本发明专利技术属于蜂蜜鉴别技术领域，具体涉及ɑ‑亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在翅果油蜂蜜鉴别中的应用。本发明专利技术还提出一种翅果油蜂蜜的鉴别方法，以ɑ‑亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物，利用超高效液相色谱‑高分辨质谱检测；所述ɑ‑亚麻酸与所述亚油酸的质量浓度比为(10‑13)：1。本发明专利技术首次提出以ɑ‑亚麻酸、亚油酸联合作为蜂蜜的特征识别物，开拓了蜂蜜特征标识物的范围。同时针对翅果油蜂蜜，建立了一套稳定的、准确率高的鉴别方法。
【技术实现步骤摘要】
ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在翅果油蜂蜜鉴别中的应用
本专利技术属于蜂蜜鉴别
，具体涉及ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在翅果油蜂蜜鉴别中的应用。
技术介绍
蜂蜜是蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中经过充分酿造而成的天然甜物质。蜜蜂从植物的花中采取含水量约为75％的花蜜或分泌物，存入自己第二个胃中，在蜜蜂体内多种转化酶的作用下，再由工蜂将转化后花蜜或分泌物存贮到巢洞中，用蜂蜡密封。经过15天左右反复酝酿，将各种维生素、矿物质和氨基酸丰富到一定的数值，同时把花蜜中的多糖转变成人体可直接吸收的单糖葡萄糖、果糖。用显微镜技术鉴定蜂蜜中花粉类型、含量以此来判定蜂蜜品种是目前蜂蜜品种鉴别较常用的方法。但是该方法的准确度和精确度易受蜂蜜中花粉含量、种类组成、产地等因素影响，而且需要经验丰富的专家进行判断。同时该方法在辨别纯蜂蜜品种方面还不够成熟，不能真实、客观地反应被检样品的特征；特别是对于小众蜂蜜，还需要特殊的花粉形态等专业知识辅佐。翅果油树(拉丁学名：ElaeagnusmollisDiels.)是胡颓子科、胡颓子属落叶直立乔木或灌木，子叶肥厚，含丰富的油脂，4-5月开花，8-9月结果。翅果油蜂蜜产量非常少，属于小众蜂蜜，目前市场上还未形成有关翅果油蜂蜜的成熟鉴别技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的是提出以ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在蜂蜜鉴别中的应用。所述蜂蜜为翅果油蜂蜜。本专利技术研究发现，翅果油蜂蜜有其特殊性，如还原糖(以果糖和葡萄糖为主)含量占78％左右，总含糖量达到80％以上，高于大众蜂蜜，含水率占15％左右。较高的含糖量会对常规蜂蜜检测方法产生干扰，导致检测结果不准确。本专利技术从现有170多种相关化合物中筛选出ɑ-亚麻酸、亚油酸联合使用作为翅果油蜂蜜的特征识别物，大大提高此类蜂蜜的检测准确性。研究发现，个别蜂蜜中也会含有ɑ-亚麻酸、亚油酸，对检测结果造成干扰，对此我们进一步确定了翅果油蜂蜜中ɑ-亚麻酸与亚油酸存在特定的浓度比例，即所述ɑ-亚麻酸与亚油酸的质量浓度比为(10-13)：1，这一指标更能够反映翅果油蜂蜜的特征，提高鉴别的准确性。同时为了更进一步提高优质翅果油蜂蜜的鉴别准确性，本专利技术确定所述ɑ-亚麻酸的含量≥100mg/kg；所述亚油酸的含量≥10mg/kg作为优质的翅果油蜂蜜的鉴别依据。本专利技术的第二目的是提供一种翅果油蜂蜜的鉴别方法，以ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物，利用超高效液相色谱-高分辨质谱检测技术；其中所述ɑ-亚麻酸与所述亚油酸的质量浓度比为(10-13)：1，并以此判断翅果油蜂蜜的真伪。优选地，所述ɑ-亚麻酸的含量≥100mg/kg；所述亚油酸的含量≥10mg/kg，可以此判断翅果油蜂蜜的品质。所述超高效液相色谱-高分辨质谱检测的条件为：色谱条件：流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：0.1％甲酸乙腈；进样量：2μL；柱温：40℃；流速0.3mL/min；后运行时间5min；梯度洗脱程序：质谱条件:ESI离子源；载气温度320℃；气体流速8L/min；喷雾器压力40psi；毛细管电压3500V；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；扫描模式：负离子扫描模式。为了进一步提高检测准确性，本专利技术还提出对样品进行预处理优化。所述样品预处理为：将样品加水后超声溶解，固相萃取，洗脱；其中所述超声的条件为：功率55-65kHz，优选60kHz功率超声10min；和/或，所述固相萃取的活化试剂为甲醇和纯水；和/或，所述固相萃取的流速为1-1.5mL/min；和/或，所述洗脱采用的试剂为甲醇。与现有技术相比，本专利技术有益效果如下：1、首次提出以ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为蜂蜜的特征识别物，开拓了蜂蜜特征标识物的范围。2、针对翅果油蜂蜜，建立了一套稳定的、准确率高的鉴别方法。附图说明图1为α-亚麻酸标准品提取离子m/z277.2173色谱图。图2为翅果油蜂蜜提取离子m/z277.2173色谱图。图3为亚油酸标准品提取离子m/z279.2330色谱图。图4为翅果油蜂蜜提取离子m/z279.2330色谱图。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1验证准确性试验1、检测样品：第一组：2018年、2019年从翅果油植物周围蜂场采集的翅果油蜂蜜，共36个样品；第二组：已知油菜、洋槐、枣花蜂蜜各3个样品，共9个样品。2、样品预处理：称取第一组蜂蜜样品各15g，加入10mL去离子水，震荡溶解后60kHz功率超声10min。将Sep-PakC18固相萃取柱安放在固相萃取装置上，用5mL甲醇和5mL纯水依次对C18固相萃取小柱进行活化，样品溶液置于C18固相萃取柱，调节流速1-1.5mL/min，待样品溶液全部流出后，用10mL纯水淋洗C18小柱，负压下抽干。用8mL甲醇洗脱，收集洗脱液，常温下氮气吹干。用1mL甲醇复溶，0.22μm尼龙滤膜过滤，进样。第二组蜂蜜样品处理步骤同第一组1。3、超高效液相色谱-高分辨质谱检测的条件：超高效液相色谱-高分辨质谱(HPLC-Q-TOF/MS，6545)，美国安捷伦科技有限公司；色谱条件：色谱柱AgilentEclipsePlusC18(2.1×100mm，1.8μm)；流动相为0.1％甲酸水溶液(A)、0.1％甲酸乙腈(B)；进样量2μL；柱温40℃；流速0.3mL/min；后运行时间5min。梯度洗脱程序：质谱条件:ESI离子源；载气温度320℃；气体流速8L/min；喷雾器压力40psi；毛细管电压3500V；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；扫描模式：负离子扫描模式。4、检测结果：第一组蜂蜜的检测结果显示，翅果油蜂蜜中α-亚麻酸和亚油酸的质量浓度比在(10-13)：1之间；且所述ɑ-亚麻酸的含量≥100mg/kg，所述亚油酸的含量≥10mg/kg。第一组蜂蜜的检测结果显示，油菜、洋槐、枣花蜂蜜中含有α-亚麻酸和亚油酸，但两者质量浓度比例在(1-3)：1之间。5、结果分析从检测结果来看，本专利技术所述鉴别方法准确、可靠，且稳定性好、重复性佳。以下对特征物进行具体说明：α-亚麻酸是有三个双键的多元不饱和脂肪酸，是一种ω-3必需脂肪酸，用于提高智力，抗血栓，保肝。亚油酸是一种必需脂肪酸，能降低血液胆固醇，预防动脉粥样硬化。化合物信息：α-亚麻酸，分子式：C18H30O2，分子量:278.4296，加合形式[M-H],精确质量数277.2173，亚油酸，分子式：C18H32O2，分子量280.44，加合形式[M-H],精确质量数279.2330。图1为α-亚麻酸标准品提本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在蜂蜜鉴别中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物在蜂蜜鉴别中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蜂蜜为翅果油蜂蜜。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述ɑ-亚麻酸与所述亚油酸的质量浓度比为(10-13)：1。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述ɑ-亚麻酸的含量≥100mg/kg。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述亚油酸的含量≥10mg/kg。
6.一种翅果油蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，以ɑ-亚麻酸、亚油酸联合作为特征识别物，利用超高效液相色谱-高分辨质谱检测；所述ɑ-亚麻酸与所述亚油酸的质量浓度比为(10-13)：1。
7.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，所述ɑ-亚麻酸的含量≥100mg/kg。
8.根据权利要求6或7所述的鉴别方法，其特征在于，所述亚油酸的含量≥...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵柳微，王凯，吴黎明，薛晓锋，任彩君，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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