促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法技术

本发明专利技术提供了一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法，其方法包括步骤：(1)获取间充质干细胞，并传代培养；(2)将间充质干细胞接种在培养板上，于培养基A中培养1～2天；之后于培养基B中培养，每天更换一次培养基，共培养7～8天；然后，于培养基C中培养12～15天，获得胰岛细胞。本发明专利技术可以获得成熟的胰岛样细胞，并可以使得分化的细胞内外均具有含量高的胰岛素和C‑肽。

【技术实现步骤摘要】
促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法
本专利技术属于生物
，涉及细胞培养技术，具体涉及一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法。
技术介绍
胰岛移植是治疗糖尿病的有效疗法之一，但是胰岛来源不足却严重制约了该疗法的临床应用。利用干细胞强大的自我更新能力以及分化潜能，可解决胰岛来源不足的问题。现有技术通常比较关注分化细胞数目的多寡，而不重视分化细胞中的胰岛素含量和C-肽含量，使得分化培养技术存在缺陷。目前，现有技术中所得的胰岛β样细胞胞外胰岛素含量仅可达到200多ng/mg的水平。因此，本领域亟需一种可以提高胰岛β样细胞保内外胰岛素含量的方法。
技术实现思路
针对现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法，本专利技术方法可以使得分化的细胞内外的胰岛素和C-肽(C-peptide)的含量显著的增加。为了实现上述目的，本专利技术提供的方案如下：一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法，所述方法包括如下步骤：...

【技术保护点】
1.一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)获取间充质干细胞，并传代培养；/n(2)将间充质干细胞接种在培养板上，于培养基A中培养1～2天；之后于培养基B中培养，每天更换一次培养基，共培养7～8天；然后，于培养基C中培养12～15天，获得胰岛细胞；/n其中，所述培养基A为含有10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基；/n所述培养基B以DMEM/F12培养基为基础培养基，并添加20～25μmol白藜芦醇、2～3μmol全反式维甲酸、6～8μmol尼克酰胺、0.1～0.2μmol五肽胃泌素、1～10μmol L-谷氨酰胺、0.1～0.2μm...

【技术特征摘要】
1.一种促进间充质干细胞定向分化为胰岛细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)获取间充质干细胞，并传代培养；
(2)将间充质干细胞接种在培养板上，于培养基A中培养1～2天；之后于培养基B中培养，每天更换一次培养基，共培养7～8天；然后，于培养基C中培养12～15天，获得胰岛细胞；
其中，所述培养基A为含有10％的胎牛血清的DMEM/F12培养基；
所述培养基B以DMEM/F12培养基为基础培养基，并添加20～25μmol白藜芦醇、2～3μmol全反式维甲酸、6～8μmol尼克酰胺、0.1～0.2μmol五肽胃泌素、1～10μmolL-谷氨酰胺、0.1～0.2μmol血小板源性生长因子、1～2μmolL-谷氨酰胺成纤维细胞生长因子、0.3～0.5μmol胰高血糖素样肽I；
所述培养基C以DMEM/F12培养基为基础培养基，并添加20～25μmol白藜芦醇、2～3μmol全反式维甲酸、6～8μmol尼克酰胺、1～10μmolL-谷氨酰胺、0.1～0.2μmol血小板源性生长因子、1～2μmolL-谷氨酰胺成纤维细胞生长因子、0.05～0.1μmol胰岛素样生长因子、0.01～0.02μmol激活素A。


2.根据权利要求1所述的增殖培养方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋筱荭，邹弼丞，钟立武，汪敬雄，王峰，
申请(专利权)人：四川省恩乐生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51