一种从血清或血浆中提取外泌体的方法技术

本发明专利技术公开了一种操作简便、成本低，提取效率高、外秘体大小均匀的从血清或血浆中的提取外泌体的方法，本发明专利技术所提供的提取外泌体的方法包括以下步骤：去除细胞碎片、超速离心、上清过滤、上清加入聚沉剂、超速离心、PBS重悬沉淀。经实验表明，本发明专利技术方法提取的外泌体大小均匀，多分布在30‑80nm；其标志蛋白的含量高，并且能够去除部分杂蛋白，提高外泌体的提取效率；并且此法提取外泌体操作简单，耗时较少。

【技术实现步骤摘要】
一种从血清或血浆中提取外泌体的方法
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种从血清或血浆中提取外泌体的方法。
技术介绍
外泌体(Exosome)发现于1986年，是一种直径约30-150nm的双层脂膜囊泡状结构小体，可由机体内多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹水、羊水等体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)以及功能性的mRNA、miRNA等生物活性物质。虽然外泌体的功能及临床应用已经被许多研究证实，但目前简便高效提纯外泌体的方法依然是限制了外泌体的研究进展速度，目前常用的提取方法有超速离心法、蔗糖密度梯度离心法、PEG沉淀法、磁珠法以及膜亲和柱法等，超速离心法是外泌体提取的金标准，但超速离心法耗时耗力，并且提取率低；沉淀法虽然简单，但会同时沉淀许多杂蛋白，并且商品化试剂成本高。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术旨在提供一种操作简便、成本低，提取效率高、外泌体大小均匀的从血清或血浆中提取的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从血清或血浆中提取外泌体的方法，其特征在于按如下的步骤进行：/n血清以2000×g，4℃，离心20min，去除细胞碎片沉淀，保留上清液；/n将步骤1）中得到的上清液以30000×g，4℃，离心20min，仔细吸出上清液保留；/n将步骤2）中得到的上清液通过截留分子量为3KD的滤膜，收集滤液；/n向步骤3）中得到的滤液中加入沉淀剂，混匀，放置于2-8℃环境中孵育30-60min；所述的沉淀剂：滤液的重量分数比为：3-6:1；所述的沉淀剂采用PEG2000、重水、聚乙烯醇(PVA）、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）、共聚维酮S-630、羧甲基纤维素（CMC）、海藻酸钠一种或几种的混合物；/n将步...

【技术特征摘要】
1.一种从血清或血浆中提取外泌体的方法，其特征在于按如下的步骤进行：
血清以2000×g，4℃，离心20min，去除细胞碎片沉淀，保留上清液；
将步骤1）中得到的上清液以30000×g，4℃，离心20min，仔细吸出上清液保留；
将步骤2）中得到的上清液通过截留分子量为3KD的滤膜，收集滤液；
向步骤3）中得到的滤液中加入沉淀剂，混匀，放置于2-8℃环境中孵育30-60min；所述的沉淀剂：滤液的重量分数比为：3-6:1；所述的沉淀剂采用PEG2000、重水、聚乙烯醇(PVA）、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）、共聚维酮S-630、羧甲基纤维素（CMC）、海藻酸钠一种或几种的混合物；
将步骤4）中孵育好的样品，置于120000×g，4℃，超速离心90-120min，弃上清液，保留沉淀；
将步骤5）中得到的沉淀以100ulPBS重悬，分装，储存于-80℃备用。


2.权利要求1所述的从血清或血浆中提取外泌体的方法，其中所述的步骤4）中的沉淀剂：滤液5:...

【专利技术属性】
技术研发人员：田蕾，刘晓华，裘著革，闫峻，李康，谭亦哲，刘子怡，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12