其中所述组合物中的所述血纤维蛋白原为重组的或血浆衍生的或其混合物。


5.根据前述权利要求中任一项所述用途的组合物，其中人或动物受试者中的所述感染是由结合至所述血纤维蛋白原γ链的羧基-末端的病原体引起的或与结合至所述血纤维蛋白原γ链的羧基-末端的病原体相关。


6.根据前述权利要求中任一项所述用途的组合物，其中所述感染是由选自由革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和真菌组成的组中的一种或多种病原体引起的。
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【专利技术属性】
技术研发人员：M·韦格曼，J·格林伯格，J·库普曼，
申请(专利权)人：菲布赖恩特公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL