一种不同茶类中百草枯的检测方法技术

本发明专利技术提供一种不同茶类中百草枯的检测方法，采用碱化沉淀、pH值调控、固相萃取和液相色谱串联质谱测定结合，建立了茶叶中百草枯残留量的液相色谱串联质谱仪同位素内标测定方法。本发明专利技术可使茶叶中大量茶多酚等杂质沉淀，有效提高固相萃取效率，减少基质对最终结果测定的影响；可校准不同类型茶叶基质差异以及前处理、仪器等因素所带来的回收率偏差，使方法整体适用性和准确性显著提高。在不同茶类中标准品当量浓度5、10和50μg/kg添加水平下，百草枯回收率为94.7％～105.7％，相对标准偏差RSD值为1.2％～8.3％，定量限在0.3～1μg/kg之间。本方法稳定，准确，灵敏，能满足不同茶类种百草枯残留检测需求。

【技术实现步骤摘要】
一种不同茶类中百草枯的检测方法
本专利技术属于农药残留量检测
，涉及百草枯农药残留量的测定方法，尤其涉及一种不同茶类百草枯的检测方法。
技术介绍
农药(Pesticides)是指用来防治危害农林牧业生产的有害生物和调节植物生长的化学药品。随着人类社会现代化水平的提高和经济规模的扩大，农药已被广泛应用于农林牧业生产等各个领域，但随之产生的农药残留问题也越来越受到各界关注和重视。百草枯是一种速效触杀型灭生性除草剂，具有一定内吸作用，可使植物绿色组织快速脱水变干枯死。百草枯由于其除草效果好且廉价等特点，被广泛应用于果园、桑园、茶园等农业生产领域。然而百草枯对人畜都具有很高的急性毒性，可经过皮肤、呼吸道和消化道等途径被人体吸收，造成机体的多系统毒性反应和不可逆损伤。另外百草枯慢性毒性研究表明长期累计摄入或接触低剂量百草枯可造成肺纤维化和指甲畸形等病理现象。因此对百草枯使用的安全性越来越受到关注，世界各国都严格限定了农产品中百草枯的最大残留量。我国GB2763-2018《食品安全国家标准食品中百草枯等43种农药最大残留限量》中规定了茶叶中百草枯的最大限量为0.2mg/kg，但该标准推荐检测方法SN/T0293-2014中所适用的植物范围并未涵盖茶叶样品。茶叶中百草枯的测定具有一定挑战，一方面由于百草枯本身其化学结构具有亲水极性等特点，往往以盐的形式残留于环境和作物中；另一方面与其他农产品相比，茶叶是一类具有复杂基质的典型样品，不但含水率低而且还含有大量茶多酚、咖啡碱、色素和糖类等杂质，同时茶叶的品种繁多且加工工艺差异性较大，综上因素都会对检测结果造成影响。因此亟待开发适用于各种茶类中百草枯残留检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种含有百草枯农药茶叶样品的检测方法/一种不同茶类百草枯的检测方法，通过以下步骤实现：(1)茶叶经植物磨粉碎过筛，得到粒径为0.075～0.150mm茶叶粉末。准确称取1.5～2.5g茶叶试样于50mL离心管，加入50～100μLd8-百草枯同位素内标，再加入15～25mL甲醇-0.1mol/L盐酸溶液(1:9～3:7，体积比)，涡旋振荡1.5～2.5min后超声波提取10～20min。经4500～5500rpm离心9～11min，取上清液5～10mL至50mL离心管，加入0.4～0.6mol/L强碱溶液0.8～1.1mL和8～12mmol/L磷酸二氢铵缓冲溶液0.8～1.1mL充分振荡，将提取液pH调至4～5之间，8000～10000rpm离心9～11min待净化。强碱溶液指氢氧化钾或氢氧化钠溶液。(2)将全部上清液转移至活化后WCX60mg/3cc小柱(小柱活化：先加1～2mL甲醇冲洗，再加1～2mL8～12mmol/L磷酸二氢铵缓冲溶液活化)，控制流速0.8～1.2mL/min，弃去流出液。依次用0.5～2mL8～12mmol/L磷酸二氢铵缓冲溶液和甲醇淋洗，最后用1～2mL甲酸-乙腈溶液(1:9～3:7，体积比)洗脱，收集洗脱液过0.22μm有机系滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。(3)液相色谱串联质谱检测分析色谱柱：ACQUITYUPLCBEHHILIC(2.1mm×150mm，2.1μm)；流动相A：0.1％～0.2％甲酸(体积比)150～200mmol/L甲酸铵水溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～1min，80％B；1～2min，80％～30％B；2～6min，30％B；6～7min，30％～80％B；8～10min，80％B；流速：0.3～0.4mL/min；进样量：3.0～5.0μL；柱温：35～40℃；运行时间：10min。离子源：电喷雾离子源(ESI)，温度500℃，电压5500V(ESI+)；雾化气(GS1)压力：334.7kPa；辅助气(GS2)压力：334.7kPa；气帘气(CurtianGas)压力：241.3kPa。本专利技术的另一个目的是提供所述方法在检测不同茶类样品中百草枯农药残留中的应用。本专利技术采用碱化沉淀、pH值调控、固相萃取和液相色谱串联质谱测定结合，建立了茶叶中百草枯残留量的液相色谱串联质谱仪同位素内标测定方法。碱化沉淀的作用是使茶叶中大量茶多酚等杂质沉淀，有效提高固相萃取效率，减少基质对最终结果测定的影响；添加d8-百草枯同位素内标用来校准不同类型茶叶基质差异以及前处理、仪器等因素所带来的回收率偏差，使方法整体适用性和准确性显著提高。在不同茶类(绿茶、红茶、白茶、乌龙茶、黑茶)中标准品当量浓度5、10和50μg/kg添加水平下，百草枯回收率经同位素内标校准后均介于94.7％～105.7％之间，相对标准偏差RSD值在1.2％～8.3％之间(n＝6)，方法定量限(LOQ)在0.3～1μg/kg之间(S/N＝10)。该方法稳定，准确，灵敏，能够满足不同茶类种百草枯残留检测需求。附图说明图1为本专利技术一个实施例中液相色谱串联质谱的二级质谱总离子流图。图2为实际乌龙茶样品中百草枯(A)和d8-百草枯内标(B)二级质谱总离子流图。图3为实际绿茶样品中百草枯(A)和d8-百草枯内标(B)二级质谱总离子流图。图4为实际红茶样品中百草枯(A)和d8-百草枯内标(B)二级质谱总离子流图。具体实施方式本专利技术结合附图和实施例作进一步说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本专利技术范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的测试仪器及条件：ABSciexTQ5500型串联三重四极杆质谱仪(美国Sciex公司)，LC-30A超高效液相色谱仪(日本岛津公司)；Mill-Q去离子水发生器(美国Millipore公司)；高速冷冻离心机(德国sigma有限公司)。下述实施例中百草枯及d8-百草枯标准物质：纯度≥95％(加拿大TRC公司)。实施例中所应用不同茶类样品均采购自茶叶市场。实施例1：一种含有百草枯农药茶叶样品的检测方法1.样品制备茶叶经植物磨粉碎过筛，得到粒径为0.075～0.150mm茶叶粉末。准确称取2.0g茶叶试样于50mL离心管，加入50或75或100μLd8-百草枯同位素内标，再加入15、20、25mL甲醇-0.1mol/L盐酸溶液(1:9、2:8、3:7，体积比)，涡旋振荡1.5、2、2.5min后超声波提取10、15、20min。经4500、5000、5500rpm离心9、10、11min，取上清液7.5、10、12.5mL至50mL离心管，加入0.5mol/L氢氧化钾或氢氧化钠溶液1mL和10mmol/L磷酸二氢铵缓冲溶液1mL充分振荡，将提取液pH调至4.8，8000、9000、10000rpm离心9、10、11min待净化。将全部上清液转移至活化后WCX60mg/3cc小柱(小柱活化：先加2mL甲醇冲洗，再加2mL10mmol/L磷酸二氢铵缓冲溶液活化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种不同茶类中百草枯的检测方法，其特征在于，通过以下步骤实现：/n(1)茶叶经植物磨粉碎过筛，得到茶叶粉末，称取茶叶粉末于离心管，加入d

【技术特征摘要】
1.一种不同茶类中百草枯的检测方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
(1)茶叶经植物磨粉碎过筛，得到茶叶粉末，称取茶叶粉末于离心管，加入d8-百草枯同位素内标，再加入甲醇-盐酸溶液，涡旋振荡后超声波提取10～20min，经离心9～11min，取上清液至离心管，加入强碱溶液和磷酸二氢铵缓冲溶液充分振荡，将提取液pH调至4～5之间，离心后待净化；
(2)将净化后的上清液转移至活化后WCX60mg/3cc小柱，控制流速0.8～1.2mL/min，弃去流出液，依次用缓冲溶液和甲醇淋洗，最后用甲酸-乙腈溶液洗脱，收集洗脱液过0.22μm有机系滤膜，供液相色谱-串联质谱分析；
(3)液相色谱串联质谱检测分析
色谱柱：ACQUITYUPLCBEHHILIC，2.1mm×150mm，2.1μm；流动相A：0.1％～0.2％甲酸、150～200mmol/L甲酸铵水溶液；流动相B：乙腈；梯度洗脱程序：0～1min，80％B；1～2min，80％～30％B；2～6min，30％B；6～7min，30％～80％B；8～10min，80％B；流速：0.3～0.4mL/min；进样量：3.0～5.0μL；柱温：35～40℃；运行时间：10min；
离子源：电喷雾离子源，温度500℃，电压5500V；雾化气压力：334.7kP...

【专利技术属性】
技术研发人员：诸力，陈红平，鲁成银，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33