一种高效快速分离血浆外泌体的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效快速分离血浆外泌体的方法，包括以下步骤：步骤一：配制得亲水聚合物溶液；步骤二：稀释得稀释后的血浆；步骤三：离心去除血浆中的细胞成分得去除细胞的血浆；步骤四：进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；步骤五：使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；步骤六：使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；步骤七：加入200μl氯仿并振荡15秒后得振荡后的外泌体溶液；步骤八：离心15分钟得分层的外泌体溶液；步骤九：吸取最上层的无色液体得上清层液体；步骤十：加入同等体积的异丙醇进行沉淀得高纯度的外泌体沉淀物。本发明专利技术属于生物技术技术领域，具体是一种操作简单、成本低、能够高效的分离和提纯外泌体的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种高效快速分离血浆外泌体的方法
本专利技术属于生物
，具体是指一种高效快速分离血浆外泌体的方法。
技术介绍
外泌体是由细胞分泌而来具有杯状形态、双层膜结构的微小囊泡，外泌体天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中，甚至肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞如免疫细胞、神经细胞和干细胞等，都可以产生并释放外泌体，外泌体携带大量特异性的蛋白质以及功能性的mRNA、miRNA等生物活性物质，其主要功能为在细胞之间传递信息，并在多种生物状态与疾病中发挥着重要的生理病理学功能，包括肿瘤发生，血管生成，免疫抑制，转移等，这为疾病的检测提供了新的方向和方法。因此，对于外泌体的研究已经变得越来越广泛和深入，现有技术的方法提取得到的外泌体，收率较低，颗粒范围大，且纯度不高，易含有与外泌体尺寸特征类似的蛋白质颗粒。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种高效快速分离血浆外泌体的方法，具体是一种操作简单、成本低、能够高效的分离和提纯外泌体的方法。本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术提供了一种高效快速分离血浆外泌体的方法，包括以下步骤：步骤一：对聚乙二醇、硫酸葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮配制得亲水聚合物溶液；步骤二：对血浆用亲水聚合物溶液稀释得稀释后的血浆；步骤三：对稀释后的血浆进行离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片得去除细胞的血浆；步骤四：对去除细胞的血浆进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；步骤五：对沉淀外泌体使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；步骤六：对悬浮的外泌体使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；步骤七：对重新溶解的悬浮外泌体中加入200μl氯仿并振荡，振荡时间为15秒，振荡后得振荡后的外泌体溶液；步骤八：对振荡后的外泌体溶液以2000g的离心力进行离心，离心时间为15分钟并得分层的外泌体溶液；步骤九：对分层的外泌体吸取最上层的无色液体得上清层液体；步骤十：将与上清层液体同等体积的异丙醇加入到上清层液体中进行沉淀，沉淀后得高纯度的外泌体沉淀物。进一步地，所述步骤一中的聚乙二醇的分子量为2000～1200000道尔顿、硫酸葡聚糖的分子量为5000～20000道尔顿、聚乙烯吡络烷酮的分子量为40000～700000道尔顿。进一步地，作为优选的，所述步骤二中的亲水聚合物溶液为水溶液，所述亲水聚合物的总浓度为1～500mg/ml。进一步地，所述步骤三中的稀释后的血浆中血浆和亲水聚合物溶液的配比为1：1～2。进一步地，所述步骤三取稀释后的血浆以12000g的离心力进行离心，离心时间为30分钟。进一步地，所述步骤四中的稀释后的血浆以12000g的离心力进行，离心时间为30分钟，所述步骤四种去除细胞的血浆以110000g～160000g的离心力进行离心，离心时间为2小时。进一步地，所述步骤五中的酚和硫氰酸胍的单相溶液数量的取值范围为100μl～250μl。进一步地，所述步骤六中的悬浮的外泌体为每250μl加0.75ml酚和硫氰酸胍的单相溶液重新溶解悬浮的外泌体。进一步地，所述步骤七中的氯仿取值范围为150μl～250μl。采用上述方法本专利技术取得的有益效果如下：本专利技术提供了一种高效快速分离血浆外泌体的方法，采用水溶液、盐溶液和有机溶液多种亲水聚合物溶液，成本较低，利用离心的方式分离方法简单且效率较高且使外泌体自己分离分离出来所得的外泌体纯度更高，不含有其他杂质，具体是一种操作简单、成本低、能够高效的分离和提纯外泌体的方法。具体实施方式下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：一种高效快速分离血浆外泌体的方法，包括以下步骤：步骤一：对聚乙二醇、硫酸葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮配制得亲水聚合物溶液；步骤二：对血浆用亲水聚合物溶液稀释得稀释后的血浆；步骤三：对稀释后的血浆进行离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片得去除细胞的血浆；步骤四：对去除细胞的血浆进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；步骤五：对沉淀外泌体使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；步骤六：对悬浮的外泌体使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；步骤七：对重新溶解的悬浮外泌体中加入200μl氯仿并振荡，振荡时间为15秒，振荡后得振荡后的外泌体溶液；步骤八：对振荡后的外泌体溶液以2000g的离心力进行离心，离心时间为15分钟并得分层的外泌体溶液；步骤九：对分层的外泌体吸取最上层的无色液体得上清层液体；步骤十：将与上清层液体同等体积的异丙醇加入到上清层液体中进行沉淀，沉淀后得高纯度的外泌体沉淀物。所述步骤一中的聚乙二醇的分子量为5000道尔顿、硫酸葡聚糖的分子量为7000道尔顿、聚乙烯吡络烷酮的分子量为40000道尔顿。所述步骤二中的亲水聚合物溶液为水溶液，所述亲水聚合物的总浓度为100mg/ml。所述步骤三中的稀释后的血浆中血浆和亲水聚合物溶液的配比为1：1。所述步骤三取稀释后的血浆以12000g的离心力进行离心，离心时间为30分钟。所述步骤四中的稀释后的血浆以12000g的离心力进行，离心时间为30分钟，所述步骤四种去除细胞的血浆以110000g的离心力进行离心，离心时间为2小时。所述步骤五中的酚和硫氰酸胍的单相溶液数量的取值范围为100μl。所述步骤六中的悬浮的外泌体为每250μl加0.75ml酚和硫氰酸胍的单相溶液重新溶解悬浮的外泌体。所述步骤七中的氯仿取值为150μl。实施例2：一种高效快速分离血浆外泌体的方法，包括以下步骤：步骤一：对聚乙二醇、硫酸葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮配制得亲水聚合物溶液；步骤二：对血浆用亲水聚合物溶液稀释得稀释后的血浆；步骤三：对稀释后的血浆进行离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片得去除细胞的血浆；步骤四：对去除细胞的血浆进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；步骤五：对沉淀外泌体使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；步骤六：对悬浮的外泌体使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；步骤七：对重新溶解的悬浮外泌体中加入200μl氯仿并振荡，振荡时间为15秒，振荡后得振荡后的外泌体溶液；步骤八：对振荡后的外泌体溶液以2000g的离心力进行离心，离心时间为15分钟并得分层的外泌体溶液；步骤九：对分层的外泌体吸取最上层的无色液体得上清层液体；步骤十：将与上清层液体同等体积的异丙醇加入到上清层液体中进行沉淀，沉淀后得高纯度的外泌体沉淀物。所述步骤一中的聚乙二醇的分子量为7000道尔顿、硫酸葡聚糖的分子量为9000道尔本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效快速分离血浆外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：对聚乙二醇、硫酸葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮配制得亲水聚合物溶液；/n步骤二：对血浆用亲水聚合物溶液稀释得稀释后的血浆；/n步骤三：对稀释后的血浆进行离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片得去除细胞的血浆；/n步骤四：对去除细胞的血浆进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；/n步骤五：对沉淀外泌体使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；/n步骤六：对悬浮的外泌体使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；/n步骤七：对重新溶解的悬浮外泌体中加入200μl氯仿并振荡，振荡时间为15秒，振荡后得振荡后的外泌体溶液；/n步骤八：对振荡后的外泌体溶液以2000g的离心力进行离心，离心时间为15分钟并得分层的外泌体溶液；/n步骤九：对分层的外泌体吸取最上层的无色液体得上清层液体；/n步骤十：将与上清层液体同等体积的异丙醇加入到上清层液体中进行沉淀，沉淀后得高纯度的外泌体沉淀物。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效快速分离血浆外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：对聚乙二醇、硫酸葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮配制得亲水聚合物溶液；
步骤二：对血浆用亲水聚合物溶液稀释得稀释后的血浆；
步骤三：对稀释后的血浆进行离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片得去除细胞的血浆；
步骤四：对去除细胞的血浆进行超高速离心沉淀得沉淀外泌体；
步骤五：对沉淀外泌体使用磷酸缓冲盐溶液悬浮得悬浮的外泌体；
步骤六：对悬浮的外泌体使用酚和硫氰酸胍的单相溶液得重新溶解的悬浮外泌体；
步骤七：对重新溶解的悬浮外泌体中加入200μl氯仿并振荡，振荡时间为15秒，振荡后得振荡后的外泌体溶液；
步骤八：对振荡后的外泌体溶液以2000g的离心力进行离心，离心时间为15分钟并得分层的外泌体溶液；
步骤九：对分层的外泌体吸取最上层的无色液体得上清层液体；
步骤十：将与上清层液体同等体积的异丙醇加入到上清层液体中进行沉淀，沉淀后得高纯度的外泌体沉淀物。


2.根据权利要求1所述的一种高效快速分离血浆外泌体的方法，其特征在于：所述步骤一中的聚乙二醇的分子量为2000～1200000道尔顿、硫酸葡聚糖的分子量为5000～20000道尔顿、聚乙烯吡络烷酮的分子量为40000～700000道尔顿。


3.根据权利要求2所述的一种高效快速分离血浆...

【专利技术属性】
技术研发人员：周崧雯，万小英，邓沁芳，谢博雄，
申请(专利权)人：周崧雯，
类型：发明
国别省市：上海;31